高中生物-檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)

關(guān)于高中生物___檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)：檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)原理：某些化學(xué)試劑能夠使生物組織中的有關(guān)有機(jī)化合物產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)?；瘜W(xué)試劑+有機(jī)化合物→特定的顏色①還原糖+斐林試劑磚紅色沉淀②脂肪+蘇丹Ⅲ（或蘇丹Ⅳ）染液→橘黃色（或紅色）③蛋白質(zhì)+雙縮脲試劑→紫色④淀粉+碘→藍(lán)色水浴加熱第2頁,共30頁，星期六，2024年，5月斐林試劑與雙縮脲試劑的比較斐林試劑用的是甲液和乙液，須現(xiàn)配現(xiàn)用，混合均勻，水浴加熱。雙縮脲試劑用的是A液和B液，先加A液，后滴B液，不用水浴加熱。第3頁,共30頁，星期六，2024年，5月第4頁,共30頁，星期六，2024年，5月雙縮脲反應(yīng)：含有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物與堿性硫酸銅作用，生成藍(lán)紫色的復(fù)合物第5頁,共30頁，星期六，2024年，5月斐林試劑與雙縮脲試劑都由NaOH和CuSO4組成，但二者有如下三點(diǎn)不同：①溶液濃度不同。斐林試劑中NaOH的濃度為0.1g/mL，CuSO4的濃度為0.05g/mL；雙縮脲試劑中NaOH的濃度為0.1g/mL，CuSO4的濃度為0.01g/mL。②使用原理不同。斐林試劑實(shí)質(zhì)是新配制的Cu(OH)2溶液；雙縮脲試劑實(shí)質(zhì)是在堿性環(huán)境下的Cu2＋。③使用方法不同。使用斐林試劑時(shí)，先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合，然后立即使用。使用雙縮脲試劑時(shí)，先加入NaOH溶液，然后再加入CuSO4溶液。第6頁,共30頁，星期六，2024年，5月第7頁,共30頁，星期六，2024年，5月一、可溶性還原糖的檢測：（1）原理：還原糖+斐林試劑磚紅色沉淀。（2）選材：蘋果、梨、白蘿卜。含糖量較高，顏色為白色或近于白色的植物組織。（3）檢測過程：水浴加熱振蕩混勻50～65℃水浴加熱2min2mL組織樣液剛配制的斐林試劑2mL呈現(xiàn)淺藍(lán)色變成磚紅色（Cu2O）還原糖：含有半縮醛羥基的糖類，主要是葡萄糖、果糖和麥芽糖。蔗糖、淀粉和纖維素屬于非還原糖。第8頁,共30頁，星期六，2024年，5月當(dāng)質(zhì)量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液與質(zhì)量濃度為0.05g/mL的硫酸銅溶液混合后，立即生成淡藍(lán)色的Cu（OH）2懸濁液。Cu（OH）2與葡萄糖、果糖、麥芽糖等可溶性還原糖共熱，能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀。因此，利用該反應(yīng)，可證明樣液中含可溶性還原糖。R—CHO+2Cu(OH)2→R—COOH+Cu2O↓+2H2O甲液乙液等量混合，現(xiàn)用現(xiàn)配，切不可分開滴加，或者久置后才用。第9頁,共30頁，星期六，2024年，5月制備組織樣液梨或蘋果研磨取5g，放入研缽中洗凈、去皮、切塊過濾濾液（用單層紗布）顯色反應(yīng)向試管中加入2ml組織樣液向試管中加入2ml新配制的斐林試劑或本尼迪特試劑振蕩混勻50～65℃水浴加熱2min觀察現(xiàn)象觀察溶液顏色變化：淺藍(lán)色→棕色→磚紅色結(jié)論：生成磚紅色沉淀，說明梨或蘋果中含有還原糖。