（高清版）WST 408-2024 定量檢驗(yàn)程序分析性能驗(yàn)證指南

WSWS/T408—2024代替WS/T408—2012,WS/T416—2013,WS/T420—2013和WS/T4GuidelinefortheverificationofanalyticalperformanceofquantitativeexaminationproceduresWS/T408—2024IWS/T420—2013《臨床實(shí)驗(yàn)室對商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證》和WS/T49——更改了范圍，標(biāo)準(zhǔn)用途限于臨床實(shí)驗(yàn)室分析性能驗(yàn)證；——整合了重復(fù)內(nèi)容，更改了部分方案設(shè)計和數(shù)據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：北京醫(yī)院/國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心、民航總醫(yī)院、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)WS/T408—2024突出的分析性能問題。對濃度跨度大的檢驗(yàn)項(xiàng)目或某些原理的檢驗(yàn)程序，有時可見線性不種情況下，需參考有關(guān)文獻(xiàn)酌情制定適宜驗(yàn)WS/T408—20241定量檢驗(yàn)程序分析性能驗(yàn)證指南本標(biāo)準(zhǔn)適用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室對定量檢驗(yàn)程序分析性能GB/T22576.1—2018醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室——質(zhì)量和能力的要求第一部分：通用GB/T21415—2008體外診斷醫(yī)療器械——生物樣品中量的測量——校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量WS/T356參考物質(zhì)互換性評估指南WS/T403臨床化學(xué)檢驗(yàn)常用項(xiàng)目分析質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS/T406臨床血液檢驗(yàn)常用項(xiàng)目分析質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS/T409臨床定量檢測方法分析總誤差的評估3.13.23.3序測量參考物質(zhì)所得結(jié)果的程序間關(guān)系，與兩程序測量常規(guī)臨床注：互換性與參考物質(zhì)的基質(zhì)和分析物的性質(zhì)有關(guān)，也與指定測量程序的原理和性能有關(guān)；不互換性反映參考物3.4分析測量范圍analyticalmeasurWS/T408—202423.53.63.73.8樣品特定效應(yīng)sample-specific臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)臨床需要的分析性能水平和目前技術(shù)水平制定檢驗(yàn)程序分析性能性能指標(biāo)限值，一般包括隨機(jī)誤差（標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)）和系統(tǒng)誤差（偏倚）限值]，作為驗(yàn)證結(jié)果解建議及檢驗(yàn)程序制造或研發(fā)者的性能聲明等。WS/T403和WS/T406分別給項(xiàng)目分析性能（隨機(jī)誤差、系統(tǒng)誤差和總誤差）規(guī)范建項(xiàng)性能驗(yàn)證可獨(dú)立進(jìn)行，也可根據(jù)各項(xiàng)驗(yàn)證方WS/T408—202434.3數(shù)據(jù)處理近醫(yī)學(xué)決定水平或相關(guān)病理情況下的臨床常見水平，避免極端水差（SBR）和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差（SWLn2——每批實(shí)驗(yàn)的重復(fù)檢測數(shù)。在SWL大于實(shí)驗(yàn)室規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)差（S0）情況下，可考慮檢驗(yàn)差異的統(tǒng)計學(xué)顯著性，可用卡方（x2）檢v——自由度。