動(dòng)物繁殖學(xué)實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物繁殖學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一公母畜生殖器官標(biāo)本及睪丸、卵巢組織切片的觀察一、目的要求認(rèn)識(shí)各種公母畜生殖器官的位置、形態(tài)、大小及解剖結(jié)構(gòu)特點(diǎn)；了解生殖器官的結(jié)構(gòu)與生理功能的關(guān)系。通過家畜睪丸、卵巢組織切片觀察，了解家畜睪丸、卵巢的組織結(jié)構(gòu)及其形態(tài)。了解精子的發(fā)生和卵子的發(fā)生、卵泡的發(fā)育過程及其形態(tài)。為學(xué)習(xí)家畜繁殖學(xué)及更好地掌握和應(yīng)用繁殖技術(shù)奠定解剖學(xué)基礎(chǔ)。二、材料和方法（一）材料1．各種公母畜生殖器官浸制標(biāo)本及掛圖。2．大磁方盤、解剖刀、剪刀、鑷子、金屬探針。3．公畜睪丸、母畜卵巢組織切片，顯微鏡。（二）方法用掛圖與標(biāo)本觀察相結(jié)合；比較各種家畜生殖器官的異同。教師先結(jié)合掛圖進(jìn)行講解，使學(xué)生對(duì)公畜睪丸、母畜卵巢組織學(xué)結(jié)構(gòu)及精子發(fā)生、卵泡發(fā)育過程有了初步的了解。然后再用顯微鏡進(jìn)行睪丸、卵巢組織切片的觀察。三、內(nèi)容（一）公畜生殖器官的觀察公畜生殖器官包括：睪丸（及陰囊和精索）、附睪、輸精管、尿生殖道、副性腺及陰莖。1．睪丸：家畜睪丸成對(duì)，分別位于陰囊的兩個(gè)腔內(nèi)。均為長(zhǎng)卵圓形。一側(cè)有附睪附著，為附睪緣；另一側(cè)為游離緣。隨畜種不同大小有差別。牛、羊、豬的睪丸相對(duì)比較大，以羊的睪丸為最大。馬（驢）陰囊位于兩股之間的腹股溝區(qū)，睪丸長(zhǎng)軸與地面平行，附睪位于睪丸的背外緣，附睪頭在前、尾在后。牛、羊陰囊較馬陰囊稍靠前，位于前腹股溝區(qū)，睪丸長(zhǎng)軸與地面垂直，附睪位于睪丸的后側(cè)，附睪頭在上、尾在下。豬的陰囊位于股部之后，睪丸長(zhǎng)軸傾斜，前低后高，附睪位于睪丸的前上緣，附睪頭在前下方、尾在后上方。2．附睪：位于睪丸的附著緣。分頭、體、尾三部分。頭膨大，由睪丸輸出管相連結(jié)。睪丸輸出管匯合成一條較粗而長(zhǎng)的附睪管盤曲成附睪體和附睪尾，最后過渡為輸精管。3．精索、輸精管：輸精管由附睪管延續(xù)而來，而后進(jìn)入由睪丸系膜、血管、淋巴管、神經(jīng)、睪內(nèi)體提肌共同組成的精索（成銳三角形）。沿腹股溝管進(jìn)入腹腔，此后即和精索內(nèi)的其它部分分開。單獨(dú)向后上方進(jìn)入骨盆腔。至膀胱背面，兩側(cè)輸精管都進(jìn)入尿生殖皺襞內(nèi)。在此處輸精管變粗，形成輸精管壺腹。馬（尤其是驢）的輸精管壺腹發(fā)達(dá)。豬的輸精管壺腹不明顯。牛、羊的輸精管壺腹比較明顯，粗細(xì)介于馬和豬之間。輸精管壺腹部的實(shí)質(zhì)為分支管狀腺體組織，有分泌物排出。4．副性腺：（1）精囊腺：成對(duì)位于膀胱頸背面的兩旁，輸精管末端的兩側(cè)。與同側(cè)的輸精管形成射精管，共同開口于尿生殖起始部的精阜上。馬的精囊腺呈梨形囊狀，向后縮小成輸出管。牛、羊、豬的精囊腺都是由致密的分葉腺體組織構(gòu)成。牛、羊的精囊腺比馬的小。而豬的精囊腺特別發(fā)達(dá)。（2）前列腺：位于膀胱尿道開始處精囊腺之后。馬的前列腺由兩個(gè)側(cè)葉和一個(gè)峽部所構(gòu)成，形似蝴蝶，為復(fù)管狀腺，有許多排出管開口于精阜的兩旁。牛和豬的前列腺分為體部和擴(kuò)散部?jī)刹糠?。體部位于膀胱頸與骨盆尿道交界處，牛的為棱形，豬的為紐扣形。豬的體部小，而擴(kuò)散部很始延伸到子宮角尖端。輸卵管的前1/3段較粗，稱輸卵管壺腹，是精子和卵子結(jié)合受精的部位；后2/3段變細(xì)，稱為輸卵管峽部。兩者的連接部稱為壺峽連接部。輸卵管的子宮端是與子宮角尖端相連接，成為宮管連接部。馬：輸卵管有許多彎曲，輸卵管的腹腔端擴(kuò)大呈漏斗狀，其邊緣不整齊，形成許多皺襞，稱為輸卵管傘。輸卵管傘附著在卵巢的排卵窩旁邊。卵巢囊比較發(fā)達(dá)。宮管連接部界限明顯。牛、羊：輸卵管彎曲較少。輸卵管傘部發(fā)達(dá)。輸卵管和子宮角之間的界限不明顯。豬：輸卵管有許多小彎曲。輸卵管傘比較大。其開口接近卵巢囊的底部。輸卵管和子宮角之間界限明顯。3．子宮：大部分位于腹腔，少部分位于骨盆腔。前接輸卵管，后接陰道。借助于子宮闊韌帶懸于腰下。分子宮角、子宮體、子宮頸三部分。馬：整個(gè)子宮呈“Y”形。為雙子宮。兩個(gè)子宮角不如雙角子宮那樣長(zhǎng)、那樣明顯。子宮角為扁帶狀。稍彎曲呈弓形，似香蕉。子宮角小彎在上，大彎在下，小彎上的漿膜和子宮闊韌帶相連接。妊娠時(shí)，胎兒占據(jù)兩個(gè)子宮角。子宮粘膜上有大量縱行皺褶。子宮體接于兩個(gè)子宮角聯(lián)合處，子宮體的下部稱為子宮底。馬的子宮體較其它家畜的發(fā)達(dá)。子宮頸前接子宮體，子宮頸外口突出于陰道腔2～4cm，構(gòu)成明顯的子宮頸陰道部。子宮頸管的粘膜形成許多高低不等的縱形皺襞。子宮頸通常是自然關(guān)閉的，但在發(fā)情或分娩以及發(fā)生某些疾病時(shí)松弛而張開。牛、羊：子宮形狀似彎曲的綿羊角。子宮角向前下方彎曲再向后上方。子宮角的大彎在上，小彎在下。兩個(gè)子宮角在靠近子宮體的一段外表彼此粘連，在內(nèi)部有縱隔將之分開，在粘連部分的上緣有一明顯的縱溝（稱為角間溝）。這類子宮為雙角子宮。每個(gè)子宮角都是從基部開始向前逐漸變細(xì)。子宮粘膜上有突起的子宮阜（成為懷孕牛、羊母體胎盤）。牛和羊的子宮阜不同之點(diǎn)在于羊的子宮阜的中央有一凹陷。牛、羊的子宮體均比較短。牛、羊的子宮頸肌肉層發(fā)達(dá)，質(zhì)地較馬的堅(jiān)硬，在牛的直腸檢查時(shí)很容易摸到。牛的子宮頸管道內(nèi)不僅有縱形皺襞，而且還有大而橫行的皺襞，使子宮頸管關(guān)閉很緊。羊的這種皺襞更明顯。子宮頸外口突出于陰道中，經(jīng)產(chǎn)牛肥大，呈菜花狀。