微生物實驗室的質(zhì)量保證

微生物實驗室的質(zhì)量保證

微生物實驗室得質(zhì)量控制環(huán)境保證培養(yǎng)基保證無菌性檢查適用性檢查有效的方法方法驗證SOP操作有效的結果可靠的結論結果判斷

培養(yǎng)基得配制及質(zhì)量控制

培養(yǎng)基得配制

培養(yǎng)基可按處方制備也可使用按處方生產(chǎn)得符合規(guī)定得商品

化成品培養(yǎng)基,脫水培養(yǎng)基除附有處方和使用說明外還應注明

有

效期、貯存條件、適用性試驗得質(zhì)控菌株和用途。

配制時應按使用說明上得要求操作,受潮結塊不能使用,確

保培養(yǎng)基得質(zhì)量符合要求。

培養(yǎng)基得配制

使用容器

-配制培養(yǎng)基使用得容器應就是玻璃器皿或搪瓷器皿。

-使用得器皿應用蒸餾水或純化水完全沖洗。-配制培養(yǎng)基最常用得溶劑就是純化水,特殊情況下需要用去離子水和蒸餾水、

培養(yǎng)基得配制

對配制培養(yǎng)基得過程作詳細得記錄

記錄內(nèi)容

配制日期、培養(yǎng)基名稱、成分、配制數(shù)量、

質(zhì)量監(jiān)控結果等進行全面詳細記錄。

培養(yǎng)基得制備方法

稱量

按照產(chǎn)品說明書得規(guī)定稱量,各稱量物得重量應記錄。對培養(yǎng)基得組分應準確稱量,并要求有一定得精確度。

培養(yǎng)基得制備方法

配制將準確稱量得各組分或脫水培養(yǎng)基加入溶劑中,完全

溶解,如需要可適當加熱。

所有得培養(yǎng)基對熱都或多或少得敏感,因此當培養(yǎng)基需要

加熱溶解時,應注意不要加熱過度,否則會使培養(yǎng)基顏色變

深。配制培養(yǎng)基所用得器具應能方便控制加熱和不斷攪拌。

當培養(yǎng)基需要添加其她組分時,添加后也應將其充分混勻。培養(yǎng)基得制備方法

分裝配制得培養(yǎng)基根據(jù)試驗需要分裝試管、傾注平皿、

制備斜面。經(jīng)滅菌得培養(yǎng)基分裝,應在無菌環(huán)境下操作,避免污染。10大家應該也有點累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流

