病毒標(biāo)本的采集、運(yùn)送及生物安全要求

新型冠狀病毒樣本采集、運(yùn)送及生物安全主要內(nèi)容

背景情況

標(biāo)本采集、保存和運(yùn)輸個(gè)人防護(hù)

其他生物安全

要求

一、背景情況新型冠狀病毒（β屬）------2019-nCoV

1、病原學(xué)背景對(duì)熱敏感，56℃30分鐘、75%酒精、含氯消毒劑、過(guò)氧乙酸和氯仿等脂溶劑均可有效滅活，氯已定不能有效滅活。目前收治病例多數(shù)有武漢市華南海鮮市場(chǎng)暴露史，部分病例為家庭聚集性發(fā)病，有醫(yī)務(wù)人員感染，證實(shí)了人傳人傳染。飛沫傳播接觸傳播2、可能的傳播途徑3、工作依據(jù)根據(jù)目前掌握的新型冠狀病毒生物學(xué)特點(diǎn)、流行病學(xué)特征、致病性、臨床表現(xiàn)等信息，該病原體暫按照病原微生物危害程度分類中第二類病原微生物進(jìn)行管理。

《新型冠狀病毒感染的肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)指南(第二版）》（國(guó)衛(wèi)辦疾控函〔2020〕41號(hào)附件4）《新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南(第二版）》（國(guó)衛(wèi)辦科教函〔2020〕70號(hào)）