豬：子宮角在靠近子宮體5～10cm的部分也是彼此相連的。分開的兩個(gè)子宮角形成許多彎曲，很似小腸。成熟母豬的子宮角長(zhǎng)100～150cm。豬的子宮體不明顯。豬的子宮頸長(zhǎng)約10～18cm，子宮頸管內(nèi)粘膜有兩排交錯(cuò)的半圓形突起，呈連續(xù)性的放射狀，中間的較大，兩端的較小。子宮頸的前方與子宮體、后方與陰道均沒有明顯的界限，而是逐漸地過渡，因此沒有子宮頸陰道部。人工授精時(shí)輸精管很容易插入。此外，還有雙子宮型動(dòng)物，如兔和大鼠，兩個(gè)子宮角的每一個(gè)具有分開的子宮頸管道，通向陰道。4．陰道：呈管狀，壁薄，具有彈性。為母畜的交配器官。位于骨盆腔內(nèi)，上為直腸，下為膀胱和尿道，前接子宮，后接尿生殖前庭。馬、牛的陰道長(zhǎng)約25～30cm；豬、羊約10～15cm。粘膜層為復(fù)層扁平上皮細(xì)胞，發(fā)情時(shí)發(fā)生角質(zhì)化。無腺體。陰道前部子宮頸口周圍形成一個(gè)環(huán)形隱窩稱為陰道穹隆。豬無陰道穹隆。牛、羊交配時(shí)，精液射到陰道穹隆附近；馬、豬精液則射到子宮頸或子宮內(nèi)。5．外生殖器官（也稱外陰部）：包括尿生殖前庭、陰唇和陰蒂。（1）尿生殖前庭：是指生殖系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)公共的雌性管道部分。即尿道外口至陰門裂的部分。馬、牛的前庭較長(zhǎng)；豬、羊的較短。于陰道交界處腹側(cè)，馬和羊有很明顯的陰道瓣（一粘膜褶）；牛和豬不明顯。馬的前庭小腺和前庭大腺分別開口于前庭底部和頂部的數(shù)個(gè)乳頭上。牛尿道腹側(cè)有一粘膜形成的盲囊。前庭大腺開口于側(cè)壁一小盲囊。羊的前庭大腺似一小豆，開口于前庭側(cè)壁。有時(shí)沒有。豬的前庭大腺開口于中線兩旁的兩條粘膜皺褶之間。前庭小腺開口于前庭底中部凹陷兩旁的一對(duì)皺褶之間。（2）陰唇、陰蒂：陰唇分左右兩片而構(gòu)成陰門，兩片陰唇的上端及下端聯(lián)合起來形成陰門上角和下角。馬的陰門上角較尖，陰門下角較圓；牛、羊及豬的陰門相反，下角較尖，呈銳角，且垂至坐骨弓的下面。在陰門下角內(nèi)包含有球形凸起物即陰蒂，由勃起組織（海綿體）構(gòu)成，有豐富的感覺神經(jīng)分布。陰蒂與雄性龜頭同源。6．子宮動(dòng)脈（子宮中動(dòng)脈）：牛的子宮動(dòng)脈位于岬部之前、最后腰椎處，與臍動(dòng)脈共同于髂內(nèi)動(dòng)脈，沿子宮闊韌帶走向子宮角小彎進(jìn)入子宮。馬的子宮動(dòng)脈起于髂內(nèi)動(dòng)脈之前的髂外動(dòng)脈，或者與髂外動(dòng)脈共同起于腹主動(dòng)脈，它沿子宮闊韌帶的中部行走，到達(dá)子宮角小彎而進(jìn)入子宮。子宮動(dòng)脈向前與卵巢動(dòng)脈子宮支，向后與尿生殖動(dòng)脈子宮支吻合。（三）公畜睪丸的組織學(xué)觀察1．低倍鏡觀察：（1）被膜：由漿膜和白膜構(gòu)成。外層漿膜為一較薄的固有鞘膜，從腹膜延伸而來。內(nèi)層白膜為彈性結(jié)締組織白色薄膜層，其中富有血管。白膜下為實(shí)質(zhì)部分，即睪丸的功能層。（2）睪丸縱隔和中隔：睪丸縱隔為睪丸的一端伸向睪丸實(shí)質(zhì)的結(jié)締組織素，并向四周發(fā)出許多放射狀的結(jié)締組織小梁，伸向白膜。這些結(jié)締組織小梁稱為睪丸中隔。豬的睪丸中隔較發(fā)達(dá)；牛、羊的薄而不完整。（3）睪丸小葉：睪丸中隔將睪丸實(shí)質(zhì)分成許多小葉，小葉的尖端朝向中央，小葉的基部朝向睪丸的表面。每個(gè)小葉由2～3條盤曲的曲精細(xì)管及血管和間質(zhì)細(xì)胞組成。曲精細(xì)管直徑約200μm。據(jù)估測(cè)，牛的曲精細(xì)管拉直，頭對(duì)頭相接，可長(zhǎng)達(dá)幾千米，占睪丸重量的80％。曲精細(xì)管在各小葉的尖端先各自匯合成直精細(xì)管，穿入睪丸縱隔結(jié)締組織內(nèi)，形成彎曲的導(dǎo)管網(wǎng)，稱為睪丸網(wǎng)（馬無此結(jié)構(gòu)），為精細(xì)管的收集管道。睪丸網(wǎng)又分出12～15條睪丸輸出管，匯入附睪頭，形成附睪管。2．高倍鏡觀察：（1）睪丸小葉的結(jié)構(gòu)：由曲精細(xì)管及其間質(zhì)細(xì)胞構(gòu)成。此外，還有血管、淋巴管等。（2）間質(zhì)細(xì)胞：又稱Leydig細(xì)胞。體積較大，分布于曲精細(xì)管之間，近似卵圓形或多角形，胞質(zhì)嗜酸性，核大而圓。具有分泌雄激素的功能。（3）曲精細(xì)管的結(jié)構(gòu)：曲精細(xì)管的管壁自外向內(nèi)由同心圓狀排列的結(jié)締組織、基膜和復(fù)層上皮構(gòu)成。上皮細(xì)胞成層地排列在基膜上，可分為足細(xì)胞核生精細(xì)胞兩種。（4）足細(xì)胞：又稱Sertoli細(xì)胞、支持細(xì)胞、營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞。體積較大而細(xì)長(zhǎng)。但數(shù)量較少。屬體細(xì)胞。呈輻射狀排列在曲精細(xì)管中，分散在各期生殖細(xì)胞之間，其底部附著在曲精細(xì)管的基膜上，游離端朝向管腔，常有許多各精子嵌在上面。該細(xì)胞高低不等，界限不清。細(xì)胞核較大，位于細(xì)胞的基部，著色較淺，具有明顯的核仁，但不顯示分裂現(xiàn)象。由于它的頂端有數(shù)個(gè)精子伸入胞漿內(nèi)，故一般認(rèn)為此種細(xì)胞是對(duì)生精細(xì)胞起著支持、營(yíng)養(yǎng)、保護(hù)等作用。足細(xì)胞失去功能，精子便不能成熟。（5）生精細(xì)胞（生殖細(xì)胞）：數(shù)量比較多，成群的分布在足細(xì)胞之間，大致排列成3～7層（同心圓排列）。根據(jù)不同發(fā)育階段及其形態(tài)特點(diǎn)又可分為：精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞、精（子）細(xì)胞和精子。