飼料添加劑 第5部分：微生物 植物乳桿菌-編輯說明

1.任務(wù)來源

2011年全國飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)下達(dá)了制訂國家標(biāo)準(zhǔn)《飼料添加劑

植物乳桿菌》的任務(wù)（項(xiàng)目編號(hào)：20110867-Q-469），由國家糧食局科學(xué)研究院

提出，全國飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口，國家糧食局科學(xué)研究院、中國農(nóng)業(yè)

科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所作為承擔(dān)單位主持該標(biāo)準(zhǔn)的制訂工作。

本標(biāo)準(zhǔn)是按照GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)與編

寫規(guī)則》的要求進(jìn)行編寫的。

2.標(biāo)準(zhǔn)的主要單位和起草人

本標(biāo)準(zhǔn)的起草單位為國家糧食局科學(xué)研究院、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)

研究所。本標(biāo)準(zhǔn)的主要起草人為張曉琳、韓偉、李愛科、魏永剛、李曉敏、趙晨、

黃穎、郝淑紅。

3.標(biāo)準(zhǔn)制訂的必要性和意義

隨著人們生活質(zhì)量的提高以及全球經(jīng)濟(jì)一體化，動(dòng)物性食品安全已成為一個(gè)

世界性的挑戰(zhàn)和全球重要的公共衛(wèi)生問題。其中，抗生素殘留問題是影響動(dòng)物性

食品安全的重要因素之一?；趯?duì)抗生素危害性的認(rèn)識(shí)，“安全、綠色、環(huán)?！?/p>

的新型飼用抗生素替代產(chǎn)品已成為飼料行業(yè)的重點(diǎn)發(fā)展方向。微生物飼料添加劑

由于不僅具有與抗生素飼料添加劑相似的有益作用，而且還具有無毒、無副作用、

無殘留、無抗藥性，同時(shí)也不污染環(huán)境等優(yōu)點(diǎn)，已逐步發(fā)展成為最具有應(yīng)用前景

的抗生素替代產(chǎn)品。

植物乳桿菌，作為較早被人們利用和進(jìn)入工業(yè)化的乳酸菌菌種之一；其自身

的優(yōu)良性能在飼料添加劑中得以體現(xiàn)：大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，植物乳桿菌具有良

好的生物安全性，同時(shí)具有促進(jìn)動(dòng)物生長、調(diào)整腸道菌群結(jié)構(gòu)、抑制有害病原菌

生長、減少疾病發(fā)生、降低仔豬腹瀉率等優(yōu)良特性。因此，植物乳桿菌飼料添加

劑的使用能夠部分或全部替代飼用抗生素，以利得到更加安全與優(yōu)質(zhì)的動(dòng)物產(chǎn)品。

但植物乳桿菌類產(chǎn)品也存在一些問題，如菌株的純化與傳代、安全性評(píng)價(jià)、存儲(chǔ)

過程中抗逆性差、貨架期短、檢測方法不統(tǒng)一，導(dǎo)致產(chǎn)品穩(wěn)定性和益生特性差異

1

大。

目前，在中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告2045號(hào)《飼料添加劑品種目錄（2013）》

中，允許添加的微生物共有34種，包括：地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、兩歧

雙歧桿菌、糞腸球菌、屎腸球菌、乳酸腸球菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、德式

乳桿菌乳酸亞種（原名：乳酸乳桿菌）、植物乳桿菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、

產(chǎn)朊假絲酵母、釀酒酵母、沼澤紅假單胞菌、嬰兒雙歧桿菌、長雙歧桿菌、短雙

歧桿菌、青春雙歧桿菌、嗜熱鏈球菌、羅伊氏乳桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌、黑曲霉、

米曲霉、遲緩芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、纖維二糖乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、德氏乳

桿菌保加利亞亞種（原名：保加利亞乳桿菌）、產(chǎn)丙酸丙酸桿菌、布氏乳桿菌、

副干酪乳桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、側(cè)孢短芽孢桿菌（原名：側(cè)孢芽孢桿菌）。2012

年，歐盟委員會(huì)發(fā)布(EU)No.93/2012號(hào)法規(guī)，批準(zhǔn)植物乳桿菌（DSM8862與

DSM8866）作為所有動(dòng)物飼料添加劑。然而，涉及2045號(hào)公告中提及的微生物

相關(guān)產(chǎn)品，尤其是單一微生物產(chǎn)品（包括植物乳桿菌），大多數(shù)尚未制訂國家標(biāo)