WS/T408—20244()2SWR4SM4v()2SWR4SM4 n1(n2?1)+n1?1查x2 n1(n2?1)+n1?15.4結(jié)果解釋一般情況下，若SWL小于或接近實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的分析不精密度標(biāo)準(zhǔn)，認(rèn)為該檢驗(yàn)程序精密度可接受。若SWL大于規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，可考慮進(jìn)行上述統(tǒng)計學(xué)檢驗(yàn)，若SWL明顯大于規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，提示分析不精密度不可接受。必要時，還可結(jié)合其他隨機(jī)誤差（若采用參考物質(zhì)檢測方式，正確度驗(yàn)證應(yīng)檢測至少2個濃度水平的參考物質(zhì)，對每種參考物質(zhì)進(jìn)行至少10次重復(fù)檢測；若采用程序?qū)Ρ确绞剑瑧?yīng)檢測至少20份患者樣品，每份樣品用每種程序檢測1次?；Q的參考物質(zhì)，本標(biāo)準(zhǔn)稱此類檢驗(yàn)項(xiàng)目為A類。對于此類檢驗(yàn)項(xiàng)目，正確度驗(yàn)證的目的是保證檢驗(yàn)結(jié)6.2通過參考物質(zhì)檢測驗(yàn)證正確度WS/T408—20245記錄或計算參考物質(zhì)定值（c）和定值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度（u上述第1、2、3類參考物質(zhì)一般會給第4類參考物質(zhì)定值為同程序組均值，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為該均值的標(biāo)準(zhǔn)誤，即實(shí)驗(yàn)室間標(biāo)準(zhǔn)差除以參加計算各檢測值的均值（m）和標(biāo)準(zhǔn)差（s按下列公式計算偏倚（b）及其標(biāo)準(zhǔn)差（sb偏倚的統(tǒng)計學(xué)顯著性檢驗(yàn)可用簡化的t檢驗(yàn)，若偏倚的絕對值若|b|大于實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的偏倚，且大于2sb，提示檢驗(yàn)程序正確度不可接受；若|b|大于實(shí)偏倚，但小于2sb，提示檢驗(yàn)程序精密度不足或所選參考物質(zhì)不確定度太大，應(yīng)分析原因，酌情考慮重6.3通過程序?qū)Ρ闰?yàn)證正確度按上述方案用待驗(yàn)證檢驗(yàn)程序和對比程序檢測樣品，記錄計算差值的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，即為檢驗(yàn)程序的偏倚（b）及其標(biāo)準(zhǔn)差（sb）。偏倚的統(tǒng)計學(xué)顯著性檢參見本標(biāo)準(zhǔn)第6.2.3條。在|b|大于實(shí)驗(yàn)室規(guī)定偏倚但小于2sb情況下，提示兩種檢驗(yàn)程序中的一種），WS/T408—20246度對已知濃度進(jìn)行線性回歸，計算特定回歸參數(shù)，與規(guī)7.2樣品準(zhǔn)備與檢測來自不同個體的樣品），也可以是由2個高低濃度樣品按不同比例混合而制備的系列混合樣品系列混合樣品，但對于不便制備混合樣品的檢驗(yàn)項(xiàng)目（如血細(xì)胞分析可能適宜選用患者樣品。釋樣品，應(yīng)合理選用添加物和稀釋劑，盡量減小可能的樣品互換性改7.3數(shù)據(jù)處理以已知濃度做自變量（x各單次檢測濃度做因變量（y進(jìn)行直線回歸，得回歸方程： （8）用回歸方程計算各已知濃度下的預(yù)測值（),用下式計算直線回歸的剩余標(biāo)準(zhǔn)差（s）:n1——樣品數(shù)；n2——每樣品的重復(fù)檢測數(shù)。按本標(biāo)準(zhǔn)第5.3條所述方法計算批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差（SWR在Sy|x＞SWR情況下，可用F檢驗(yàn)判斷Sy|x是否顯著大于SWR（有無顯著非線性用下列公式計算F值及Sy|x和SWR的自由度（Vy|x和VWR 查F表或用辦公軟件相關(guān)函數(shù)計算特定假排除概率（如0.05）下于臨界F值，則認(rèn)為Sy|x顯著大于SWR。