精原細(xì)胞：位于最基層，緊貼基膜。細(xì)胞體積較小，呈圓形，常有分裂現(xiàn)象。是精子生成的干細(xì)胞。細(xì)胞質(zhì)比較清亮。細(xì)胞核大而圓，富含染色質(zhì)，因而著色較深。初級(jí)精母細(xì)胞：位于精原細(xì)胞上面，排成幾層，常顯示有分裂現(xiàn)象。細(xì)胞體積較大，呈圓形。細(xì)胞核呈球形，富有染色質(zhì)，故著色較深。分裂時(shí)，因染色體所處不同的活動(dòng)時(shí)期而呈線狀、棒狀或粒狀。在最初階段與精原細(xì)胞不易區(qū)別。隨著細(xì)胞離開基膜向管腔移動(dòng)，同時(shí)胞漿不斷增多，胞體不斷變大，具有明顯的胞核。次級(jí)精母細(xì)胞：位于初級(jí)精母細(xì)胞的內(nèi)側(cè)。體積較小。細(xì)胞呈圓形。細(xì)胞核為球形，染色質(zhì)細(xì)粒狀。由于該細(xì)胞很快分裂為兩個(gè)精子細(xì)胞，因而在切片上很難找到它。精子細(xì)胞：位于精母細(xì)胞內(nèi)側(cè)，靠近曲精細(xì)管的管腔。常排列成數(shù)層。并且多密集在足細(xì)胞游離端的周圍。細(xì)胞體積更小，胞漿少。胞核呈球形，著色深。精子：位于或靠近曲精細(xì)管的管腔內(nèi)。有明顯的頭和尾，呈蝌蚪狀。頭部含有核物質(zhì)，染色很深，常深入足細(xì)胞的頂部胞漿中。尾部朝向管腔。精子發(fā)育成熟后脫離曲精細(xì)管的管壁，游離在管腔中，隨后進(jìn)入附睪。精子是一種獨(dú)特的細(xì)胞，不含細(xì)胞質(zhì)。成熟后還有前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的能力。3．精子發(fā)生過程（spermatogenesis）可分為兩個(gè)明顯的時(shí)期。第一時(shí)期：精細(xì)胞生成：精原細(xì)胞經(jīng)一系列分裂形成精子細(xì)胞。第二時(shí)期：精子形成（spermiogenesis）：精子細(xì)胞變形成為精子。原始生殖細(xì)胞在移向胚胎睪丸后，經(jīng)一系列有絲分裂形成性原細(xì)胞。初情期前，性原細(xì)胞分化成A0型精原細(xì)胞，為所有其它精原細(xì)胞的干細(xì)胞。A0、A1和A2精原細(xì)胞均沿著曲精細(xì)管基膜排列。A2型精原細(xì)胞分裂形成一個(gè)休眠（A1型）精原細(xì)胞和一個(gè)活動(dòng)的（A3型）精原細(xì)胞。牛和羊的活動(dòng)型精原細(xì)胞經(jīng)4次有絲分裂，最后形成16個(gè)初級(jí)精母細(xì)胞。初級(jí)精母細(xì)胞不久進(jìn)入成熟分裂的前期，經(jīng)過中期、后期和末期逐漸完成第一次成熟分裂，產(chǎn)生兩個(gè)較小的次級(jí)精母細(xì)胞。其核內(nèi)染色體數(shù)目減半，這種分裂又稱為減數(shù)分裂。幾個(gè)小時(shí)后，次級(jí)精母細(xì)胞進(jìn)行第二次成熟分裂，形成兩個(gè)精子細(xì)胞。精子細(xì)胞不再進(jìn)行分裂，經(jīng)過一系列復(fù)雜的形態(tài)變化，即分化為精子。對(duì)于綿羊，一個(gè)精原細(xì)胞的干細(xì)胞可以分裂為16個(gè)初級(jí)精母細(xì)胞或64個(gè)精子。休眠的A1型精原細(xì)胞經(jīng)有絲分裂，形成A2型精原細(xì)胞。這對(duì)于精子發(fā)生的持續(xù)進(jìn)行非常重要。隨著精子發(fā)生的進(jìn)行，生精細(xì)胞逐漸由曲精細(xì)管基膜移向管腔。精子發(fā)生整個(gè)過程的完成，羊需要46～49d；豬稍短些（36～40d）；牛長(zhǎng)些（56～63d）。（四）母畜卵巢的組織學(xué)觀察1．低倍鏡觀察：在低倍鏡下找出卵巢表面上皮和白膜，區(qū)分卵巢的皮質(zhì)部和髓質(zhì)部。（1）表面上皮：位于卵巢皮質(zhì)的最外層，為單層立方上皮細(xì)胞所組成。馬卵巢表面上皮僅分布于排卵窩。其余部分被漿膜覆蓋。（2）白膜：位于表面上皮的一薄層致密結(jié)締組織。（3）皮質(zhì)部：位于白膜下面、卵巢的外周部分（馬的則位于卵巢中央靠近排卵窩處）。由許多大小不等的發(fā)育卵泡和閉鎖卵泡、少量黃體以及較致密的結(jié)締組織所構(gòu)成。占卵巢的大部分，與髓質(zhì)無明顯界限。由于皮質(zhì)部含有卵泡和產(chǎn)生卵巢激素的細(xì)胞，故也稱“功能層”。（4）髓質(zhì)部：位于卵巢中央（馬則在卵巢周圍）。內(nèi)含有許多細(xì)小的血管、神經(jīng)和富有彈性纖維的疏松結(jié)締組織。2．高倍鏡觀察：（1）卵泡發(fā)育的觀察：每個(gè)卵泡都由位于中央的卵母細(xì)胞和圍繞在卵母細(xì)胞周圍的卵泡細(xì)胞所組成。有的卵泡在發(fā)育過程中可能退化而形成閉鎖卵泡。卵泡可根據(jù)發(fā)育程度不同而分成下列各期。1）原始卵泡：卵泡呈球形。卵原細(xì)胞有絲分裂增殖停止，形成初級(jí)卵母細(xì)胞。初級(jí)卵母細(xì)胞進(jìn)入第一次減數(shù)分裂，然后休止在前期的雙線期。初級(jí)卵母細(xì)胞位于中央，周圍包有一單層扁平的卵泡（顆粒）細(xì)胞。卵母細(xì)胞的體積比較大，中央有一圓形的泡狀核，核內(nèi)染色質(zhì)稀少，著色較淺，核仁明顯。卵泡細(xì)胞體積小，核扁圓形，著色深。所有的原始卵泡在出生前就形成了。它處于貯備狀態(tài)未進(jìn)入生長(zhǎng)。常常在皮質(zhì)外周成群的出現(xiàn)，稱作“卵窩”。據(jù)估計(jì)，一頭出生牛犢卵巢中央有大約75，000個(gè)原始卵泡。2）初級(jí)卵泡：初級(jí)卵母細(xì)胞迅速生長(zhǎng)，外有一層立方形的顆粒細(xì)胞包圍。此時(shí)，卵母細(xì)胞已有透明帶形成。并由卵泡顆粒細(xì)胞長(zhǎng)出絨毛滲透到透明帶內(nèi)，為卵母細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)。3）次級(jí)卵泡：初級(jí)卵泡經(jīng)過發(fā)育和生長(zhǎng)，即成為次級(jí)卵泡。