細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞污染問題

細(xì)胞培養(yǎng)污染CELLCULTURECONTAMINATION簡介introduction凡混入細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中對細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)視為污染細(xì)胞污染不能完全被消除，但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴(yán)重性細(xì)胞污染的分類物理污染化學(xué)污染生物污染（支原體污染）提綱outline控制污染掌握良好的無菌操作技術(shù)建立細(xì)胞庫合理應(yīng)用抗生素保持工作區(qū)清潔建立良好的規(guī)章制度檢測細(xì)胞污染溫度孵箱放在溫度較恒定的房間中培養(yǎng)液從冰箱取出后在室溫放置放射線試劑周圍不能放同位素振動孵箱周圍不能放引起振動的設(shè)備輻射試劑不要放在帶有玻璃門的冰箱中物理污染Physicalcontamination化學(xué)污染血清培養(yǎng)液及試劑水培養(yǎng)用器皿孵箱化學(xué)污染chemicalcontamination化學(xué)污染chemicalcontamination培養(yǎng)液及試劑選用純度最高的試劑經(jīng)過權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)定正確的儲存方法血清新購買的血清用之前要試應(yīng)選用同一批次的血清水用來配液和清洗容器傳統(tǒng)用雙蒸和三蒸水現(xiàn)在用純水儀millipore超純水放置過久純度下降化學(xué)污染chemicalcontamination容器生產(chǎn)過程中有毒物質(zhì)殘留消毒劑和清洗劑的殘留鋁箔和包裹紙殘留化學(xué)污染chemicalcontamination孵箱co2混有有毒氣體消毒劑和清洗劑的殘留生物污染biologicalcontamination生物污染容易發(fā)現(xiàn)的生物污染包括細(xì)菌、霉菌和酵母不容易被發(fā)現(xiàn)的生物污染包括病毒、原蟲、昆蟲、支原體和其它細(xì)胞系生物污染biologicalcontamination對實(shí)驗(yàn)人員是一個潛在的危險因素細(xì)胞系交叉污染污染在這是個錯誤的用詞難于發(fā)現(xiàn)若出現(xiàn)傳代細(xì)胞的生長速度異常，考慮交叉污染同一時間只傳同一種細(xì)胞每種細(xì)胞要有單獨(dú)的液體建立細(xì)胞庫每三個月更換一次細(xì)胞細(xì)菌、霉菌和酵母無抗生素污染易被發(fā)現(xiàn)抗生素存在易造成隱性污染隱性污染引起嚴(yán)重后果病毒最難發(fā)現(xiàn)和清除嚴(yán)格的宿主性自限性支原體（雜草）生物污染biologicalcontamination污染嚴(yán)重難發(fā)現(xiàn)難去除顯微鏡看不到不引起培養(yǎng)液渾濁和PH改變營養(yǎng)要求高不容易用傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)法檢測到不能通過過濾清除大多數(shù)抗生素對其無效支原體檢測方法生物污染biologicalcontamination方法敏感性優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)直接DNA染色(如Hoechst33258)低快速，便宜需要熒光顯微鏡結(jié)果不易解釋指示細(xì)胞上間接DNA染色(如

Vero)中放大污染結(jié)果易解釋費(fèi)時免疫熒光單克隆抗體易操作靈敏需要熒光顯微鏡肉湯和瓊脂培養(yǎng)高靈敏慢需要專業(yè)解釋ELISA中快速檢查種類有限PCR中-高特異性強(qiáng)快速需要PCR設(shè)備分子量對照2陰性對照3-8原有細(xì)胞的懸液9陽性對照分子量對照2陰性對照3-8新細(xì)胞的懸液9陽性對照VenorGeM試劑盒生物污染biologicalcontamination支原體樹立“預(yù)防為主”的思想保證細(xì)胞來源干凈確?；|(zhì)和器材無菌嚴(yán)格無菌操作細(xì)胞培養(yǎng)時避免交談操作結(jié)束時消毒臺面每船15代的細(xì)胞應(yīng)更換所有細(xì)胞培養(yǎng)材料丟棄前應(yīng)高壓消毒控制污染controlcontamination良好的無菌操作合理利用抗生素建立細(xì)胞庫保持工作區(qū)清潔良好的規(guī)章制度細(xì)胞污染的檢測良好的無菌操作所有玻璃器皿和培養(yǎng)液與試劑的配制應(yīng)嚴(yán)格無菌避免溢出、濺出和氣溶膠；吸入或吸出液體時避免傾倒；吸入或吸出液體時，不要觸碰細(xì)胞培養(yǎng)瓶的瓶口；液體應(yīng)分裝并置4-8oC保存；每種細(xì)胞應(yīng)使用單獨(dú)的液體；清潔區(qū)和污染區(qū)的材料應(yīng)單獨(dú)處理；控制污染controlcontamination合理利用抗生素過度依賴抗生素會使人們忽略無菌操作濫用抗生素常導(dǎo)致耐藥菌的產(chǎn)生牢記抗生素不能代替無菌操作控制污染controlcontamination建立細(xì)胞庫減少從主管單位獲得細(xì)胞的運(yùn)輸費(fèi)凍存的細(xì)胞生物性狀不發(fā)生改變消除了隱蔽污染的潛在危害控制污染controlcontamination良好的規(guī)章制度只有相關(guān)人員才可進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)必須和其他區(qū)域分開每個細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)應(yīng)布局合理，保證所需物品就近放置，在處理細(xì)胞時避免不必要的走動細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)應(yīng)避免使用水池，從而避免微生物污染控制污染controlcontamination控制污染controlcontamination保持工作區(qū)清潔常規(guī)清洗地面和臺面CO2孵箱每2-3個月消毒清洗孵箱所有濺出或溢出的液滴應(yīng)立即擦拭并消毒每周孵箱內(nèi)水盤需徹底消毒清洗定期清潔水浴箱生物安全柜每次使用后應(yīng)清潔和消毒安全柜的內(nèi)表面定期消毒安全柜工作面下層的盤子；及時清理廢