二、標(biāo)本采集、保存和運(yùn)輸1、標(biāo)本采集對(duì)象新型冠狀病毒感染觀察病例（已隔離）；需要進(jìn)行新型冠狀病毒感染診斷或鑒別診斷者；其它需要進(jìn)一步篩查檢測(cè)的研究材料（如溯源分析）。2、標(biāo)本采集要求人員資質(zhì)：從事新型冠狀病毒檢測(cè)標(biāo)本采集的技術(shù)人員應(yīng)經(jīng)過(guò)生物安全培訓(xùn)（培訓(xùn)合格）和具備相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)技能（《護(hù)理技術(shù)手冊(cè)》-“標(biāo)本采集技術(shù)”）。采樣人員個(gè)人防護(hù)（PPE）裝備：N95口罩、護(hù)目鏡、防護(hù)服、乳膠手套、防水靴套；如果接觸患者血液、體液、分泌物或排泄物時(shí)，戴雙層乳膠手套。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的需要，可結(jié)合病程多次采樣。3、標(biāo)本采集種類每個(gè)病例必須采集急性期呼吸道標(biāo)本和急性期血液標(biāo)本；重癥病例優(yōu)先采集下呼吸道標(biāo)本（如支氣管或肺泡灌洗液等）。上呼吸道標(biāo)本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物；下呼吸道標(biāo)本：包括深咳痰液、呼吸道抽取物、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液、肺組織活檢標(biāo)本；血液標(biāo)本：盡量采集發(fā)病后7天內(nèi)的急性期血液標(biāo)本。病毒采樣管4、標(biāo)本采集方法4、標(biāo)本采集方法咽拭子：用聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子同時(shí)擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將拭子頭浸入3mL采樣液的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。4、標(biāo)本采集方法鼻拭子：將1根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。取另一根拭子以同樣方法采集另一側(cè)鼻孔。上述兩根拭子浸入同一含3mL采樣液的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。4、標(biāo)本采集方法深咳痰液：要求病人深咳后，將咳出的痰液收集于含3mL病毒保存液的50mL螺口塑料管中。血清標(biāo)本：用不含抗凝劑的真空負(fù)壓采血管采集血液標(biāo)本5mL（紅頭管）,以空腹血為佳。室溫靜置30分鐘，1500～2000rpm離心10分鐘，收集血清于無(wú)菌螺口塑料管中。4、標(biāo)本采集方法鼻咽抽取物或呼吸道抽取物：用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液或從氣管抽取呼吸道分泌物。支氣管灌洗液：將收集器頭部從鼻孔或氣管插口處插入氣管（約30cm深處），注入5mL生理鹽水，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液沖洗收集器1次。肺泡灌洗液：局部麻醉后將纖維支氣管鏡通過(guò)口或鼻經(jīng)過(guò)咽部插入右肺中葉或左肺舌段的支管，將其頂端契入支氣管分支開(kāi)口，經(jīng)氣管活檢孔緩緩加入滅菌生理鹽水，每次30～50mL，總量100～250mL,不應(yīng)超過(guò)300mL。其它材料：依據(jù)相關(guān)需求規(guī)范采集5、標(biāo)本包裝所有標(biāo)本應(yīng)放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有墊圈、耐冷凍的樣本采集管里，擰緊。采樣前，容器外注明姓名、采樣單位、采樣時(shí)間、樣本編號(hào)及種類。將密閉后的標(biāo)本放入大小合適的塑料袋內(nèi)密封，每袋裝一份標(biāo)本。6、標(biāo)本保存用于病毒分離和核酸檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè)，24小時(shí)內(nèi)能檢測(cè)的標(biāo)本可置于4℃保存；24小時(shí)內(nèi)無(wú)法檢測(cè)的標(biāo)本則應(yīng)置于-70℃或以下保存（如無(wú)-70℃保存條件，則于-20℃冰箱暫存）；血清可以4℃存放3天，可在-20℃以下長(zhǎng)期保存；標(biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融，并應(yīng)設(shè)立專庫(kù)或?qū)９駟为?dú)保存標(biāo)本。8、送檢標(biāo)本要求兩種4管標(biāo)本：①符合采樣要求的呼吸道標(biāo)本兩管（每份不少于3ml）；②血清標(biāo)本兩管(每份不少于1ml)；運(yùn)送保存要求：應(yīng)低溫運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融；標(biāo)本包裝要求：采用A類UN2814，嚴(yán)格3層運(yùn)輸包裝。8、送檢標(biāo)本要求標(biāo)本信息要求：①最內(nèi)層容器上注明樣本編號(hào)、樣本種類、姓名及采樣日期；②第二層包裝容器上注明送樣單位；③隨樣附樣本送檢單：規(guī)范填寫(xiě)《新型冠狀病毒檢測(cè)標(biāo)本送檢表》，要求信息完整、字跡清晰可辨、加蓋單位公章（或送檢專用章）。8、送檢標(biāo)本要求最內(nèi)層包裝第二層包裝容器轉(zhuǎn)運(yùn)箱8、送檢標(biāo)本要求9、標(biāo)本運(yùn)送生物安全要求運(yùn)輸高致病性原微生物菌（毒）種或樣本，應(yīng)當(dāng)有專人運(yùn)送；送樣單位應(yīng)當(dāng)對(duì)運(yùn)送人員進(jìn)行相關(guān)的生物安全知識(shí)培訓(xùn)，并在運(yùn)送過(guò)程中采取相應(yīng)的防護(hù)措施；運(yùn)輸過(guò)程注意交接環(huán)節(jié)的消毒：運(yùn)送箱交給運(yùn)送人員前，要求最外層表面經(jīng)過(guò)有效消毒，通常用75%酒精擦拭消毒；運(yùn)送人員個(gè)人防護(hù)：采用一級(jí)防護(hù)，取一次性工作帽一次性外科口罩、工作服（白大褂），必要時(shí)戴一次性乳膠手套。

三、個(gè)人防護(hù)個(gè)人防護(hù)級(jí)別

一級(jí)防護(hù)

