中藥制劑分析 第二章 中藥制劑分析供試品的制備

1第一節(jié)取樣2第二節(jié)

樣品的提取3第三節(jié)

樣品的凈化4第四節(jié)

濃縮與衍生化5第五節(jié)不同劑型中藥制劑的供試品制備特點(diǎn)第二章中藥制劑分析

供試品的制備第一節(jié)取樣點(diǎn)擊添加文本說(shuō)明點(diǎn)擊添加文本說(shuō)明點(diǎn)擊添加文本說(shuō)明點(diǎn)擊添加文本說(shuō)明點(diǎn)擊添加文本說(shuō)明1一、抽樣

（一）常用術(shù)語(yǔ)

批，批號(hào)，抽樣單元，最小包裝等點(diǎn)擊添加本章標(biāo)題（二）抽樣步驟（1）擬定抽樣計(jì)劃，準(zhǔn)備取樣器皿和盛裝器具等。（2）外包裝的檢查：取樣前，應(yīng)注意品名、產(chǎn)地、規(guī)格等級(jí)及包件式樣是否一致；檢查包裝的完整性、清潔程度以及有無(wú)水跡、霉變或其他物質(zhì)污染等情況；凡有異常情況的包件，拍照后單獨(dú)取樣檢驗(yàn)，并做好詳細(xì)記錄。（3）確定抽樣單元隨機(jī)抽樣法按照隨機(jī)的原則，即保證總體中每個(gè)單位都有同等機(jī)會(huì)被抽中的原則。強(qiáng)調(diào)抽樣的代表性和覆蓋面。（4）用適宜的器具抽取單元樣品，制作最終樣品，分3份，分別裝入盛樣器具并簽封。（5）將被拆分的抽樣單元重新包封，并貼簽標(biāo)記。固體制劑：液體制劑：直接移取：用于均勻性好的液體樣品。分層取樣：用于混濁液和粘度大的溶液(如糖漿劑等)均勻性較差的液體樣品。采樣時(shí)，可用吸管從容器中分層取樣，再將取出的樣品混勻。當(dāng)樣品有沉淀時(shí)，要搖勻后再取樣。抽取樣品法：適用于藥品包裝為箱或袋四分法取樣：適用于樣品量不大的粉末狀、

小塊狀以及小顆粒狀樣品的取樣（三）取樣方法（四）取樣量各類中藥制劑的取樣量至少夠3次檢測(cè)的用量，貴重藥可酌情取樣，每個(gè)全檢量至少3個(gè)最小包裝。（1）粉狀中藥制劑（顆粒劑、散劑）一般取樣100g。（2）液體中藥制劑（口服液、酊劑、酒劑、糖漿劑）一般取樣200mL，同時(shí)應(yīng)注意容器底部是否有沉淀，如有徹底搖勻，均勻取樣。（3）固體中成藥（片劑、丸劑、膠囊劑等）一般取樣100g。二、樣品的粉碎1、粉碎的目的：2、粉碎設(shè)備：⑴保證樣品均勻而有代表性，提高測(cè)定結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度；⑵使樣品中的被測(cè)組分能更快地完全提取出來(lái)。粉碎機(jī)、銅沖、研缽等，生物組織樣品可用高速勻漿機(jī)或玻璃勻漿器。注意：粒度大小合適防止污染或損失

過(guò)篩時(shí)應(yīng)全部通過(guò)篩網(wǎng)三、樣品前處理前的取樣量要求：1．固體制劑：一般為測(cè)定樣品所需量的10～20倍，顆粒劑和散劑可采用“四分法”直至最后剩余量能滿足供檢驗(yàn)用樣品量；其他固體制劑按藥典規(guī)定抽樣。含量測(cè)定時(shí)，一般稱取試樣0.1g以上，可用感量0.1mg的天平；取樣0.1g以下，則需用感量為0.01mg的天平。均勻性和代表性。根據(jù)分析目的合理取樣。2．半流體制劑：不易混勻的，可取供試品適量，精密稱定，精密加入一定量的硅藻土，研磨使成疏散的固體粉末，用“四分法”取樣；或者取供試品適量，精密稱定，加入適宜的溶劑稀釋并定容至一定體積，按液體樣品取樣。3．液體制劑：取樣時(shí)，底部沉淀，振搖均勻后取樣；一般用移液管或刻度吸管精密移取即可。供試樣品檢測(cè)完畢后，應(yīng)保留一半數(shù)量作為留樣觀察，合格者保留一年，并對(duì)該中藥樣品的質(zhì)量情況作定期檢查。如有發(fā)霉變質(zhì)或質(zhì)量變化時(shí)，則隨機(jī)抽樣，以便及時(shí)檢測(cè)，分析原因，改善工藝和穩(wěn)定產(chǎn)品質(zhì)量。第二節(jié)樣品的提取一、提取方法固體樣品常用的提取方法：液體和固體樣品：均可使用的水蒸氣蒸餾法。浸漬法、回流提取法、連續(xù)回流提取法、超聲提取法等；