卵母細(xì)胞體積基本不變，但外圍的卵泡顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)。卵母細(xì)胞由多層顆細(xì)胞所包圍。其外有卵泡膜形成。4）三級(jí)卵泡：卵泡體積增大。顆粒細(xì)胞之間有液體形成并將它們分開，形成卵泡腔。小卵泡腔合并成為大卵泡腔。初級(jí)卵母細(xì)胞逐漸發(fā)育增大，胞漿中卵黃顆粒增多。透明帶為較均一的厚層蛋白質(zhì)膜。卵泡細(xì)胞層增厚。5）成熟卵泡：也叫Graafian卵泡。三級(jí)卵泡進(jìn)一步成熟，形成充滿卵泡液的水泡，卵泡突出于卵巢表面。卵泡體積很大。卵泡腔擴(kuò)大。此時(shí)初級(jí)卵母細(xì)胞長(zhǎng)大成熟，核呈空泡狀，染色質(zhì)很少，核仁明顯。胞漿內(nèi)富有卵黃顆粒。排卵前即恢復(fù)并完成第一次減數(shù)分裂，結(jié)果形成大小不等的兩個(gè)細(xì)胞，大的細(xì)胞為次級(jí)卵母細(xì)胞，小的叫第一極體。透明帶變厚。極體呈卵圓形，位于透明帶與次級(jí)卵母細(xì)胞之間的卵黃周隙，只要由核質(zhì)構(gòu)成，以后逐漸退化。Graafian卵泡的卵泡壁由幾個(gè)功能細(xì)胞層構(gòu)成。最外層，為有較多纖維細(xì)胞層的外膜；向內(nèi)為內(nèi)膜層。這兩種細(xì)胞層由毛細(xì)血管網(wǎng)提供血液。外膜與內(nèi)膜層分界明顯，常合稱為卵泡膜。內(nèi)膜增厚，內(nèi)膜細(xì)胞肥大，呈圓形或多角形，類脂質(zhì)顆粒增多，細(xì)胞核為橢圓形。在內(nèi)膜層下面有一層基膜，將內(nèi)膜與最內(nèi)層細(xì)胞即顆粒細(xì)胞層分開。基膜阻止血管系統(tǒng)進(jìn)入顆粒細(xì)胞層。隨著卵泡腔擴(kuò)大，顆粒細(xì)胞層變薄，包圍卵泡腔。顆粒細(xì)胞排列整齊。有時(shí)可見到細(xì)胞分裂。此外，卵丘（顆粒細(xì)胞形成的小丘）位于卵泡腔的一側(cè)。卵丘和其它顆粒細(xì)胞包裹卵母細(xì)胞。與卵母細(xì)胞直接接觸的顆粒細(xì)胞呈輻射狀排列，稱作放射冠。排卵開始時(shí)。放射冠細(xì)胞與周圍的卵泡壁顆粒細(xì)胞之間開始出現(xiàn)裂隙，彼此的聯(lián)系疏松。牛、羊、豬的卵泡在排卵前（馬排卵后）完成第一次減數(shù)分裂，形成次級(jí)卵母細(xì)胞。隨即開始第二次減數(shù)分裂，然后休止在中期（M）。受精過程才使第二次減數(shù)分裂恢復(fù)并完成。結(jié)果產(chǎn)生合子（受精卵）及第二極體。因而，牛、羊、豬、馬等家畜沒有真正的卵子存在。6）閉鎖卵泡：初級(jí)卵泡退化后，一般不留痕跡。但生長(zhǎng)卵泡退化時(shí)，卵母細(xì)胞萎縮，透明帶皺縮塌陷，卵泡液被吸收，卵泡壁凹陷，以后結(jié)締組織侵入泡內(nèi)。（2）黃體：是排卵后的卵泡轉(zhuǎn)變成的富于血管的內(nèi)分泌器官。牛、羊、豬的黃體位于卵巢皮質(zhì)淺層突出于表面。馬的黃體則完全埋藏在卵巢深部。根據(jù)黃體發(fā)育階段而分成下列各期。1）血體期：卵泡破裂后，血液流入卵泡腔內(nèi)，形成血凝塊，也叫紅體期。2）增生期：當(dāng)破裂卵泡傷口愈合，黃體細(xì)胞增生，外觀呈黃色。黃體細(xì)胞分下列兩種：A、粒黃體細(xì)胞：來源于卵泡顆粒細(xì)胞。多分布于黃體中心，著色淺，呈多角形，體積較大，胞質(zhì)出現(xiàn)類脂質(zhì)顆粒，球形細(xì)胞核明顯。B、膜黃體細(xì)胞：來源于內(nèi)膜細(xì)胞。多分布在黃體邊緣或粒黃體細(xì)胞之間，體積小，核及胞質(zhì)著色較深。3）血管盛開期：血管與結(jié)締組織伸入黃體中心，形成花彩狀，黃體細(xì)胞清晰可見。4）成熟期：黃體增大到最高峰，黃體內(nèi)各種結(jié)構(gòu)明顯。5）白體期：黃體退化、萎縮，變成白色的痕跡。3．輸卵管組織學(xué)輸卵管從外向內(nèi)由漿膜、肌層和粘膜三層不同細(xì)胞層構(gòu)成。（1）粘膜：由上皮和固有膜構(gòu)成。粘膜形成若干初級(jí)縱襞，在壺腹內(nèi)又分出許多次級(jí)縱襞。上皮：為單層柱狀纖毛上皮。其中央為無纖毛的分泌上皮細(xì)胞。在漏斗和壺腹部的的上皮纖毛較高，向子宮逐漸變低。纖毛向子宮端顫動(dòng)，有助于卵的運(yùn)送。分泌細(xì)胞的分泌物可供卵的營(yíng)養(yǎng)。固有膜：由致密的纖維性結(jié)締組織構(gòu)成。但在壺腹部組織較疏松，伸入皺褶內(nèi)構(gòu)成支柱。（2）肌層：分內(nèi)環(huán)肌和外縱肌兩層。兩側(cè)之間無明顯界限。靠近子宮端的肌層較厚。傘部的外縱肌消失，僅含有分散的肌細(xì)胞。（3）漿膜：為輸卵管壁最外層。漿膜基本上為結(jié)締組織。在肌層和漿膜之間有很寬的一層疏松結(jié)締組織，叫漿膜下層，其中含有卵巢和子宮血管的分支、淋巴管、神經(jīng)和縱行平滑肌。4．子宮組織學(xué)子宮壁分為三層：內(nèi)膜、肌層和外膜。（1）內(nèi)膜：由上皮和固有膜構(gòu)成。上皮：為單層的柱狀上皮。細(xì)胞有時(shí)有纖毛。無纖毛的細(xì)胞有分泌性質(zhì)。上皮陷入固有膜內(nèi)，形成子宮腺。固有膜：又叫內(nèi)膜基質(zhì)。為環(huán)形的結(jié)締組織，纖維較細(xì)，還有網(wǎng)狀纖維和網(wǎng)狀細(xì)胞，之間有各種白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞、淋巴管、血管和子宮腺。子宮腺是彎曲的分支管狀腺。管壁由單層柱狀上皮構(gòu)成，多為分泌粘液的細(xì)胞，纖毛細(xì)胞較少。管壁外有分層的結(jié)締組織鞘。（2）肌層：分厚的內(nèi)環(huán)肌和薄的外縱肌，在內(nèi)外肌層之間為血管層，其中有神經(jīng)分布。（3）外膜：為漿膜，由疏松結(jié)締組織和間皮組成。四、作業(yè)：1．通過觀察和比較，說明各種公、母畜生殖器官的形態(tài)、大小、相互關(guān)系和大體構(gòu)造以及在活體上的位置有何特點(diǎn)。