WS/T408—20247在Sy|x顯著大于SWR情況下，可按下式計算非線性標(biāo)準(zhǔn)差（SNLSNL=√Sy|x2?SWR2…………………（13）7,4結(jié)果解釋一般情況下，若Sy|x不顯著大于SWR，認(rèn)為檢驗(yàn)程序的線性可接受；若Sy|x顯著大于SWR，若Sy|x顯著大于SWR，且SNL顯著大于實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的非線性標(biāo)準(zhǔn)差，提示檢驗(yàn)程序線性不可接受。必要時，還可結(jié)合其他隨機(jī)誤差（分析不精密度和非特異性）驗(yàn)證結(jié)果，作綜合分定效應(yīng)（非特異性與規(guī)定的相關(guān)指標(biāo)比較，得出驗(yàn)證結(jié)論。8.2通過干擾試驗(yàn)驗(yàn)證特異性水平或重要參考區(qū)間限值。應(yīng)準(zhǔn)備足夠體積的樣（如抗凝劑）等，可根據(jù)檢驗(yàn)程序的測量原理及其已知可能干擾因素，酌情選擇試驗(yàn)干擾物。溶解，樣品基質(zhì)不發(fā)生明顯變化。添加原液時，應(yīng)向基按上述方案用待驗(yàn)證程序檢測基礎(chǔ)樣品和添加樣品，記錄），d=c+?c0……………………（14）WS/T408—20248兩樣品差異的統(tǒng)計學(xué)顯著性檢驗(yàn)可用簡化的t檢驗(yàn)，若|d|＞2sd，則認(rèn)為存在顯著差異。若總偏倚大于實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的偏倚，且|d|＞8.3通過程序?qū)Ρ闰?yàn)證特異性按上述方案用待驗(yàn)證檢驗(yàn)程序和對比程序檢測樣品，記錄按本標(biāo)準(zhǔn)第5.3條所述方法計算待驗(yàn)證程序和對比程序的批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差（sWR1和sWR2計算每個樣品的每個程序結(jié)果的均值，計算每個樣品兩程序均值的差值（d計算全部下式計算d的精密度相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)差（sPRn——每個樣品每種程序的重復(fù)檢測數(shù)。若sd＞sPR，可按本標(biāo)準(zhǔn)第7.3條所述方法檢驗(yàn)差異是否差（sss一般情況下，若sd接近sPR，或sss小于或接近實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的樣品特定效應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差，認(rèn)為檢驗(yàn)程序的若sss大于實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的樣品特定效應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差，且sd明顯大于sPR，當(dāng)對比程序?yàn)閰⒖紲y量程序時，提示檢驗(yàn)程序存在不可接受的樣品特定效應(yīng)；當(dāng)對比程序?yàn)槌Ｒ?guī)檢驗(yàn)程序時，提示他隨機(jī)誤差（分析不精密度和非線性）驗(yàn)證結(jié)果，作綜合分WS/T408—20249出的分析性能情況（如不精密度、非線性、非特異性等表現(xiàn)）僅反映HDL-C的可能情況，其他類別檢驗(yàn)和應(yīng)用及實(shí)驗(yàn)室條件等，酌情選擇適宜的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)及實(shí)相關(guān)要求，但由于某種原因，實(shí)驗(yàn)室擬改用程序B進(jìn)行HDL根據(jù)有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和指南，實(shí)驗(yàn)室規(guī)定HDL-C允許總隨機(jī)誤差4允許系統(tǒng)誤差5根據(jù)工作經(jīng)驗(yàn)、A.2精密度驗(yàn)證 (>1.5mmol/L）的剩余血清，混勻，分裝5份，密封，-70℃保存。用程序B對樣品進(jìn)行5批檢測，每），將5批實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于電子表格B2～D6，用AVERAGE和STDEV函數(shù)計算批均值和批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差SWRi（E2~E6、F2～F6計算SWRi2（G2～G6SWL計算結(jié)果為0.0242mmol/L；進(jìn)行x2檢驗(yàn)；按公式（5）計算自由度V（E14按公式（4）計算x2值（E15，結(jié)果為17.6用CHIINV函數(shù)計算0.05假排除概率下的臨界x2值（x2critE16，結(jié)果為22.4x2＜x2crit，故SWL不明顯高于S0。