（一）浸漬法冷浸（10℃~30℃）溫浸（30℃~60℃）熱浸（70℃~80℃）例：《中國(guó)藥典》2015年版一部收載的品種一清顆粒中黃連的鑒別

取本品4g，加甲醇25mL，浸潰2小時(shí)并時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液。浸泡時(shí)間：根據(jù)樣品質(zhì)地及檢驗(yàn)要求確定。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，適于熱不穩(wěn)定的樣品，且提取雜質(zhì)少。缺點(diǎn)：費(fèi)時(shí)、費(fèi)溶劑、提取不充分，較少用于含量測(cè)定。（二）回流提取法

例：《中國(guó)藥典》2015年版一部收載的品種乙肝養(yǎng)陰活血顆粒中齊墩果酸的鑒別。

取本品30g或15g(無(wú)蔗糖），研細(xì)，加三氯甲烷40ml，置水浴上加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。優(yōu)點(diǎn)：提取效率高，提取時(shí)間短缺點(diǎn)：提取雜質(zhì)較多對(duì)熱不穩(wěn)定或有揮發(fā)性組分則不宜采用回流提取法。（三）連續(xù)回流提取法

例：《中國(guó)藥典》2015年版一部收載的品種大山楂丸中熊果酸中熊果酸含量測(cè)定。優(yōu)點(diǎn)：提取效率高，所需溶劑少提取雜質(zhì)少，操作簡(jiǎn)便缺點(diǎn)：受熱易分解的成分不宜使用對(duì)熱不穩(wěn)定或有揮發(fā)性組分則不宜采用回流提取法。（四）水蒸氣蒸餾法例：2015年版《中國(guó)藥典》一部收載的品種正骨水中揮發(fā)油的含量測(cè)定采用了該方法

精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加飽和氯化鈉溶液100ml，振搖1?2分鐘，放置1?2小時(shí)，分取上層液，移入圓底燒瓶中，用熱水洗滌分液漏斗數(shù)次，洗液并入圓底燒瓶中，照揮發(fā)油測(cè)定法（2015年版《中國(guó)藥典》四部通則2204甲法）測(cè)定，讀取揮發(fā)油量，計(jì)算樣品中揮發(fā)油的含量(％)。（五）超聲提取法2015年版《中國(guó)藥典》一部收載的品種二丁顆粒中秦皮乙素和咖啡酸的鑒別。

取本品15g或3g(無(wú)蔗糖），研細(xì)，加甲醇40ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干,殘?jiān)訜崴?0ml使溶解，放冷，用乙酸乙繭振搖提取2次，每次20ml，合并乙酸乙醆提取液，蒸干，殘?jiān)蛹渍乴ml使溶解，作為供試品溶液。（六）超臨界流體萃取法最常使用的超臨界流體：超臨界CO2和趟臨界N2O。通過(guò)加入極性改性劑如甲醇、乙醇、丙酮等增加極性化合物的溶解能力，這使得CO2能萃取從低級(jí)性的親脂性化合物至極性化合物，從而使SFE的應(yīng)用范圍更加廣泛。（七）消化法金屬離子常常被有機(jī)物絡(luò)合，在重金屬、砷鹽或其他有害元素檢查時(shí)，需進(jìn)行有機(jī)破壞方可轉(zhuǎn)為可測(cè)的無(wú)機(jī)金屬離子狀態(tài)。1濕法消化（1）硝酸-高氯酸（2）硝酸-硫酸法（3）硫酸-硫酸鹽法2干法消化有機(jī)物熾灼炭化直至灰化，以達(dá)到分解有機(jī)物的目的（八）微波輔助萃取法①萃取時(shí)間短；②溶劑用量少；③可根據(jù)吸收微波能力的大小選擇不同的萃取溶劑，