2．繪出任一種公、母畜生殖器官的標(biāo)本圖。3．繪出并注明睪丸曲精細(xì)管及其所含細(xì)胞的構(gòu)造圖。4．繪出并注明卵巢組織結(jié)構(gòu)及卵泡發(fā)育各階段示意圖。實(shí)驗(yàn)三死活精子數(shù)的測(cè)定一、目的和要求掌握死活精子染色和制作抹片的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理活精子頭部是不易著色的，鏡檢時(shí)，精子頭部是透明、無色的。而死精子則因伊紅滲入細(xì)胞質(zhì)，使整個(gè)精子頭部呈紅色。苯胺黑為背景染色，使著色的精子頭部可見。三、材料h1．精液：牛、豬或兔等任一種動(dòng)物的精液。2．藥品器械：顯微鏡、載玻片、凹玻片、搪瓷盤、滴管、擦鏡紙、紗布、試管、75%酒精、5%伊紅、1%苯胺黑。四、方法和步驟1.將5%的伊紅和1%的苯胺黑按1:1混勻，分裝于1～2ml容量的試管中（加入試管容量的1/2），并在37℃水浴中加溫，隨后加入原精液1～3滴，搖勻后再放回水浴中，3min后立即取出待用。也可將染液預(yù)熱后，將伊紅、精液及苯胺黑按照1：1：1～2的比例及順序滴入預(yù)熱的凹玻片中混勻染色。2.從以上混合液中用火柴棍沾上一小滴于載玻片的一端，用另一載玻片進(jìn)行推動(dòng)制成抹片，待干燥后，高倍鏡鏡檢（400倍）。抹片時(shí)，最好在35～40℃的條件下制作，而且制作過程要快。也可將制好的抹片放在37～38℃保溫箱內(nèi)干燥30～60秒。結(jié)果：活精子頭部是不易著色的，鏡檢時(shí)，精子頭部是透明、無色的。而死精子則因伊紅滲入細(xì)胞質(zhì)，使整個(gè)精子頭部呈紅色。苯胺黑為背景染色，使著色的精子頭部可見。在高倍鏡下數(shù)200或500個(gè)精子，其中分別數(shù)出死、活精子各占的百分率?；罹影俜致士偸且染踊盥矢摺；罹影俜致剩健?00%五、作業(yè)計(jì)算活精子百分率，比較其與精子活率的大小并說明原因。實(shí)驗(yàn)二精子的活率和密度測(cè)定一、目的和要求掌握檢查精子密度、評(píng)定活率的方法；熟悉肉眼檢查精液品質(zhì)的方法；驗(yàn)證觀察理化因素對(duì)精子運(yùn)動(dòng)及生存能力的影響。由于目測(cè)法不夠準(zhǔn)確，所以采用精子計(jì)數(shù)的方法，測(cè)定1ml精液內(nèi)的精子數(shù)。不過要有一定經(jīng)驗(yàn)才會(huì)準(zhǔn)確。要求同學(xué)們一定要熟練掌握此法，它是目前許多簡(jiǎn)單而實(shí)用方法的基礎(chǔ)。二、材料和儀器1．精液：牛、豬或兔等任一種動(dòng)物的精液。2．藥品器械：顯微鏡、顯微鏡保溫箱（或顯微鏡恒溫臺(tái)）、載玻片、蓋玻片、搪瓷盤、溫度計(jì)、滴管、擦鏡紙、紗布、試管、75%酒精、5%伊紅、1%苯胺黑、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、計(jì)數(shù)器、95%酒精、乙醚、0.9％和3%NaCl、保溫瓶、藥棉等。三、內(nèi)容和方法（一）精子密度的檢查（顯微鏡觀測(cè)法）及活率評(píng)分1．檢查精子的密度：取一小滴精液于潔凈的載玻上，蓋上潔凈的蓋玻片，使精液分散成均勻的一薄層，不得有氣泡存留，也不能使精液外流或溢出于蓋玻片上。置于顯微鏡下放大100倍觀察，按下列等級(jí)評(píng)定其密度。密——在整個(gè)視野中精子的密度很大，彼此之間空隙很小，看不清各個(gè)精子個(gè)體運(yùn)動(dòng)的情況。每毫升精液含精子數(shù)約在10億個(gè)以上。登記時(shí)以“密”字。中——精子之間空隙明顯，精子彼此之間的距離約有一個(gè)精子的長(zhǎng)度，有些精子的活動(dòng)情況清楚可見。這種精液的密度評(píng)為“中”，每毫升所含精子數(shù)約2～10億個(gè)之間。登記時(shí)以“中”字。稀——視野中精子稀疏、分散，精子之間的空隙超過一個(gè)精子的長(zhǎng)度。這種精液每毫升所含精子數(shù)在2億以下。登記時(shí)以“稀”字。2．評(píng)定精子的活率：必須于采精后立刻在25℃左右的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，最好在37℃保溫箱內(nèi)或加熱的載物臺(tái)上進(jìn)行。在評(píng)定精子活率的同時(shí)也可以測(cè)定精子的密度。用玻璃棒蘸取一滴原精液或經(jīng)稀釋的精液（馬、豬精液的精子密度低，不須稀釋；而牛、羊精液的密度大，須用0.9%氯化鈉溶液稀釋，其溫度須與精液密度相近），滴在潔凈的載玻片上，蓋上潔凈的蓋玻片，其間充滿精液，不存留氣泡。也可滴在蓋玻片上翻放于凹玻片的凹窩上。置于顯微鏡下，放大250～400倍檢查。注意顯微鏡的載物臺(tái)須放平，最好是在暗視野中觀察。精子活動(dòng)有三種類型：直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)、旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)和原地?cái)[動(dòng)。評(píng)價(jià)精子活率是根據(jù)直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)的多少而定。精子活率＝×100%分子也可用“總精子數(shù)-非直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)表示。目前評(píng)定精子活率等級(jí)的方法有兩種：十級(jí)制——在顯微鏡視野中估算直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子所占全部精子的百分?jǐn)?shù)。直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子為100%者評(píng)為1.0級(jí)；90%者為0.9級(jí)。以此類推。