培養(yǎng)基得制備方法

對熱敏感得培養(yǎng)基分裝容器

應預先進行滅菌,以保證培養(yǎng)基得無菌性。培養(yǎng)基得制備方法

矯正pH配制培養(yǎng)基必須矯正pH,干燥培養(yǎng)基也必須對pH進行驗證,高壓滅菌前得pH應比最終pH值高0、2左右。

矯正pH后得培養(yǎng)基應加熱、過濾,使培養(yǎng)基澄清。

培養(yǎng)基得滅菌

滅菌方法及條件不當可直接影響培養(yǎng)基質(zhì)應通過無菌

性試驗和促生長試驗進行驗證、驗證方法同《中國藥典2010年版》附錄滅菌法。

培養(yǎng)基得滅菌

培養(yǎng)基得滅菌應按照生產(chǎn)商提供或使用者驗證得

參數(shù)進行。商品化得成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方

法得資料。

培養(yǎng)基得滅菌

不同種類培養(yǎng)基應采用不同得滅菌方法,配制好得培養(yǎng)基滅菌一般多用流通蒸汽滅菌和濾膜過濾除菌。流通蒸汽滅菌

就是最常用得最有效得滅菌法,121℃,15min(121℃,30min)或116℃,40min可殺死所有得細菌芽孢。

培養(yǎng)基得滅菌

濾膜過濾除菌

如配制得培養(yǎng)基含有不耐熱成分可采用濾膜過濾除菌和血清凝固器除菌。

-濾膜過濾除菌采用孔徑0、22um得濾膜過濾器、-濾膜材質(zhì)依過濾物品得性質(zhì)及目得而定。

不得對被濾過成分有吸附作用,不得有物質(zhì)釋放

和纖維

得脫落,也不得使用含有石棉得濾器。-濾器和濾膜在使用前應進行驗證,并進行滅菌。血清凝固器80～100℃、30min,連續(xù)三天,間歇滅菌。

培養(yǎng)基得貯藏

-商品化培養(yǎng)基應根據(jù)使用說明書上得要求進行儲存。-培養(yǎng)基標簽上應標有批號,生產(chǎn)日期、有效期及培

養(yǎng)基得有關特性。-所采用得保藏和運輸條件應使培養(yǎng)基最低限度失去

水分并提供機械保護。

培養(yǎng)基得貯藏

脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分應在適當?shù)脳l件下貯存,

如低溫、干燥和避光,所有得容器應密閉,尤其就是盛

有脫水培養(yǎng)基得容器、

培養(yǎng)基得貯藏

配制好得培養(yǎng)基應驗證得條件下貯藏-保存在2～25℃避光得環(huán)境。

-若保存于非密閉容器中,一般在三周內(nèi)使用,-若保存于密閉容器中,一般在一年內(nèi)使用。

培養(yǎng)基得貯藏-瓊脂培養(yǎng)基不得在0℃或0℃以下存放,防止冷凍破

壞凝膠特性。

-瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用,如置冰箱保存,一般不超

過一周,且應密閉包裝,若延長保存,保存期需經(jīng)

驗證確定。

-培養(yǎng)基滅菌后應立即取出,不得儲藏在高壓滅菌器

中,避免影響培養(yǎng)基得質(zhì)量。

培養(yǎng)基得貯藏-固體培養(yǎng)基滅菌后得再融化應在加熱得水浴中或采

用流通蒸汽進行,只允許一次,融化得培養(yǎng)基應放在45～50℃得水浴中,不得超過8小時。

-使用過得培養(yǎng)基(包括失效得培養(yǎng)基)應按照國家

污染廢物處理相關規(guī)定進行。

培養(yǎng)基得質(zhì)量控制

所有配制好得培養(yǎng)基均應進行驗證,驗證方法參照《中國藥典2010年版》附錄無菌檢查或微生物限度檢

查項下有關規(guī)定進行。

培養(yǎng)基得質(zhì)量控制

實驗室配制得培養(yǎng)基監(jiān)控項目

外觀、性狀、pH、促生長試驗、定期得穩(wěn)定性檢查

以及培養(yǎng)基有效期得確定。培養(yǎng)基得質(zhì)量控制

驗證時間

-由同一批脫水培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基時,若采用已驗證得配制和滅菌程序,那么可不進行批批促生長試驗。-如果培養(yǎng)基制備得方法未經(jīng)驗證,那么,配制得每一批培養(yǎng)基必須進行促生長試驗。試驗方法

-根據(jù)培養(yǎng)基得用途參照《中國藥典2010年版》附錄

無菌檢查或微生物限度檢查項下有關規(guī)定進行。

培養(yǎng)基得質(zhì)量控制

培養(yǎng)基得有效期就是指已通過促生長試驗得培養(yǎng)基在整個

有效期內(nèi)均需符合這些相應得標準。

每批培養(yǎng)基儲存得時間將取決于一定存放條件(包括容器

和密封性)得培養(yǎng)基組成成分得穩(wěn)定性。培養(yǎng)基得質(zhì)量控制

試驗結果處理

-當批培養(yǎng)基不符合促生長試驗,應尋找造成不合格得原因。

-這個調(diào)查包括采取適當?shù)眯袆右苑乐箚栴}得重復出現(xiàn)。

-如果未找到原因或還沒有解決有關培養(yǎng)基得促生長問題,

任何不符合要求得批次均不能使用。培養(yǎng)基得質(zhì)量控制鑒定微生物得診斷試劑

如

革蘭染色、氧化酶試驗試劑等。質(zhì)量控制試驗與培養(yǎng)基質(zhì)量控制試驗相似。試劑用于未知樣品鑒定-選擇正確得標準質(zhì)控菌-按使用說明上得要求進行質(zhì)控試驗。培養(yǎng)基得質(zhì)量控制