控制樣品與溶劑間的熱交換；④可實(shí)現(xiàn)多個(gè)樣品的同時(shí)萃取。特點(diǎn)：二、分析目的與樣品提?。ㄒ唬┕╄b別用樣品的提取中藥鑒別主要是鑒定中藥材和飲片的真?zhèn)位蛘吲袆e中藥制劑中是否含有處方中所列藥味，可采用顯微、化學(xué)反應(yīng)、色譜和光譜等手段進(jìn)行定性分析。顯微鑒別無(wú)需制備供試溶液；其他的理化鑒別則均需要制備供試溶液。鑒別用供試品溶液的制備不強(qiáng)調(diào)量的準(zhǔn)確性。鑒別用供試溶液的制備方法力求簡(jiǎn)便、易操作。（二）供雜質(zhì)檢查用樣品的提取中藥制劑中雜質(zhì)：重金屬、砷鹽等無(wú)機(jī)雜質(zhì)；農(nóng)藥殘留、馬兜鈴酸、烏頭堿、土大黃苷等有機(jī)雜質(zhì)。無(wú)機(jī)雜質(zhì)檢查：消化法處理樣品，以干法或濕法消解。有機(jī)雜質(zhì)檢查：可根據(jù)檢查的要求，來(lái)選擇樣品的提取方法，如果涉及定量，則按含量測(cè)定的方法提取，如農(nóng)藥殘留量的測(cè)定等；如果僅是限量檢查，則按鑒別的方法提取，如附子理中丸中烏頭堿的檢查、三黃片中土大黃苷的檢查等。（三）供含量測(cè)定用樣品的提取含量測(cè)定時(shí)，樣品的提取特別強(qiáng)調(diào)待測(cè)成分要提取完全，另外，含量測(cè)定的樣品提取過(guò)程中還應(yīng)注意準(zhǔn)確度。樣品的稱量需要精密稱定，如果是用部分測(cè)定法，可以利用移液管精密加入一定量提取溶劑，通過(guò)提取前后的稱重補(bǔ)重來(lái)確定最終提取溶液的體積，如果用全部測(cè)定法，則提取完后，洗滌濾紙和濾渣，洗液并入濾液，最終定容到相應(yīng)的體積，容量瓶的容積即為最終提取液的體積。樣品是否需要分離純化，純化到什么程度，與測(cè)定方法的專屬性、分離能力、檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)雜質(zhì)的耐受程度密切相關(guān)。

常用的凈化方法：液一液萃取法，色譜法，沉淀法，鹽析法等。凈化方法的選擇：既要依據(jù)被測(cè)定成分和雜質(zhì)的理化性質(zhì)、存在形式、濃度范圍的差異，又要結(jié)合分析的目的。第三節(jié)樣品的凈化沉淀法是基于某些試劑與被測(cè)成分或雜質(zhì)能夠生成沉淀，或者某些溶劑的加入會(huì)大大降低被測(cè)成分或雜質(zhì)在原溶液中的溶解度，分離沉淀或保留溶液以達(dá)到精制的目的。

注意：一、沉淀法①過(guò)量的試劑若干擾被測(cè)組分的測(cè)定，則應(yīng)設(shè)法除去。

②大量雜質(zhì)以沉淀形式除去時(shí)，被測(cè)成分不因沉淀而損失。③被測(cè)組分生成沉淀時(shí)，其沉淀經(jīng)分離后可重新溶解或直接用重量法測(cè)定。如西瓜霜潤(rùn)喉片中西瓜霜的含量測(cè)定。常用的液-液萃取方法分為有機(jī)溶劑直接萃取法和離子對(duì)萃取法。二、液-液萃取法

1.直接萃取法主要用于液體樣品中被測(cè)組分的提取，多用有機(jī)溶劑將被測(cè)組分從水溶液中提取出來(lái)。萃取溶劑的選擇原則：相似相溶極性較強(qiáng)的組分：如皂苷類成分用正丁醇萃??；中等級(jí)性的組分：如黃酮類成分可用醋酸乙酯萃??；易形成氫鍵的組分：如生物堿成分可用氯仿萃??；非極性組分：如揮發(fā)油可用乙醚、石油醚等萃取。弱酸性、弱堿性組分：調(diào)整溶液的pH值后用有機(jī)溶劑萃取。2.離子對(duì)萃取法強(qiáng)酸、強(qiáng)堿性組分：用離子對(duì)萃取。萃取工具：分液漏斗萃取次數(shù)：如用于含量測(cè)定，需要萃取