五級(jí)制——全部精子都呈直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)，屬于“5”級(jí)；絕大多數(shù)呈直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)（約80%）為“4”級(jí)；前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子略多于半數(shù)者（約60%）為“3”級(jí)；不及半數(shù)者為“2”級(jí)；呈直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子數(shù)目極少者屬“1”級(jí)。精子活率是精液品質(zhì)評(píng)定的重要指標(biāo)。受精能力與直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)的多少密切相關(guān)。一般活率在50～80%之間時(shí)，輸精后受精力差別不大；而低于50%者，對(duì)于受精力影響較大。（二）精子密度的計(jì)數(shù)檢查1.器材介紹：（1）介紹血細(xì)胞計(jì)數(shù)室的構(gòu)造。（2）介紹血球吸管的構(gòu)造及各種家畜應(yīng)該使用何種血球吸管（紅血球吸管或白血球吸管）。由于同學(xué)們?cè)趯W(xué)習(xí)生理時(shí)已熟悉有關(guān)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的運(yùn)用，故不再詳述它的結(jié)構(gòu)。牛、羊、雞的精液（密度高）用紅血球吸管：若將精液吸至“0.5”刻度處，然后再吸3%NaCl至“101”刻度，為稀釋200倍。如將精液吸至“1.0”刻度處，再吸3%NaCl至“101”刻度，則為稀釋100倍。豬、馬、兔的精液（密度低）用白血球吸管：若將精液吸至“0.5”刻度處，然后再吸3%NaCl至“11”刻度，為稀釋20倍。如將精液吸至“1.0”刻度處，再吸3%NaCl至“11”刻度，則為稀釋10倍。2.方法和步驟（1）將計(jì)數(shù)室推上蓋玻片。要求蓋玻片被推上后以立起計(jì)數(shù)板不掉下來為原則，并且蓋玻片在折光時(shí)可見到清晰的彩色條紋。（2）將蓋好蓋玻片的計(jì)數(shù)板置于低倍鏡下觀察，首先要求找到清晰的計(jì)數(shù)室。（3）用血球吸管吸精液，用藥棉擦去吸管尖端外圍附著的精液，并用3%NaCl稀釋，因不同的家畜用不同的吸管稀釋。（4）吸管吸好精液和3%NaCl以后，用拇指及食指堵住吸管兩端進(jìn)行來回的充分搖動(dòng)，混勻。然后棄去吸管中的前兩滴，再將吸管尖端置于血球計(jì)數(shù)室和蓋玻片交界處的邊緣上，吸管內(nèi)的精液自動(dòng)滲入計(jì)數(shù)室內(nèi)，使之自然、均勻地分充滿計(jì)數(shù)室。注意不要使精液溢出蓋玻片，也不可因精液不足而使計(jì)數(shù)室內(nèi)有氣泡或干燥處，否則，應(yīng)重新操作。靜放2分鐘，開始計(jì)數(shù)。（5）鏡檢和計(jì)數(shù)：移到高倍鏡下檢查。首先數(shù)出四角和正中間的五個(gè)方格中的精子數(shù)，也就是80個(gè)小方格中的精子數(shù)。載物臺(tái)要平置，不能斜放。光線不必過強(qiáng)。計(jì)算精子數(shù)：5個(gè)方格中共數(shù)的精子數(shù)×5＝整個(gè)計(jì)數(shù)室中25個(gè)中方格內(nèi)的精子總數(shù)。也就是1m2×1/10mm＝1/10mm3的精子。如果再×10，就＝1mm3精液內(nèi)的精子數(shù)。再×1000＝1ml精液內(nèi)的精子數(shù)（因?yàn)?cm3為1ml）。再×稀釋倍數(shù)。如果取來的精液本身不是原精液，而是經(jīng)稀釋“X”倍，那么還須再דX”倍。將以上的結(jié)果總括起來說：1ml原精液內(nèi)的精子數(shù)＝5個(gè)中方格數(shù)的精子數(shù)×5×10×1000×稀釋倍數(shù)×X（如果是原精液不要דX”）。注：（1）一般羊的精子密度大約為20～30億／ml；一般牛的精子密度為10～15億／ml；一般豬、馬的精子密度為1～1.5億／ml；一般兔的精子密度為2～3億／ml；一般雞的精子密度為35～38億／ml。（2）吸管用后清洗步驟：自來水→蒸餾水→95％酒精→乙醚。（3）計(jì)數(shù)板用后清洗方法:自來水→蒸餾水→白稠布擦干凈備用。（4）也可用移液器稀釋。用移液器吸10μl精液＋1990μl（在小試管內(nèi)先加2ml，再吸出10μl）的3%NaCl，即稀釋200倍。同樣，20μl精液用1980μl的3％NaCl稀釋，即稀釋100倍。以此類推。還有其它方法，如在10ml離心管中，加0.5ml精液，再用NaCl稀釋至10ml，即稀釋20倍。（5）也可用2％伊紅溶液稀釋精子，既殺死精子又使精子頭部著色，使計(jì)數(shù)容易。（三）注意事項(xiàng)：1．若精子壓計(jì)數(shù)室的線，則以精子頭為準(zhǔn)，按照快速連接“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”的原則計(jì)數(shù)。2．為了減少誤差，應(yīng)對(duì)同一樣品做2～3次重復(fù)，求其平均值。如果計(jì)數(shù)的結(jié)果相差較大，則應(yīng)進(jìn)行再次檢查。四、作業(yè)寫出實(shí)驗(yàn)過程及其精子活率、密度測(cè)定結(jié)果。實(shí)驗(yàn)四精子畸形率的測(cè)定一、目的和要求由于所需時(shí)間等原因，無需對(duì)每次采精進(jìn)行精子畸形率的測(cè)定。但應(yīng)當(dāng)每月對(duì)每一頭種公畜進(jìn)行一次畸形率的測(cè)定，以繪出精子畸形率變化圖。畸形率突然增高，表明存在問題，應(yīng)當(dāng)查找和分析原因?；温试?5％以內(nèi)，受精力一般不受影響?；尉右话悴槐憩F(xiàn)前進(jìn)運(yùn)動(dòng)，因而隨著畸形精子數(shù)增多，精子活率下降。