準(zhǔn)。

近幾年，我國微生物飼料添加劑發(fā)展非常迅速，目前已形成年總產(chǎn)值超過

30-50億元的新興產(chǎn)業(yè)，其中植物乳桿菌等乳酸菌產(chǎn)品最受關(guān)注，需求和產(chǎn)值也

逐年提高。但由于我國的微生物飼料添加劑市場起步較晚，還沒有對(duì)其形成一個(gè)

完善的管理機(jī)制，尤其是尚沒有針對(duì)每類具體產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)前國內(nèi)市場比

較混亂，例如，從我們在標(biāo)準(zhǔn)研制的3年中采樣結(jié)果來看，作為主要品質(zhì)檢測指

標(biāo)的有效活菌數(shù)，超過50%的樣品與產(chǎn)品標(biāo)識(shí)不符。因此，相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)的制訂

和實(shí)施，將促進(jìn)微生物飼料添加劑產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展，加強(qiáng)微生物類產(chǎn)品有

效管理，提高動(dòng)物食品安全水平具有重要意義。

4.確定國家標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容的論據(jù)和編制過程

根據(jù)全國飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)的文件要求及制標(biāo)任務(wù)通知，國家糧食

局科學(xué)研究院（第一承擔(dān)單位）隨即下達(dá)了關(guān)于啟動(dòng)制訂國家標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目的任務(wù)，

組織科研攻關(guān)團(tuán)隊(duì)，并立項(xiàng)實(shí)施。

本標(biāo)準(zhǔn)立足于本行業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀，同時(shí)關(guān)注行業(yè)發(fā)展趨勢。首先在對(duì)我國歷年

微生物類國標(biāo)、行標(biāo)、地方標(biāo)準(zhǔn)及企標(biāo)匯總分析的基礎(chǔ)上，又參考了ISO、歐盟、

2

臺(tái)灣等的有關(guān)產(chǎn)品和檢測標(biāo)準(zhǔn)，以使制訂的標(biāo)準(zhǔn)能與最先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)接軌。另外，本

項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)制訂單位分別對(duì)內(nèi)蒙古、山東、上海、河南、河北等代表性廠家生產(chǎn)的植

物乳桿菌代表性產(chǎn)品進(jìn)行采樣，并對(duì)主要指標(biāo)進(jìn)行檢測及分析，同時(shí)我們也統(tǒng)計(jì)

了相關(guān)質(zhì)量分析數(shù)據(jù)，從有關(guān)文獻(xiàn)及部分飼料廠匯集了一批近年的植物乳桿菌產(chǎn)

品衛(wèi)生指標(biāo)及動(dòng)物應(yīng)用效果分析結(jié)果，以使我們制訂的標(biāo)準(zhǔn)具有實(shí)用性。在此基

礎(chǔ)上形成了《飼料添加劑植物乳桿菌》國家標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿。

在編制過程中，我們遵循以下原則：

（1）一致性原則

本標(biāo)準(zhǔn)在編制過程中采用或參考與《微生物飼料添加劑技術(shù)通則》（NY/T

1444-2007）、《Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs—Protocolforthe

validationofalternativemethods》（ISO16140）、《食品微生物指標(biāo)制定和應(yīng)用的原

則》（GB/T23784-2009）、《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)乳酸菌檢驗(yàn)》（GB4789.35-2010）

等標(biāo)準(zhǔn)中就有關(guān)術(shù)語和定義、技術(shù)要求、試驗(yàn)方法和檢驗(yàn)原則等相一致的原則和

方法，并參考了大量國標(biāo)、國外標(biāo)準(zhǔn)、行標(biāo)及企標(biāo)中的規(guī)定；以保證本標(biāo)準(zhǔn)既吸

收國內(nèi)外先進(jìn)經(jīng)驗(yàn)，又便于采標(biāo)單位將標(biāo)準(zhǔn)中的要求納入已建立的質(zhì)量管理體系

中來。同時(shí)，在充分研究和分析基礎(chǔ)上，綜合考慮我國企業(yè)、市場、消費(fèi)者及監(jiān)

管機(jī)構(gòu)的實(shí)際情況，科學(xué)、合理地編制本標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容。

（2）科學(xué)實(shí)用原則

科學(xué)性體現(xiàn)在，系統(tǒng)地分析代表性產(chǎn)品的有效技術(shù)指標(biāo)，結(jié)合生產(chǎn)應(yīng)用實(shí)際，

