阻抗法全自動微生物檢測系統(tǒng)校準規(guī)范

JJF2056—20231阻抗法全自動微生物檢測系統(tǒng)校準規(guī)范1范圍校準。2引用文件本規(guī)范引用了下列文件:JJF1101—2019環(huán)境試驗設備溫度、濕度參數校準規(guī)范凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本規(guī)范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本規(guī)范。3概述阻抗法全自動微生物檢測系統(tǒng)(以下簡稱檢測系統(tǒng))是通過測量微生物代謝引起的培養(yǎng)基電特性的變化來測定樣品中微生物含量的儀器。在培養(yǎng)過程中,微生物的新陳代謝作用可使培養(yǎng)基中電惰性的大分子底物,如碳水化合物、蛋白質、脂肪等營養(yǎng)物質代謝為電活性的小分子產物,使培養(yǎng)基導電性增強。檢測系統(tǒng)由溫控系統(tǒng)和電子分析器組成。接種了樣品的生長培養(yǎng)基置于一個裝有一對不銹鋼電極的樣品管內,樣品管在裝配溫控系統(tǒng)和電子分析器的恒溫培養(yǎng)艙中培養(yǎng),檢測系統(tǒng)每過一定時間記錄每個樣品阻抗的變化,比照內部設定的陽性檢出閾值,記錄檢測為陽性的時間。根據標準樣品的微生物濃度和檢出時間繪制檢測系統(tǒng)內置的標準曲線,比對校準曲線計算實測樣品的微生物含量。4計量特性檢測系統(tǒng)的校準項目及技術指標見表1。表1檢測系統(tǒng)校準項目及指標校準項目計量特性指標溫度示值誤差±1℃溫度波動度±1℃溫度均勻度≤2.0℃檢出限≤10CFU/mL線性相關系數R2≥0.98重復性≤10%注:以上技術指標不用于合格性判別,僅供參考。JJF2056—20232ΔTdΔTd=Td-To(1)ΔTf=±m(xù)ax[(Tjmax-Tjmin)/2](2)5校準條件5.1環(huán)境條件實驗室環(huán)境應當滿足生產廠家的安裝要求:a)環(huán)境溫度(15~30)℃;b)相對濕度≤90%。5.2標準物質和校準設備5.2.1標準物質大腸埃希氏菌菌落計數國家有證標準物質或枯草芽孢桿菌菌落計數國家有證標準物質。5.2.2化學試劑無菌生理鹽水(0.85%NaCl)或無菌磷酸鹽緩沖液pH(7.2~7.4),見附錄A中A.1~A.2。EC肉湯(E.colibroth)大腸埃希氏菌液體培養(yǎng)基或NB營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(Nutritionbroth),見附錄A中A.3~A.4。5.2.3校準設備無菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度);或移液器(量程1mL)及適配的無菌吸頭。溫度校準裝置,溫度測量范圍滿足(20~50)℃,最大允許誤差為±0.1℃。校準設備需經過計量檢定或校準。6校準項目和校準方法在溫度計量特性校準過程中,應根據檢測系統(tǒng)的結構組成,將溫度校準裝置探頭置于檢測系統(tǒng)內架放置樣品管的位置,選取具有代表性的位置孔(如檢測系統(tǒng)是單層內架的,則選取中心孔和四周至少5個孔位;如檢測系統(tǒng)的同一箱體內存在多層內架,則選取中心孔及四周至少9個孔位)分別進行校準。