如在檢查精子運(yùn)動(dòng)力時(shí)，可觀察到許多畸形精子，也需要進(jìn)一步作形態(tài)學(xué)檢查。通過本實(shí)驗(yàn)，了解家畜精液中精子形態(tài)與精液品質(zhì)的關(guān)系，掌握精子形態(tài)的分類和分析方法。二、材料和儀器設(shè)備：精液、0.5％龍膽紫酒精溶液、高倍顯微鏡、計(jì)數(shù)器、載玻片等。三、方法和步驟：（一）制作抹片1.以細(xì)玻璃棒蘸取精液1滴，滴于載玻片一端，如牛羊精液應(yīng)再加1～2滴0.9％NaCl溶液。2.以另一載玻片的頂端呈35度角，抵于精液滴上，向另一端拉去，將精液均勻涂抹于載玻片上。3.抹片于空氣中自然干燥。（二）染色用0.5％龍膽紫酒精溶液染色3min，水洗、晾干備用。（三）鏡檢在400倍顯微鏡下觀察精子形態(tài)。隨機(jī)觀察400個(gè)精子，計(jì)算各種畸形精子所占的比例。畸形精子百分率＝×100%（四）畸形精子形態(tài)的分類1．頭部畸形的精子包括：窄頭、頭基部狹窄、梨形頭、圓頭、巨頭、小頭、頭基部過寬、雙頭、頂部脫落等。但以前六種居多。2．尾部畸形精子包括：帶原生質(zhì)滴的精子（近端、遠(yuǎn)端）、無頭的尾（它和無尾的頭往往是一個(gè)精子的兩部分，在分析時(shí)一般算作尾部的畸形）、單卷尾、多重卷尾、環(huán)形卷尾、雙尾等。3．中段畸形包括：頸部腫脹、中段纖絲裸露、中段呈螺旋狀、雙中段等。實(shí)驗(yàn)五卵子形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察一、目的和要求通過實(shí)驗(yàn)及操作，使學(xué)生了解孕馬血清促性腺激素（PMSG）和人絨毛膜促性腺激素（hCG）對(duì)卵巢機(jī)能的生理作用，掌握超數(shù)排卵方法。觀察卵子的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，充分認(rèn)識(shí)正常與異常卵子的形態(tài)結(jié)構(gòu)及等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)，為大家畜超數(shù)排卵和胚胎移植打下良好的基礎(chǔ)。二、材料1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：5～6周齡昆明白系雌性小鼠。2．藥物與試劑：PMSG、hCG、75％酒精、mPBS液或生理鹽水、礦物油等。3．器材：一次性1ml注射器、鑷子、剪刀、表面皿、巴氏吸管、Ф35mm培養(yǎng)皿、實(shí)體顯微鏡等。三、超數(shù)排卵方法及卵子采集取5～6周齡昆明白系雌性小鼠，間隔48h分別腹腔注射5～10IUPMSG和hCG，hCG注射后15h處死、摘取卵巢、輸卵管及子宮置于含有mPBS液的表面皿中，在實(shí)體顯微鏡下，小心剔除附著的脂肪和系膜，用mPBS液沖洗3遍后，用眼科小鑷子將輸卵管膨大部撕破，以回收卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體。用0.1％透明質(zhì)酸酶處理，脫去卵丘細(xì)胞，得到裸卵。還可將卵巢上的卵泡刺破，獲得未成熟卵母細(xì)胞。操作液和卵子置于37℃恒溫臺(tái)上保存。四、卵子形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察將回收的卵子用mPBS洗凈后，移入新鮮的覆蓋有礦物油的100μlmPBS液滴中，在4×10倍以上實(shí)體顯微鏡下進(jìn)行卵子形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察及質(zhì)量鑒定。（一）卵子的結(jié)構(gòu)正常卵子呈球形，其結(jié)構(gòu)包括放射冠、透明帶、卵黃膜和卵黃等部分。（二）卵子形態(tài)和質(zhì)量鑒定目前對(duì)卵子的質(zhì)量鑒定基本上采用形態(tài)學(xué)的方法。1.卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體卵子周圍的卵丘細(xì)胞層的致密程度和卵子形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。1級(jí)：多層致密的卵丘細(xì)胞附著在卵子周圍，在顯微鏡下卵母細(xì)胞和卵丘細(xì)胞都明亮；2級(jí)：卵子的細(xì)胞質(zhì)均勻，卵子周圍部分卵丘細(xì)胞脫落；3級(jí)：卵子的細(xì)胞質(zhì)均勻，但卵子周圍只附著1～2層或完全沒有卵丘細(xì)胞；4級(jí)：卵子周圍卵丘細(xì)胞間呈放射狀散開。2.脫除卵丘細(xì)胞后的卵母細(xì)胞（1）正常卵子呈圓球形，外周有一圈折光性強(qiáng)且發(fā)亮的透明帶，輪廓清晰，細(xì)胞質(zhì)均勻，色澤和透明度適中。成熟卵母細(xì)胞的卵黃周隙中可見第一極體。（2）異常卵子凡是橢圓形或扁形的、有大型極體的、卵黃內(nèi)有大空泡的、體積過大或過小的、異常卵裂、透明帶破裂或收縮、變形、細(xì)胞質(zhì)顏色發(fā)暗卵黃膜邊緣粗糙、輪廓不清晰、空透明帶等都屬于畸形卵子。五、作業(yè)將觀察到的卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體、成熟卵母細(xì)胞和未成熟卵母細(xì)胞繪圖并加以說明。實(shí)驗(yàn)六人工授精器材的認(rèn)識(shí)與假陰道的安裝一、目的和要求1．熟悉人工授精所用的采精和輸精器材，了解其用途及使用方法。2．練習(xí)假陰道的安裝方法。二、材料和儀器設(shè)備1．采精器材：各種公畜采精用假陰道，牛、羊電刺激采精棒，豬手握法采精用的橡膠手套等。2．輸精器材：各種母畜輸精器、陰道開張器、額燈和手電筒。3．輔助器材及藥品：高壓滅菌器、酒精燈、長(zhǎng)柄鉗、鑷子、玻璃棒、棒狀溫度計(jì)、漏斗、量杯、滅菌凡士林、70％和95％酒精棉球、滑石粉、來蘇兒、洗衣粉等。三、方法和步驟先由老師講解人工授精器材的構(gòu)造、各部分名稱和用途，并作假陰道安裝的示范。