磚紅色的糖（還原糖）非（斐林試劑）常好吃第10頁,共30頁，星期六，2024年，5月2ml組織樣液1ml新配制的斐林試劑5065℃水浴加熱約2min觀察顏色變化磚紅色淺藍(lán)色棕色【斐林試劑】：甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液，使用前等體積混合均勻（生成淺藍(lán)色的Cu（OH）2懸濁液），現(xiàn)配現(xiàn)用（時(shí)間一長，Cu（OH）2沉淀在溶液底部無法發(fā)生反應(yīng)。且需要水浴加熱。第11頁,共30頁，星期六，2024年，5月還原糖的檢測結(jié)果斐林試劑與可溶性還原糖在水浴熱的條件下，生成磚紅色的Cu2O沉淀。-CHO+Cu(OH)2懸濁液-COOH+Cu2O↓（磚紅色）第12頁,共30頁，星期六，2024年，5月二、脂肪的檢測（1）選材：經(jīng)浸泡去種皮的花生種子。（2）檢測過程：制片選取最薄的切片置于潔凈的載玻片中央制成臨時(shí)裝片：滴12滴蒸餾水，蓋上蓋玻片染色：在薄片上滴加23滴蘇丹Ⅲ染液，染色23min洗去浮色：用吸水紙吸去染液，滴加體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精12滴鏡檢觀察：在低倍鏡下尋找到已著色的圓形小顆粒，然后用高倍鏡觀察。蘇三（蘇丹Ⅲ）送了我一個(gè)橘黃色的胭脂（脂肪）切片：花生種子（浸泡３－４h），去皮，將子葉削成薄片。視野中有橘黃色顆粒第13頁,共30頁，星期六，2024年，5月橘黃色小圓顆粒即為脂肪顆粒脂肪+蘇丹Ⅲ（或蘇丹Ⅳ）染液橘黃色（或紅色）第14頁,共30頁，星期六，2024年，5月第15頁,共30頁，星期六，2024年，5月注意事項(xiàng)：（1）若用花生種子作實(shí)驗(yàn)材料，必須提前浸泡3～4小時(shí)，浸泡時(shí)間短了，不容易切片，浸泡時(shí)間過長，則組織太軟，切下的薄片不易成形，切片要盡可能的薄。（2）染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解蘇丹Ⅲ），染色和洗浮色時(shí)間不宜過長。第16頁,共30頁，星期六，2024年，5月三、蛋白質(zhì)的檢測：（1）原理：蛋白質(zhì)+雙縮脲試劑紫色絡(luò)合物（2）選材：黃豆、雞蛋清（稀釋）、牛奶、豆?jié){（3）檢測過程：2ml組織樣液2ml雙縮脲試劑A液，搖勻3-4滴雙縮脲試劑B液，搖勻觀察顏色變化紫色雙（雙縮脲）子（紫色）彈（蛋白質(zhì)）第17頁,共30頁，星期六，2024年，5月

將尿素加熱，兩分子尿素放出一分子氨而縮合成雙縮脲。反應(yīng)式為:雙縮脲（H2NOC-NH-CONH2）在堿性環(huán)境（NaOH）中能和Cu2+作用生成紫色的絡(luò)化物，這個(gè)反應(yīng)叫做雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中含有的肽鍵結(jié)構(gòu)與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似，因此，蛋白質(zhì)也可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)。雙縮脲≠雙縮脲試劑第18頁,共30頁，星期六，2024年，5月無色紫色（創(chuàng)造堿性條件）（提供Cu2+）雙縮脲試劑B3-4滴雙縮脲試劑A2mL2mL組織樣液在堿性條件（NaOH）下，蛋白質(zhì)中的肽鍵（—NH—CO—）與Cu2＋作用生生紫色絡(luò)合物。因此，操作時(shí)，應(yīng)先加A再加B，且A多B少，如果B過量，Cu2＋的藍(lán)色就會遮蓋生成的紫色。第19頁,共30頁，星期六，2024年，5月制備組織樣液黃豆組織樣液（或雞蛋清稀釋液）黃豆浸泡研磨過濾濾液去皮、切片蛋清液雞蛋雞蛋清稀釋液稀釋顯色反應(yīng)向試管中注入2ml組織樣液向試管中注入2ml雙縮脲試劑A加入3-4滴雙縮脲試劑B觀察現(xiàn)象觀察顏色變化：無→紫色結(jié)論：加入雙縮脲試劑A后，顏色呈現(xiàn)為無色，加入B后，變?yōu)樽仙?