(高清版)GBT 40899-2021 化妝品中禁用物質(zhì)溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的測定 高效液相色譜法

化妝品中禁用物質(zhì)溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的測定高效液相色譜法2021-11-26發(fā)布2022-06-01實施國家標準化管理委員會I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由中國輕工業(yè)聯(lián)合會提出。本文件由全國香料香精化妝品標準化技術(shù)委員會(SAC/TC257)歸口。本文件起草單位：中國檢驗檢疫科學(xué)研究院、上海香料研究所。Ⅱ本文件的被測物質(zhì)是我國《化妝品安全技術(shù)規(guī)范(2015年版)》規(guī)定的禁用原料。禁用原料是指不得作為化妝品原料使用的物質(zhì)。《化妝品安全技術(shù)規(guī)范(2015年版)》規(guī)定：若技術(shù)上無法避免禁用物質(zhì)作為雜質(zhì)帶入化妝品時，國家有限量規(guī)定的應(yīng)符合其規(guī)定；未規(guī)定限量的，應(yīng)進行安全性風(fēng)險評估，確保在正常、合理及可預(yù)見的使用條件下不得對人體健康產(chǎn)生危害。目前我國尚未規(guī)定這些物質(zhì)的限量值。本文件的制定，僅對化妝品中測定這些物質(zhì)提供檢測方法。1化妝品中禁用物質(zhì)溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的測定高效液相色譜法警示——使用本文件的人員應(yīng)有正規(guī)實驗室工作的實踐經(jīng)驗。本文件并未指出所有可能的安全問題。使用者有責(zé)任采用適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧?，并保證符合國家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件。本文件描述了化妝品中禁用物質(zhì)溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的高效液相色譜測定方法的原理、試本文件適用于水劑類、乳液類和膏霜類化妝品中溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的測定。本文件的方法檢出限和定量限： 溴米索伐與卡溴脲：方法檢出限均為1mg/kg,定量限均為5mg/kg:——卡立普多：方法檢出限為10mg/kg,定量限為20mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理樣品經(jīng)溶劑超聲提取后，提取液經(jīng)離心、氮吹、重新定容并過濾，以配備二極管陣列檢測器(用于檢測溴米索伐、卡溴脲)和蒸發(fā)光散射檢測器(用于檢測卡立普多)的高效液相色譜儀進行測定，根據(jù)保留時間初步定性，外標法定量。5試劑和材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑。5.540%乙腈溶液：量取40mL乙腈(5.3)加入100mL容量瓶中，加水稀釋并定容至刻度。5.6溴米索伐、卡溴脲和卡立普多標準物質(zhì)：純度不小于98%。三種標準物質(zhì)的英文名稱、CAS號、分2子式、相對分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)式見附錄A中表A.1。5.7溴米索伐標準儲備溶液：準確稱取溴米索伐標準物質(zhì)(5.6)100mg,精確到0.1mg,轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用40%乙腈溶液(5.5)溶解并定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度為1000mg/L的標準儲備溶液，于4℃避光保存，有效期2個月。5.8卡溴脲標準儲備溶液：準確稱取卡溴脲標準物質(zhì)(5.6)100mg,精確到0.1mg,轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用40%乙腈溶液(5.5)溶解并定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度為1000mg/L的標準儲備溶液，于4℃避光保存，有效期2個月。5.9卡立普多標準儲備溶液：準確稱取卡立普多標準物質(zhì)(5.6)100mg,精確到0.1mg,轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用40%乙腈溶液(5.5)溶解并定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度為1000mg/L的標準儲備溶液，于4℃避光保存，有效期2個月。6.1高效液相色譜(HPLC)儀：配有二極管陣列檢測器和蒸發(fā)光散射檢測器。6.2液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)儀：配有電噴霧離子源(ESI)。6.3分析天平：感量0.0001g和0.001g。6.5離心機：轉(zhuǎn)速不低于5000r/min。6.6氮吹儀。稱取1.0g樣品，精確全0.001g,置于10mL具塞比色管(6.7)中，加入甲醇(5.2)定容至10mL,超聲提取20min,冷卻至室溫。