6.1溫度示值誤差、溫度波動度和溫度均勻度將周圍環(huán)境溫度控制在檢測系統(tǒng)的說明書允許范圍內,開機預熱,設定并達到目標溫度,檢測系統(tǒng)在穩(wěn)定狀態(tài)下,所有測試孔的溫度每2min記錄一次,在30min內共測量16次,計算溫度顯示值與中心位置孔(檢測系統(tǒng)內架放置樣品管的幾何中心位置孔或接近幾何中心最近的位置孔)16次測量結果的平均值之差為溫度示值誤差的測量結果,按照公式(1)進行計算;校準裝置各測量孔在30min內(每2min測試一次)實測最高溫度與最低溫度之差的一半,冠以“±”號,取全部測量點中變化量的最大值作為溫度波動度的測量結果,按照公式(2)計算;在30min內全部測量點的每次測試中實測最高溫度與最低溫度之差的算術平均值作為溫度均勻度的測量結果,按照公式(3)計算。JJF2056—20233ΔTu=(Timax-Timin)/n(3)式中:ΔTd—溫度示值誤差,℃;Td—檢測系統(tǒng)的溫度顯示值,℃; To—校準裝置測得的中心位置溫度平均值,℃;ΔTf—溫度波動度,℃;Tjmax—校準裝置某個測量孔j在16次測量中的最高溫度,℃;Tjmin—校準裝置某個測量孔j在16次測量中的最低溫度,℃;ΔTu—溫度均勻度,℃;n—測量次數;Timax—各校準位置孔在第i次測得的最高溫度,℃;Timin—各校準位置孔在第i次測得的最低溫度,℃。6.2線性相關系數將大腸埃希氏菌菌落計數標準物質或枯草芽孢桿菌菌落計數標準物質按照證書要求溶于無菌生理鹽水或無菌磷酸鹽緩沖液中,并用該溶液依次10倍稀釋為6個梯度。其中細菌的含量從105CFU/mL逐步稀釋到0CFU/mL。每個梯度稀釋樣品/測試樣品,取1mL加入適量的培養(yǎng)基(根據細菌類型選擇EC肉湯或NB肉湯)。每個梯度做2管重復。一起上機檢測,按照細菌濃度不同,約2h~20h后出結果。按公式(4)計算線性相關系數r。(xi-)(yi-)r(4)(xi-)2×(yi-)2式中:xi—第i個稀釋梯度的檢出時間;—每個稀釋梯度的檢出時間平均值;yi—第i個稀釋梯度大腸埃希氏菌濃度的對數值;—每個稀釋梯度大腸埃希氏菌濃度的對數值的平均值;n—稀釋梯度的個數。6.3檢出限菌落計數標準物質的梯度稀釋樣品,按照濃度從高到低,最低稀釋梯度≤10CFU/mL。記錄最低可被檢測到的稀釋梯度。檢出限結果以≤10CFU/mL或≤102CFU/mL、≤103CFU/mL等方式記錄。6.4重復性使用菌落計數標準物質配制濃度約(103~105)CFU/mL的測試樣品。測試樣做6管重復。依次記錄每管測試樣的檢出時間,按式(5)計算檢出時間的相對標準偏差(RSD),作為重復性的評價。JJF2056—20234 RSD=i-1)2××100%(5)式中,ri—每一管重復測試樣品的檢出時間;—測試樣品的n次測量平均檢出時間。7校準結果表達JJF1071中5.12的要求,并給出各校準項目名稱和測量結果以及測量結果的擴展不確定度。8復校時間間隔阻抗法全自動微生物檢測系統(tǒng)復校準間隔建議一般不超過1年。由于復校時間間隔的長短是由檢測系統(tǒng)的使用情況、使用者、檢測系統(tǒng)本身質量等諸因素所決定的,因此,送校單位可根據實際使用情況自主決定復校時間間隔。JJF2056—20235附錄A培養(yǎng)基和試劑A.1磷酸鹽緩沖液A.1.1成分磷酸二氫鉀(KH2PO4)34.0g;蒸餾水500mL;pH7.2。A.1.2制法貯存液:稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中,用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉調節(jié)pH,用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。稀釋液:取貯存液1.25mL,用蒸餾水稀釋至1000mL,分裝于適宜容器中,于121℃高壓滅菌15min。A.2無菌生理鹽水A.2.1成分氯化鈉8.5g;蒸餾水1000mL。A.2.2制法稱取8.5g氯化鈉溶于1000mL蒸餾水中,于121℃高壓滅菌15min。