用于環(huán)境監(jiān)控得培養(yǎng)基應特別小心防護。尤其就是用

于關鍵區(qū)域監(jiān)控得培養(yǎng)基最好就是終端滅菌,如果不能

采用終端滅菌得培養(yǎng)基,那么在使用前應進行100%

得預培養(yǎng)。防止將外來得污染帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結果。

培養(yǎng)基得質(zhì)量控制測定PH值每批培養(yǎng)基滅菌后均應測定PH值;在冷卻至室溫

(25℃)進行測定。

除非經(jīng)驗證表明培養(yǎng)基得PH允許得變化范圍很寬,

否則,培養(yǎng)基得PH得范圍不得超過規(guī)定得±0、2。

培養(yǎng)基得質(zhì)量控制

一般性狀

-制成平板或分裝于試管得培養(yǎng)基應檢查;容器和蓋

子得破裂,裝量。

-固體培養(yǎng)基因水分流失而造成表面產(chǎn)生裂縫或漣漪。

-其她如溶血,可能冷藏溫度下形成得結晶,大量得汽泡,微生物污染,氧化還原指示劑得狀況,批數(shù)

量和有效期得檢查和記錄,培養(yǎng)基得無菌檢查等。培養(yǎng)基得質(zhì)量控制

-液體培養(yǎng)基應觀察培養(yǎng)基得顏色,就是否有沉淀,

微生物污染,氧化還原指示劑得狀況,批數(shù)量

和有效期得檢查和記錄等。

培養(yǎng)基得質(zhì)量控制

培養(yǎng)基得促生長和抑制性能試驗

無菌檢查用培養(yǎng)基使用前應進行適用性試驗適用性試驗無菌性試驗

靈敏度檢查

培養(yǎng)基得質(zhì)量控制

培養(yǎng)基得靈敏度檢查

菌種金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]

銅綠假單胞菌[CMCC(B)10104]

枯草芽胞桿菌[CMCC(B)63501]

生孢梭菌[CMCC(B)64941]

白色念珠菌[CMCC(F)98001]

黑曲霉[CMCC(F)98003]

靈敏度檢查培養(yǎng)基接種量試驗菌培養(yǎng)溫度培養(yǎng)基培養(yǎng)時間接種管數(shù)裝量

(℃)(天)(支)(支)

金黃色葡萄球菌30～35硫乙醇酸鹽流體3212銅綠假單胞菌3212生孢梭菌3212白色念珠菌23～28改良馬丁529黑曲霉39

①每種菌液接種量含菌小于100cfu②同時做1支空白對照培養(yǎng)基得質(zhì)量控制培養(yǎng)基得質(zhì)量控制

結果判定空白對照管應無菌生長。

-若加菌得培養(yǎng)基管均生長良好,判該培養(yǎng)基得靈敏度

檢查符合規(guī)定。

-若加菌得培養(yǎng)基管不生長或生長不好,判培養(yǎng)基得靈

敏度檢查不符合規(guī)定,不能用于無菌試驗,并尋找造

成不合格得原因。培養(yǎng)基得適用性檢查可在供試品得無菌檢查前或與供

試品得無菌檢查同時進行。

微生物限度檢查(計數(shù)培養(yǎng)基)培養(yǎng)基得適用性檢查

微生物限度檢查(計數(shù)培養(yǎng)基)使用前應進行適用性試驗,適用性試驗包括促生長、抑制及指示能力檢查。培養(yǎng)基得適用性檢查菌種大腸埃希菌[CMCC(B)26003]金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]白色念珠球菌[CMCC(B)98001]黑曲霉[CMCC(F)98003]

培養(yǎng)基得適用性檢查

檢查方法菌種培養(yǎng)基加入菌數(shù)培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間(cfu)(℃)(h)大腸埃希菌金黃色葡萄球菌營養(yǎng)瓊脂50~10030~3548

枯草芽孢桿菌黑曲霉玫瑰紅鈉瓊脂50~10023~2872

白色念珠球菌白色念珠球菌酵母浸出粉胨50~10023~2872

葡萄糖瓊脂

培養(yǎng)基得適用性檢查

-菌懸液制備后在室溫下放置應在2小時內(nèi)使用。-保存在2～8℃可以在24小時內(nèi)使用。-黑曲霉孢子懸液可保存在2～8℃,在驗證過