取定容液1mL氮吹至干，用流動相重新定容至1mL,經(jīng)微孔濾膜(5.11)過濾后待測。稱取1.0g樣品，精確至0.001g,置于10mL具塞比色管(6.7)中，加入甲醇(5.2)定容至10mL,混勻，加入2g氯化鈉(5.4)破乳，超聲提取20min,冷卻至室溫。移取所得懸浮液5mL于15mL具塞塑料離心管(5.10)中，5000r/min離心5min。取上清液1mL氮吹至干，用流動相重新定容至1mL,經(jīng)微孔濾膜(5.11)過濾后待測。平行做兩份試驗。3GB/T40899—20217.2測定條件高效液相色譜測定的參考條件如下：b)流動相：乙腈+水=40+60(體積比),等度洗脫；f)二極管陣列檢測器檢測條件：檢測波長210nm;g)蒸發(fā)光散射檢測器檢測條件：霧化器冷卻模式；漂移管溫度50℃;載氣為氮氣，壓力為276kPa(40psi);放大系數(shù)為500。7.3標準曲線的繪制7.3.1溴米索伐和卡溴脲標準曲線的繪制使用吸量管分別移取0.5mL、1mL、5mL、10mL、25mL溴米索伐標準儲備溶液(5.7)和卡溴脲標準儲備溶液(5.8)于50mL容量瓶中，使用流動相定容至刻度，得到質(zhì)量濃度為10mg/L、20mg/L、100mg/L、200mg/L和500mg/L的標準工作溶液，按7.2給出的測定條件以濃度由低到高順序進樣，使用二極管陣列檢測器進行檢測，以質(zhì)量濃度為自變量，以峰面積為因變量進行線性回歸，得到標準曲線。7.3.2卡立普多標準曲線的繪制使用吸量管分別移取2.5mL、5mL、10mL、15mL、25mL卡立普多標準儲備溶液(5.9)于50mL容量瓶中，使用流動相定容至刻度，得到質(zhì)量濃度為50mg/L、100mg/L、200mg/L、300mg/L和500mg/L的標準工作溶液，按7.2給出的測定條件以濃度由低到高順序進樣，使用蒸發(fā)光散射檢測器進行檢測，以質(zhì)量濃度的常用對數(shù)值為自變量，以色譜峰面積的常用對數(shù)值為因變量進行線性回歸，得到標準曲線。三種待測物標準溶液的高效液相色譜圖見附錄B中圖B.1。7.4測定按7.2測定條件對樣品溶液進行測定，根據(jù)保留時間初步定性，外標法定量。待測物含量應(yīng)在標準曲線的線性范圍之內(nèi)，超出線性范圍則應(yīng)稀釋后再進行分析。注：若檢出陽性樣品，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜進行確證試驗(見附錄C)。7.5空白試驗除不稱取樣品外，按7.1～7.4步驟與測試平行進行測定。8結(jié)果計算樣品中待測物的含量按式(1)計算：式中：o;——樣品中待測物的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);…………4p;——從標準曲線得到的樣品溶液中待測物的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L)p?——從標準曲線得到的空白溶液中待測物的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L)V——樣品溶液最終定容體積，單位為毫升(mL);m——樣品質(zhì)量，單位為克(g)。計算結(jié)果表示到小數(shù)點后兩位。9回收率在添加濃度5mg/kg～50mg/kg范圍內(nèi)，溴米索伐的回收率為87.2%～105.3%,卡溴脲的回收率為90.1%～103.9%;在添加濃度20mg/kg～200mg/kg范圍內(nèi)，卡立普多的回收率為90.1%~10精密度在重復(fù)性條件下獲得兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的10%。5(資料性)溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)式見表A.1。序號中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子質(zhì)量結(jié)構(gòu)式1溴米索伐BromisovalC?H?BrN?O?HNH?2卡溴脲C?H??BrN?O?3卡立普多6almALslIimVGB/T40899—2021almALslIimV溴米索伐、卡溴脲和卡立普多標準溶液的高效液相色譜圖溴米索伐、卡溴脲和卡立普多標準溶液的高效液相色譜圖見圖B.1。時問/mina)溴米索伐和卡溴脲的高效液相色譜圖b)卡立普多的高效液相色譜圖注：三種待測物質(zhì)量濃度均為100mg/L;溴米索伐的保留時間為5.34min,卡溴脲為8.36min,卡立普多為10.96min。圖B.1溴米索伐、卡溴脲和卡立普多標準溶液的高效液相色譜圖(資料性)確證試驗C.1液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：b)流動相：乙腈(5.3)-0.1%甲酸水溶液(50+50,體積比),等度洗脫；C.2質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件如下：g)數(shù)據(jù)采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)。C.3定性測定按液相色譜-質(zhì)譜條件測定樣液和標準工作溶液。樣品溶液中待測物的響應(yīng)值需在標準曲線的線性范圍內(nèi)，如超過線性范圍則稀釋后再進樣測定。如果所選擇的離子均出現(xiàn)，而且所選擇的離子比與標準物質(zhì)的相對豐度一致，允許相對偏差不超過表C.1規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中含有溴米索伐、卡溴脲或卡立普多。三種待測物的選擇