液相色譜中緩沖鹽的正確使用方法

第第頁液相色譜中緩沖鹽的正確使用方法液相方法很多用到緩沖鹽，那么緩沖鹽應(yīng)當(dāng)如何正確使用，使用之后應(yīng)當(dāng)如何沖洗，假如因使用緩沖鹽顯現(xiàn)問題時(shí)，應(yīng)當(dāng)如何解決？這些問題你知道答案嗎？跟小析姐一起來學(xué)習(xí)吧。一、流動(dòng)相中緩沖鹽正確使用1、使用前的處理：在使用緩沖鹽作流動(dòng)相之前需要用不含緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱，直至基線平穩(wěn)。原則上，用于沖洗的流動(dòng)相與分析時(shí)所用的流動(dòng)相含水的比例相同（或含水更多），不同的只是用于沖洗用的流動(dòng)相中不含緩沖鹽。理由：緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑。用含緩沖鹽的（特別是做流動(dòng)相的水為飽和的緩沖鹽溶液時(shí)）流動(dòng)相進(jìn)行分析時(shí)，假如分析前色譜柱中用于保管色譜柱的流動(dòng)相中含水的比例相對較小，不先沖洗掉，接下來做樣品的時(shí)候所用的流動(dòng)相中假如有機(jī)溶劑含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解該緩沖鹽時(shí)，緩沖鹽將會(huì)在色譜柱柱體上析出，沉積下來，這將可能導(dǎo)致上述對色譜柱的損害。2、使用后的處理：用與分析時(shí)含水比例相同的流動(dòng)相（與分析用流動(dòng)相唯一的區(qū)別是，用于沖洗的流動(dòng)相不含緩沖鹽）進(jìn)行沖洗約30min，直至基線平穩(wěn)。假如該色譜柱在接下來很長的一段時(shí)間內(nèi)不使用，要長期保管，則需再加上一步，即用純的有機(jī)溶劑沖洗一遍，直至基線平穩(wěn)。二、緩沖液使用注意1、避開使用鹽酸鹽，鹽酸鹽對鋼質(zhì)有腐蝕作用。2、緩沖液最好要現(xiàn)配現(xiàn)用，往往緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液，隔天或放置長時(shí)間試驗(yàn)時(shí)會(huì)有很多怪現(xiàn)象發(fā)生。3、試驗(yàn)后不行用有機(jī)溶劑直接過度，有機(jī)溶劑會(huì)處使鹽類析出，造成液路或色譜柱堵塞，可用95：5的水甲醇沖洗。4、使用緩沖液要及時(shí)掌握ph范圍，做到胸中有數(shù)。5、清洗液路和柱子時(shí)，有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗。6、長時(shí)間用緩沖溶液要注意察看接頭處有無析出，若有白色鹽類析出，可考慮肯定周期用10%硝酸沖洗一下液路（拆下柱子，走30ml,再用5倍水沖洗）可以避開液路的堵塞。7、選擇緩沖液要用可靠的試劑，避開不純的鹽類造成不必需的麻煩。假如流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例特別高是不能用來沖洗緩沖鹽的，是洗不出來的。通常C18柱先用5%～10%的甲醇沖洗，是可以把緩沖鹽沖洗出來的，然后用純的有機(jī)溶劑來保護(hù)柱子。最好的方法是使用與流動(dòng)相相同濃度不含鹽的流動(dòng)相進(jìn)行清洗。但就是速度慢一些。用水是為了快速替換，一般在15分鐘以內(nèi)最好，且用0.8的流速較好.假如用純水沖，容易造成鍵合的碳鏈的流失，最好用5%～10%甲醇水溶液沖?？梢杂眉兯鎿Q流動(dòng)相中的緩沖液，有機(jī)相不變。這樣沖洗柱子比較穩(wěn)妥。三、色譜柱異常柱壓與硅膠基質(zhì)的形態(tài)（如無定形或球形硅膠）、顆粒大小、填料合成條件、裝柱條件、所用流動(dòng)相和分析時(shí)的溫度有關(guān)。不同廠家的色譜柱柱壓會(huì)有所差別，相同流動(dòng)相和溫度的條件下，不同廠家的新色譜柱有的柱壓可能相差4、5個(gè)MPa，特別是低端和高端色譜柱之間，這一區(qū)別比較明顯。這是由色譜柱廠家所選用的硅膠基質(zhì)及其生產(chǎn)條件決議的，這種差別的存在是正常的。同時(shí)需要說明的一點(diǎn)是，柱壓與柱效有肯定的關(guān)系，通常柱效高的色譜柱柱壓相對而言會(huì)高一點(diǎn)，但柱壓高的色譜柱并不肯定就具有高柱效。在色譜柱的使用過程中柱壓通常會(huì)顯現(xiàn)兩種升高的形式：第一種是，隨著使用時(shí)間的延長色譜柱柱壓漸漸上升，這是正常的；第二種是，使用過程中（流動(dòng)相和溫度沒有轉(zhuǎn)變的條件下）色譜柱壓力驀地升高很多。這種壓力驀地升高的現(xiàn)象，通常是由工作人員操作欠妥引起的。原因：①樣品太臟，使用前沒有過濾，導(dǎo)致柱篩板堵塞；②樣品含有的雜質(zhì)在流動(dòng)相中的溶解性不是特別好，與流動(dòng)相混合后析出，導(dǎo)致柱塞板堵塞；③使用緩沖鹽，處理錯(cuò)誤，緩沖鹽在色譜柱中析出，堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙。四、色譜柱異常解決方法對于第二種，即柱壓驀地升高的情況，通常有以下幾種解決方法：①將色譜柱反接，用含水比例較大的流動(dòng)相進(jìn)行沖洗。②色譜柱進(jìn)樣一端的篩板取下，分別放在水中和甲醇中超聲或更換新的柱篩板。假如柱效沒變，但柱壓仍然較高，則應(yīng)考慮進(jìn)樣端填料受污染的問題，因此除了取下進(jìn)樣端篩板超聲外，還需要挖掉進(jìn)樣端的部分填料，挖去填料之前先檢查一下填料的顏色，假如填料的顏色發(fā)生了變動(dòng)，則應(yīng)當(dāng)挖掉直到見到