穿戴一次性工作帽、一次性外科口罩和工作服（白大褂），必要時(shí)戴一次性乳膠手套；

適用于一般診療活動(dòng)：預(yù)檢分診、普通門診、感染科門診等。個(gè)人防護(hù)級(jí)別

二級(jí)防護(hù)穿戴一次性工作帽、護(hù)目鏡（防霧型）、醫(yī)用防護(hù)口罩（N95）、防護(hù)內(nèi)服或工作服、外套一次性防滲透隔離衣/一次性防護(hù)服（視情況而定）、一次性乳膠手套，必要時(shí)穿一次性鞋套。適用于醫(yī)務(wù)人員在從事與患者有密切接觸的診療活動(dòng)時(shí)（如發(fā)熱門診、留觀室和隔離病房）。個(gè)人防護(hù)級(jí)別

三級(jí)防護(hù)（額外防護(hù)）穿戴一次性工作帽、全面型呼吸防護(hù)器或正壓式頭套、醫(yī)用防護(hù)口罩、防護(hù)內(nèi)服或工作服、外套一次性防護(hù)服、一次性乳膠手鞋、一次性鞋套。適用于為患者實(shí)施吸痰、呼道采樣、氣管插管和氣管切開(kāi)等有可能發(fā)生患者呼吸道分泌物、體內(nèi)質(zhì)的噴射或飛濺工作時(shí)。注：佩戴全面型呼吸防護(hù)器或正壓式頭套時(shí)可無(wú)需目鏡和醫(yī)用口罩。

四、其他生物安全要求1、實(shí)驗(yàn)活動(dòng)生物安全病毒培養(yǎng):指病毒分離、培養(yǎng)、滴定、中和試驗(yàn)、活病毒及其蛋白純化、病毒凍干以及產(chǎn)生活病毒的重組實(shí)驗(yàn)等操作。應(yīng)當(dāng)在生物安全三級(jí)（BSL-3）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。使用病毒培養(yǎng)物提取核酸，裂解劑或滅活劑的加入必須在與病毒培養(yǎng)等同級(jí)別的實(shí)驗(yàn)室和防護(hù)條件下進(jìn)行；應(yīng)報(bào)國(guó)家衛(wèi)健委批準(zhǔn)，取得開(kāi)展相應(yīng)活動(dòng)的資質(zhì)。動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)：指以活病毒感染動(dòng)物、感染動(dòng)物取樣、感染性樣本處理和檢測(cè)、感染動(dòng)物特殊檢查等，應(yīng)當(dāng)動(dòng)物生物安全三級(jí)（ABSL-3）實(shí)驗(yàn)室操作。1、實(shí)驗(yàn)活動(dòng)生物安全未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料操作:未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料在采用可靠的方法滅活前進(jìn)行的病毒抗原檢測(cè)、血清學(xué)檢測(cè)、核酸提取、生化分析，以及臨床樣本的滅活等操作，應(yīng)當(dāng)在生物安全二級(jí)（BSL-2）實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，同時(shí)采用生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室的個(gè)人防護(hù)。滅活材料的操作：感染性材料或活病毒在采用可靠的方法滅活后可進(jìn)行的核酸檢測(cè)、抗原檢測(cè)、血清學(xué)檢測(cè)、生化分析等操作應(yīng)當(dāng)在生物安全二級(jí)（BSL-2）實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。分子克隆等不含致病性活病毒的其他操作，可以在BSL-1實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。下列情況嚴(yán)禁進(jìn)入BSL-2進(jìn)行操作：有感染性疾病身體明顯不適裸露體表有較嚴(yán)重外傷醉酒、吃藥等心理、情緒等……2、實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)入健康要求建議此次2019-nCoV檢測(cè)工作：3、在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)個(gè)人防護(hù)樣本的分裝、滅活、裂解、檢測(cè)等均應(yīng)在生物安全柜內(nèi)操作；未經(jīng)可靠滅活的樣本必須密閉封裝，容器外表面消毒后再拿出生物安全；單位內(nèi)部、實(shí)驗(yàn)室間樣本的運(yùn)輸應(yīng)使用內(nèi)部轉(zhuǎn)運(yùn)箱。4、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備和樣本處理建議此次2019-nCoV檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室消毒工作：常規(guī)消