然后學(xué)生分組觀察并作假陰道的安裝練習(xí)。（一）人工授精器材的認(rèn)識(shí)：1．假陰道：為長(zhǎng)筒狀，由外殼、內(nèi)胎和集精杯（管）三個(gè)主要部分組成。其粗細(xì)和長(zhǎng)短因畜種而異。不同國(guó)家不同時(shí)期的設(shè)計(jì)形式也不盡一致，目前我國(guó)常用的有美、蘇和日等形式。外殼：牛、羊和豬的假陰道外殼一般為硬橡膠或塑料制成的圓筒，中部裝有可吹氣、注水和排水的開關(guān)。豬用假陰道則在此處連接一個(gè)可向假陰道內(nèi)打氣的雙鏈球，以調(diào)節(jié)壓力。馬的假陰道的外殼由鍍鋅鐵皮或金屬制成。分頭、頸和體三部分。筒體的中部裝有把柄，其側(cè)面有吹氣和注、排水孔，并有封閉塞或橡膠帶。內(nèi)胎：由優(yōu)質(zhì)橡膠制成的膠筒，目前有些國(guó)家將其內(nèi)胎面制成粗糙面，以增強(qiáng)采精時(shí)對(duì)陰莖的刺激，利于采精。集精杯（管）：牛、羊用雙層的棕色集精杯（蘇式）或有刻度的離心管（美式）。馬用黑色橡皮杯（蘇式）。豬用棕色有刻度的廣口瓶。當(dāng)用手握法對(duì)公豬進(jìn)行采精時(shí)，只需備一只乳膠手套和收集精液的容器即可。集精杯（管）可借橡皮圈直接固定于假陰道的一端或借橡膠漏斗與假陰道連接。2．輸精器：蘇式牛、羊輸精器為一長(zhǎng)頸玻璃注射器。目前常用的為金屬或塑料制成的輸精管，其后連接一個(gè)橡皮球。冷凍細(xì)管精液輸精則使用特制的卡蘇槍或輸精器。對(duì)一些家畜的輸精需借助陰道開張器和額燈或手電筒照明進(jìn)行。開張器的種類和大小因畜種而異。（二）假陰道的準(zhǔn)備要點(diǎn)：1．假陰道外殼及內(nèi)胎的檢查（1）檢查假陰道外殼兩端是否光滑，外殼有否裂隙或開焊之處（特別是馬用外殼）。（2）檢查內(nèi)胎是否漏水?？蓪?nèi)胎注滿水，用兩手握緊兩端，并扭轉(zhuǎn)內(nèi)胎施以壓力，觀察胎壁有無破損漏水之處，如發(fā)現(xiàn)應(yīng)及時(shí)修補(bǔ)或更換。公豬的手握法采精用的乳膠手套在用前也應(yīng)檢查。2．采精器材的清洗：（1）外殼、內(nèi)胎、集精杯（管）等用具用后可用熱的洗衣粉水清洗。內(nèi)胎的油污必須洗凈。（2）以清水沖凈洗衣粉，待自然干燥后即可使用。3．內(nèi)胎的安裝：將內(nèi)胎放入外殼，內(nèi)胎露出外殼兩端的部分長(zhǎng)短應(yīng)相等。而后將其翻轉(zhuǎn)在外殼外，內(nèi)胎應(yīng)平整，不應(yīng)扭曲，再以橡皮圈加以固定。4．消毒：先以長(zhǎng)柄鉗夾取75%的酒精棉球擦拭內(nèi)胎和集精杯，再以95%的酒精棉球充分擦拭。采精前，最好用稀釋液沖洗1～2次。5．集精杯（管）的的安裝：牛、羊、豬的集精杯（管）可借助特制的保定套或橡皮漏斗與假陰道連接。6．注水：通過注水孔向假陰道內(nèi)、外壁之間注入50～55℃溫水，使其能在采精時(shí)保持38～42℃，注水總量約為內(nèi)、外壁間容積的1/3～1/2。7．涂潤(rùn)滑劑：用消毒好的玻璃棒，取滅菌凡士林少許，均勻的涂于內(nèi)胎的表面，涂抹深度為假陰道長(zhǎng)度的1/2左右，潤(rùn)滑劑不宜過多、過厚，以免混入精液，降低精液品質(zhì)。當(dāng)用手握法給公豬采精時(shí)不須使用潤(rùn)滑劑。8．調(diào)節(jié)假陰道內(nèi)腔的壓力：從注氣孔吹入或打入（豬）空氣，根據(jù)不同家畜和個(gè)體的要求調(diào)整內(nèi)腔壓力。9．假陰道內(nèi)腔溫度的測(cè)量：把消毒的溫度計(jì)插入假陰道內(nèi)腔，待溫度不變時(shí)再讀數(shù)，一般40℃左右為宜，馬可稍高，也要根據(jù)不同個(gè)體的要求，作適當(dāng)調(diào)整。10．用一塊褶成四折的消毒紗布蓋住假陰道入口，以防灰塵落入，即可準(zhǔn)備采精。（三）輸精器材的準(zhǔn)備金屬和玻璃制成的輸精管、輸精槍，最好用高壓蒸汽消毒，在輸精前最好將輸精管用稀釋液沖洗1～2次。細(xì)管冷凍精液的輸精器一般由金屬外殼和里面的推桿組成。使用前金屬外套應(yīng)進(jìn)行消毒，前端的金屬套不能連續(xù)使用。使用時(shí)將細(xì)管的一端剪去，棉栓一端插在輸精槍的推桿上。借助推桿，推動(dòng)細(xì)管中的棉栓即可將精液推出。若采用開張器法輸精，需對(duì)開張器先進(jìn)行嚴(yán)格消毒方可使用。四、作業(yè)指出各種公畜采精器材的異同及優(yōu)缺點(diǎn)，試提出改進(jìn)意見。實(shí)驗(yàn)七精子頂體染色一、目的和要求頂體在精子受精過程中起著重要的作用。因它能釋放蛋白質(zhì)分解酶消化卵丘細(xì)胞之間的粘合基質(zhì)，使精子能夠通過卵的被膜進(jìn)行受精。由于頂體結(jié)構(gòu)的畸形，可導(dǎo)致受精率降低或者不受精。精子老化或損傷，會(huì)引起頂體帽破壞，先是頂體嵴部分變化，最后整個(gè)頂體消失。這些變化可用電鏡觀察到。但用微分干涉顯微鏡及相差顯微鏡也能看到。精液冷凍解凍會(huì)損傷一些精子，重要的是要準(zhǔn)確知道受傷精子百分?jǐn)?shù)。優(yōu)質(zhì)奶牛精液冷凍前，約90％精子具有完整的頂體。冷凍后下降至60％～65％。研究表明，頂體完整率和不返情率之間比精子活率與不返情率之間的相關(guān)性更強(qiáng)。因而，檢查精子頂體完整率很重要。通過本實(shí)驗(yàn)，要求：1）學(xué)習(xí)精液抹片染色技術(shù)；2）觀察正常精子頂體和異常精子頂體形態(tài)，計(jì)算精子頂體完整率。二、材料和儀器設(shè)備（一）二人一組，每組所需材料及器材：燒杯2個(gè)（大小均可，用于清洗染色片用）；玻璃滴管2支；小磁盤、染色架各一個(gè)；衛(wèi)生紙（墊在小磁盤內(nèi)，以免磁盤被顏色污染）；玻璃平皿1個(gè)；切片盒一個(gè)；血球計(jì)數(shù)器2個(gè)；普通光學(xué)顯微鏡1臺(tái)；鑷子1把。（二）公用器材酒精棉球；姬姆薩（Giemsa）原液（預(yù)先一個(gè)月前配好）；固定液；擦鏡紙；精液；蒸