A.3EC肉湯(E.colibroth)A.3.1成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0g;3號膽鹽或混合膽鹽1.5g;乳糖5.0g;磷酸氫二鉀(K2HPO4)4.0g;磷酸二氫鉀(KH2PO4)1.5g;氯化鈉5.0g;蒸餾水1000mL;pH6.9±0.1。A.3.2制法將上述成分溶解于蒸餾水中,調節(jié)pH。于121℃高壓滅菌15min。A.4NB肉湯(Nutritionbroth)A.4.1成分胰蛋白胨15.0g;植物蛋白胨5.0g;氯化鈉5.0g;蒸餾水(最終定容至)1000mL。JJF2056—20236A.4.2制法將上述成分溶解于蒸餾水中,于121℃高壓滅菌15min。滅菌后pH為7.2±0.2。A.5無菌1mol/LNaOHA.5.1成分氫氧化鈉(NaOH)40.0g;蒸餾水1000mL。A.5.2制法稱取40g氫氧化鈉溶于1000mL蒸餾水中,于121℃高壓滅菌15min。JJF2056—20237附錄B校準證書內頁格式(推薦性表格)序號校準項目校準結果1溫度示值誤差2溫度均勻度3溫度波動度4線性相關系數5檢出限6重復性校準溫度示值誤差測量結果的擴展不確定度為:校準員:核驗員:JJF2056—20238附錄C校準原始記錄格式(推薦性表格)系統(tǒng)名稱型號規(guī)格制造廠商出廠編號委托單位名稱聯系人地址電話溫度濕度大氣壓記錄編號校準員核驗員一、溫度示值誤差、溫度波動度、溫度均勻度(選擇5~9個測量點)時間/min024681012141618202224262830不同位置孔測量值To/℃(其中1為中心位置孔)123456789系統(tǒng)溫度顯示值Td/℃溫度示值誤差ΔTd/℃溫度波動度ΔTf/℃溫度均勻度ΔTu/℃JJF2056—20239二、微生物線性測量標準物質檢出時間菌液濃度CFU/mL相關系數r檢出限CFU/mL菌落計數標準物質三、微生物定量測量結果序號待測樣檢出時間重復性/%123456平均值JJF2056—202310附錄D溫度示值誤差校準結果不確定度評定示例D.1測量方法采用全自動溫度校準裝置測定阻抗法微生物定量分析儀的恒溫孵育系統(tǒng),并與檢測系統(tǒng)的溫度監(jiān)測顯示值進行比較。D.2測量模型示值誤差可由公式(D.1)給出:ΔT=To-ΔT=To-Ti(D.1)ΔT—溫度示值誤差,℃;To—監(jiān)測系統(tǒng)的溫度監(jiān)測顯示值,℃; Ti—溫度校準裝置測得的溫度,℃。D.3不確定度來源不確定度來源包括:測量重復性引入的標準不確定度u1,檢測系統(tǒng)的溫度分辨力引入的標準不確定度u2和溫度校準裝置引入的不確定度u3。D.4不確定度分量評定D.4.1測量重復性引入的標準不確定度u1選定一臺系統(tǒng),使用溫度校準裝置對恒溫孵育系統(tǒng)連續(xù)測量10次,得到一組測量值:35.28℃,35.11℃,35.37℃,35.83℃,35.57℃,35.37℃,35.67℃,35.64℃,35.44℃,35.45℃。則單次測量結果的標準差s(To): s(To)=(Toi-To)2/(n-1)≈0.209℃其中Toi為溫度校準裝置測得的中心位置溫度單次測量值,實際校準時在重復性條件下連續(xù)測量16次,以16次測量的算術平均值作為結果,則由測量重復性引入的標準不確定度為:D.4.2檢測系統(tǒng)溫度分辨力引入的標準不確定度u2u1=s(To)/n=0.209℃/D.4.2檢測系統(tǒng)溫度分辨力引入的標準不確定度u2檢測系統(tǒng)顯示溫度的最小分辨力為0.1℃,區(qū)間半寬a=0.05℃,按均勻分布,包含因子取k=3,由此引起的標準不確定度為:D.4.3溫度校準裝置引入的標準不確定度u3u2=0.05D.4.3溫度校準裝置引入的標準不確定度u3溫度校準裝置的最大允許誤