多次，次數(shù)提取回收率決定。注意：萃取過(guò)程中應(yīng)注意防止

消除乳化現(xiàn)象。酒劑、酊劑等含醇量比較高的液體制劑，

在萃取前需要先揮去乙醇。經(jīng)典柱色譜法常用填料有：氧化鋁、硅膠、大孔樹(shù)脂、聚酰胺、硅藻土、活性炭、離子交換樹(shù)脂以及鍵合相硅膠C8、C18等，目前市場(chǎng)上也有商品化的色譜小柱。三、色譜法四、固相萃取法固相萃取小柱：柱管、篩板和固定相三部分組成操作①柱的活化；

②上樣；

③淋洗，④洗脫。操作分兩步：首先是萃取，將針頭插入試樣容器中，推出石英纖維，利用其表面的色譜固定相對(duì)分析組分的吸附作用，將組分從試樣基質(zhì)中提取出來(lái)，并逐漸富集，完成試樣前處理過(guò)程；然后是色譜進(jìn)樣，將針頭插入色譜進(jìn)樣器，推出針頭中的石英纖維，利用氣相色譜進(jìn)樣器的高溫或者液相色譜、毛細(xì)管電泳的流動(dòng)相將吸附的組分從固定相中解吸下來(lái)，完成色譜進(jìn)樣操作，再由色譜儀進(jìn)行分離分析。提取方式：①石英纖維直接插入試樣中進(jìn)行提取，適用于氣體與液體中組分的分析；②頂空提取，適用于所有基質(zhì)的試樣中揮發(fā)性、半揮發(fā)性組分的分析。主要用于分析揮發(fā)性、半揮發(fā)性物質(zhì)。五、固相微萃取技術(shù)一、樣品提取液的濃縮常見(jiàn)的濃縮方式：第四節(jié)

濃縮與衍生化1．水浴蒸發(fā)2．自然揮散3．減壓蒸發(fā)4．氣流吹蒸法5．冷凍干燥

一、樣品的衍生化主要目的：第四節(jié)

濃縮與衍生化①提高檢測(cè)的靈敏度；②改善色譜分離效果。①對(duì)反應(yīng)要求不苛刻，且能迅速定量地進(jìn)行；②對(duì)某個(gè)樣品只能生成一種衍生物；③反應(yīng)副產(chǎn)物以及過(guò)量的衍生化試劑不干擾待測(cè)組分的分離和檢測(cè)；④化學(xué)衍生化試劑方便易得、通用性好。衍生化反應(yīng)要求：根據(jù)衍生化反應(yīng)與色譜分離的時(shí)間先后：柱前衍生法柱后衍生法①脂肪酸的甲酯化；②脂肪酸甲酯化衍生物的進(jìn)樣和分離；③脂肪酸甲酯化衍生物的定性和定量。脂肪酸分析方法包括以下步驟：脂肪酸甲酯化常用方法：①脂肪酸皂化酯化反應(yīng)；②脂肪酸酯交換反應(yīng)；③3脂肪酸的其它衍生物。如：硅烷化中藥制劑（如糖漿劑、煎膏劑、口服液等）中含有防腐劑、抗氧劑、矯味劑等，這些添加劑有時(shí)對(duì)被測(cè)成分的分析干擾較大。一、固體中藥制劑的前處理特點(diǎn)蜜丸的處理方法：第五節(jié)

各類中藥制劑的前處理特點(diǎn)①直接加有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，或水溶解蜜

丸，離心后取藥渣進(jìn)行提取。②加入一定量硅藻土研磨直至均勻分散，

再用溶劑提取。滴丸、栓劑常用基質(zhì)：水溶性；非水溶性①將栓劑或滴丸與硅藻土等惰性材料混合、研勻，根據(jù)被分析成分的性質(zhì)和基質(zhì)的類型，用適宜的溶劑提取。根據(jù)分析的成分為脂溶性，而基質(zhì)為親水性基質(zhì)，一般用有機(jī)溶劑提?。蝗舯环治龅某煞謽O性大，而基質(zhì)為油脂性基質(zhì)，一般用水或稀醇提取。②對(duì)于油脂性基質(zhì)還可將栓劑切成小塊，加適量水，于溫水浴上加熱使其融化，