SWL＜S0，無須進(jìn)行x2檢驗(yàn)。A.3正確度驗(yàn)證A.3.1通過參考物質(zhì)檢測驗(yàn)證正確度用Excel辦公軟件處理數(shù)據(jù)（見附件電子表格），G本實(shí)驗(yàn)n為10，列于M3，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值（c）及其b的計算結(jié)果為0.038mmol/L；實(shí)驗(yàn)室規(guī)定允許偏倚為5折算為絕對偏倚（b0）為0.075mmo對GBW09195數(shù)據(jù)做相同處理，得b0.030mmol/L，Sb0.0205mmol/L，b00.051mmol/L。WS/T408—2024A.3.2通過程序?qū)Ρ闰?yàn)證正確度選用程序A做對比程序。收集HDL-C1mmol/L～1.7mmol/L臨床標(biāo)本血清20份，用程序A和程序B檢用Excel辦公軟件處理數(shù)據(jù)（見附件電子表格處理過程如將兩種程序測定20份樣品結(jié)果列于電子表格B2～C21，計算每份樣品兩程序結(jié)果的差值（程序B-程用AVERAGE和STDEV函數(shù)計算差值的均值（b）和標(biāo)準(zhǔn)差（sbD24、D25b和sb計算結(jié)果分別為計算程序A檢測結(jié)果均值（mB22實(shí)驗(yàn)室規(guī)定允許偏倚為5折算為絕對偏倚（b0）為0A.4線性驗(yàn)證選用5水平混合樣品（由低到高，樣品1～5）進(jìn)行線性驗(yàn)證，收集HDL-C＜1mmol/L和＞2mmol/L臨床標(biāo)本血清，混勻，得樣品1和5，精密等體積混合樣品1和5，得樣品3，同法混合樣品1和3及3和5，用Excel辦公軟件處理數(shù)據(jù)（見附件電子表格處理過程如值（D2、D6），按稀釋比例計算水平2～3的已知值（D3～D5），將5水平已知值（D2～D6）粘貼于另兩自由度（Vy|xC20）等回歸參數(shù)，Sy|x結(jié)果為0.0318；按A2.1所述方法計算平均批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差（SWR）（G2）及其自由度（VWR）（H2），SWR計算結(jié)果為0.0186，Sy|x似明顯大于SWR；），），將檢測值（均值）對已知值作圖（見附件），圖中實(shí)線為y=x直線，虛線為檢測值擬合線，可見檢按公式（13）計算非線性標(biāo)準(zhǔn)差（SNLD25結(jié)果為0.0258mmol/L；SNL＜SNL0，認(rèn)為程序B的非線A.5特異性驗(yàn)證A.5.1通過干擾實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證特異性根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目性質(zhì)、方法原理等，認(rèn)為影響HDL-C結(jié)果的主要因素可能是血清中的其他脂蛋白，尤其是極低密度脂蛋白（VLDL），擬試驗(yàn)VLDL對程序B的干擾。VLDL是血清甘油三脂（TG）的主要來源，臨床標(biāo)本中常見的較高TG水平為3mmol/L～5mmol/L，收集此濃度范圍的臨床標(biāo)本清，做基礎(chǔ)樣品；取基礎(chǔ)樣品2份，分別精密加入10％體積的干擾物原液或生理鹽水，混勻；用程序B用Excel辦公軟件處理數(shù)據(jù)（見附件電子表格處理過程如將基礎(chǔ)樣品和添加樣品檢測結(jié)果分列于電子表格B2～B11和C2～C11，用AVERAGE函數(shù)計算其均值（B13、C13用STDEV函數(shù)計算其標(biāo)準(zhǔn)差（B14、C14用公式（13）和（14）計算兩樣品均值的差值（d）及其標(biāo)準(zhǔn)差（sdC15、C16結(jié)果分別為0.0150mmol/L和0.0057mmol/L，d＞2sd，提示較高水平VLDL可能對程序B有明顯影響，可使HDL-C結(jié)果升高約1.2%;WS/T408—2024正確度驗(yàn)證結(jié)果顯示程序B偏倚小于3A3實(shí)驗(yàn)室規(guī)定允許偏倚為5其他干擾試驗(yàn)未見明A.5.2通過程序?qū)Ρ闰?yàn)證特異性選用程序A做對比程序。收集HDL-C1mmol/L～1.7mmol/L臨床標(biāo)本血清20份，用程序A和程序B檢用Excel辦公軟件處理數(shù)據(jù)（見附件電子表格處理過程如將兩種程序測定20份樣品結(jié)果列于電子表格B3～C22和G3～H22，用AVERAGE函數(shù)計算各程序各樣品的均值（m