凝練問題及產(chǎn)生原因、表現(xiàn)形式、預(yù)防措施等，明確產(chǎn)品在試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、

判定規(guī)則、包裝、運(yùn)輸、儲(chǔ)存、保質(zhì)期等方面的要求，為該類產(chǎn)品設(shè)置具有適當(dāng)

“門檻”或“標(biāo)桿”。實(shí)用性體現(xiàn)在，研制標(biāo)準(zhǔn)過程考慮到產(chǎn)品生產(chǎn)、儲(chǔ)運(yùn)、流

通、銷售和應(yīng)用各個(gè)環(huán)節(jié)的實(shí)際狀況，不同行業(yè)同類技術(shù)成熟程度，消費(fèi)者心理

預(yù)期，標(biāo)準(zhǔn)涉及的檢測成本等，最終體現(xiàn)在本標(biāo)準(zhǔn)的征求意見稿當(dāng)中。

標(biāo)準(zhǔn)研制過程所處階段和進(jìn)度如下：

申報(bào)階段立項(xiàng)階段起草階段

批準(zhǔn)階段審查階段征求意見階段

出版階段復(fù)審階段廢止階段

3

表1標(biāo)準(zhǔn)研制工作-進(jìn)度表

時(shí)間區(qū)段工作內(nèi)容

2011.7.20成立工作小組：張曉琳、李愛科、韓偉、趙晨等，進(jìn)行具

體分工。

2011.8.1-2012.1.30收集、查閱國內(nèi)外相關(guān)資料、標(biāo)準(zhǔn)信息。

2012.2.1-2012.8.30走訪企業(yè)、消費(fèi)者、相關(guān)專家學(xué)者，初步確定重點(diǎn)指標(biāo)和

研究思路，并重點(diǎn)確定標(biāo)準(zhǔn)采用的新方法及涉及新儀器，

組織實(shí)驗(yàn)。

2012.8.22第一次專家論證會(huì)

2011.8.1-2013.3.30.采樣階段，采國內(nèi)外的乳酸菌產(chǎn)品，并抽取國內(nèi)有代表性

的生產(chǎn)企業(yè)的樣品。

2012.2.1-2014.5.30試驗(yàn)論證和驗(yàn)證階段。

2013.5.4-2013.8.30結(jié)合試驗(yàn)驗(yàn)證、數(shù)據(jù)分析和專家意見，逐步確定標(biāo)準(zhǔn)重點(diǎn)

考量指標(biāo)。

2012.11.5-2014..4.30廣泛征求科研、生產(chǎn)、經(jīng)營、質(zhì)檢及消費(fèi)者的意見。

2014.6.15-2014.7.15修改標(biāo)準(zhǔn)文本草稿，形成征求意見稿。新方法嘗試。

2014.8.14-2015.4.23再次國外內(nèi)資料收集，企業(yè)電話訪問。形成4次修改稿

2015.5.1-2015.11.30形成征求意見稿。第二次專家論證會(huì)。函審等。

4.1飼料添加劑植物乳桿菌-采樣和檢測依據(jù)

根據(jù)農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的獲得（植物乳桿菌）飼料添加劑生產(chǎn)許可證的企業(yè)名單和

市場直接購買方式、進(jìn)行采樣，共68個(gè)樣品（包括同一公司不同品牌產(chǎn)品），如

表2。其中，9個(gè)樣品生產(chǎn)企業(yè)已停止生產(chǎn)或暫時(shí)不生產(chǎn)該類產(chǎn)品，8個(gè)樣品生產(chǎn)

企業(yè)聯(lián)系不到。采集樣品經(jīng)登記、編號(hào)、取/留樣、盲樣跟蹤等步驟后、進(jìn)行初

步篩選，篩選原則為：①信息有追溯性；②樣品標(biāo)簽上明確標(biāo)識(shí)“植物乳桿菌”

