人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞操作規(guī)范_第1頁
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文檔簡介

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞操作規(guī)范一、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離和培養(yǎng).準(zhǔn)備5個培養(yǎng)皿，打開放在超凈臺中，將消毒過的平剪×1，彎剪×2，有齒鑷射0，通風(fēng)0.在、和入5l在入5l;將盛放臍帶的器皿用酒精消毒外表面后放入超凈臺，用彎嘴鉗取出臍帶放入#培養(yǎng)皿，清洗殘留血漬，用第2把彎嘴鉗配合擠出臍帶血管內(nèi)的積血;4.將臍帶轉(zhuǎn)移至#培養(yǎng)時1.至成3cm(皿.離2和1入皿;.將剝至50ml，2000rpm離心5min;8.至0l中;.以5至5入4l養(yǎng)2+%S+%e+%MA+0勻;.第2每3(.培養(yǎng)43)用瓶液1化;.，0m離心5.用0m到;.按入0l液+2%UltroserG+1%Glutamine+1%MEMNAA)每3液;15.細(xì)胞融合率達(dá)到按:3傳代。二、細(xì)胞傳代.在代;.取0作;.(預(yù)留0l)入3l去;.入2l化3入1l終;.用0l，0m心5.棄上清液，加入適量臍帶無血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，按/瓶接種，每瓶培養(yǎng)液終體積為0l。三、細(xì)胞凍存.液(FBS+10%DMSO):取50ml入FB加入O入C藏;72.液2000rpm離心5，按l過1.C箱;.4hC存;.用5為0l。四、細(xì)胞復(fù)蘇.于C凈;.至50ml入20~30ml，2000rpm離心5.入0l，0m離心5.棄上清液，加入適量臍帶無血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，按/瓶接種，每瓶培養(yǎng)液終體積為0l。五、細(xì)胞

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