，說明雞蛋清中有蛋白質(zhì)存在。第20頁,共30頁，星期六，2024年，5月蛋白質(zhì)的檢測結(jié)果第21頁,共30頁，星期六，2024年，5月注意事項(xiàng)：（1）如果用雞蛋清作為材料，則必須進(jìn)行充分稀釋，否則反應(yīng)后的產(chǎn)物會粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不徹底，且試管不易洗刷干凈。（2）【雙縮脲試劑】：A液：0.1g/mLNaOH，B液：0.01g/mLCuSO4。先加A液后加B液，且B不能過量，不需要加熱。（3）過量的雙縮脲試劑B會與試劑A反應(yīng)，使溶液呈藍(lán)色，而掩蓋生成的紫色。（4）先加入A液2ml，搖勻；再加入B液3-4滴，搖勻。第22頁,共30頁，星期六，2024年，5月四、淀粉的檢測：（2）選材：馬鈴薯勻漿（1）原理：淀粉+碘藍(lán)色（3）檢測過程：2ml組織樣液2滴碘液觀察顏色變化藍(lán)色藍(lán)（藍(lán)色）點(diǎn)（淀粉）點(diǎn)（碘）第23頁,共30頁，星期六，2024年，5月制備組織樣液馬鈴薯塊莖研磨取5g，放入研缽中洗凈、去皮、切塊過濾濾液顯色反應(yīng)向試管中注入2ml組織樣液加入5滴碘-碘化鉀觀察現(xiàn)象觀察溶液顏色變化：無色→藍(lán)色結(jié)論：溶液變藍(lán)，說明馬鈴薯組織中有淀粉存在。第24頁,共30頁，星期六，2024年，5月蘋果、梨、白蘿卜斐林試劑磚紅色沉淀花生種子蘇丹Ⅲ染液蘇丹Ⅳ染液橘黃色紅色豆?jié){、牛奶、雞蛋清雙縮脲試劑紫色面粉、馬鈴薯勻漿液碘液藍(lán)色注：鑒定還原糖需加熱；脂肪的鑒定不一定要用顯微鏡，要觀察脂肪顆粒，則必須用顯微鏡。第25頁,共30頁，星期六，2024年，5月五、觀察DNA、RNA在細(xì)胞中的分布實(shí)驗(yàn)原理：（1）DNA主要分布在細(xì)胞核內(nèi)，RNA大部分存在于細(xì)胞質(zhì)中。（2）甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對DNA和RNA的親和力不同，甲基綠使DNA呈現(xiàn)綠色，吡羅紅使RNA呈現(xiàn)紅色。（3）利用甲基綠、吡羅紅混合染色劑將細(xì)胞染色，可以顯示DNA和RNA在細(xì)胞中的分布。（4） 鹽酸能夠改變細(xì)胞膜的通透性，加速染色劑進(jìn)入細(xì)胞，同時(shí)使染色體中的DNA和蛋白質(zhì)分離，有利于DNA和染色劑結(jié)合。 甲基綠使DNA呈現(xiàn)綠色，吡羅紅使RNA呈現(xiàn)紅色，通過觀察兩種顏色出現(xiàn)的部位來判斷DNA和RNA在細(xì)胞中的分布。第26頁,共30頁，星期六，2024年，5月方法步驟：（1）取材和制片在潔凈的載玻片上滴1滴0.9%NaCl溶液用消毒牙簽刮口腔內(nèi)側(cè)壁后涂抹在液滴上將涂有口腔上皮細(xì)胞的載玻片在酒精燈上烘干（2）水解：將烘干的載玻片放入盛有30mL8%鹽酸的小燒杯中，30℃水浴保溫5min（3）沖洗涂片：用蒸餾水的緩水流沖洗載玻片10秒（4）染色吸水紙吸去載玻片上的水分在載玻片上滴加兩滴2滴用吡羅紅，甲基綠染色劑，染色5分鐘吸去多余的染色劑，蓋上蓋玻片（5）觀察：先低倍鏡：選染色均勻，色澤淺的區(qū)域，移到視野中央。后高倍鏡：觀察細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的染色情況。第27頁,共30頁，星期六，2024年，5月0.9%生理鹽水？人口腔上皮細(xì)胞8%鹽酸？蒸餾水30℃水浴吡羅紅甲基綠染色劑取材水解沖洗染色觀察第28頁,共30頁，星期六，2024年，5月思考與討論：（1）9%Nacl溶液的作用？