并在實(shí)物中確實(shí)含有植物乳桿菌；③活菌數(shù)量≥產(chǎn)品標(biāo)識(shí)活菌數(shù)；④市場上有售，

并具一定代表性。經(jīng)過樣品的初步檢驗(yàn)，確定13個(gè)樣品為跟蹤檢測和評(píng)價(jià)的樣品。

4

表2（植物乳桿菌）飼料添加劑生產(chǎn)企業(yè)名錄

序號(hào)省份生產(chǎn)許可證號(hào)獲證企業(yè)名稱

1

山東省飼添（2009）2688山東壽光富士達(dá)生物科技有限公司

2

河南省飼添（2010）1064鄭州金百合生物工程有限公司

3

山東省飼添（2010）1285青島綠海洋生物技術(shù)有限公司飼料廠

4

山東省飼添（2010）1763高唐華農(nóng)生物工程有限公司

5內(nèi)蒙古自

飼添（2010）2774內(nèi)蒙古普澤生物制品有限責(zé)任公司

治區(qū)

6內(nèi)蒙古自

飼添（2010）2857內(nèi)蒙古林泰生物科技發(fā)展有限公司

治區(qū)

7

廣東省飼添（2010）2889開平柏麗寶生物化學(xué)有限公司

8

湖南省飼添（2011）1879長沙藍(lán)馬生物飼料有限公司

9

遼寧省飼添（2011）1986沈陽豐美生物技術(shù)有限公司

10

遼寧省飼添（2011）2122大連三科生物工程有限公司

11

河北省飼添（2011）3044河北康達(dá)利藥業(yè)有限公司

12

廣東省飼添（2011）3051廣州正無窮生物科技有限公司

5

13

山東省飼添（2012）0662青島興業(yè)生物工程有限公司

14

遼寧省飼添（2012）2168沈陽金科豐牧業(yè)科技有限公司

15

黑龍江省飼添（2012）2316哈爾濱中科生物工程有限公司

16

河北省飼添（2012）3106奧瑪（唐山）生物工程有限公司

17

山東省飼添（2012）3126山東寶來利來生物工程股份有限公司

18

河北省飼添（2012）3162衡水鑫明科技有限公司

19

山東省飼添（2006）2073山東康地恩生物科技有限公司

20

重慶市飼添（2008）2403重慶優(yōu)寶生物技術(shù)有限公司

21

上海市潤盈生物工程（上海）有限公司

22

河北省滄州旺發(fā)生物技術(shù)研究所

23

北京市飼添（2010）2774北京和美科盛生物技術(shù)有限公司

24臺(tái)灣生合生物科技股份有限公司、芯來旺生物科技

江蘇省

（南京）有限公司

25

上海市紫石生物集團(tuán)

表3跟蹤檢測和評(píng)價(jià)的樣品

內(nèi)部品名廠家主要成分備注

編號(hào)

5多利菌寶山東康地恩生物科技嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、同時(shí)進(jìn)行：國標(biāo)草

有限公司屎腸球菌案方法對(duì)多菌株

區(qū)分試驗(yàn)。

11優(yōu)長素重慶優(yōu)寶生物技術(shù)有乳桿菌、酵母菌、芽孢桿菌、同時(shí)進(jìn)行國標(biāo)草

限公司菌體蛋白、生物活性肽、酵案方法對(duì)多菌株

母多糖區(qū)分試驗(yàn)。

16產(chǎn)酶益生山東寶來利來生物工2株高酶活性枯草芽孢桿同時(shí)進(jìn)行：①同廠

素.群康程股份有限公司菌、乳酸片球菌、植物乳桿家不同品牌產(chǎn)品

（103畜菌及其代謝產(chǎn)物穩(wěn)定性試驗(yàn)；②國

禽通用）標(biāo)草案方法對(duì)多

17植物乳桿山東寶來利來生物工植物乳桿菌及其代謝產(chǎn)物菌株區(qū)分試驗(yàn)。

6

菌程股份有限公司載體等

19潤盈植物潤盈生物工程（上海）植物乳桿菌

乳桿菌有限公司

200億

20普澤植物內(nèi)蒙古普澤生物制品植物乳桿菌

乳桿菌有限責(zé)任公司

22旺發(fā)植物滄州旺發(fā)生物技術(shù)研植物乳桿菌

乳桿菌究所

26潤盈發(fā)酵潤盈生物工程（上海）植物乳桿菌、糞腸球菌、枯同時(shí)進(jìn)行：國標(biāo)草

包有限公司草芽孢桿菌案方法對(duì)多菌株

區(qū)分試驗(yàn)。

29青貯邦北京和美科盛生物技干燥植物乳桿菌同時(shí)進(jìn)行：①同廠

術(shù)有限公司家不同品牌產(chǎn)品

32乳安邦北京和美科盛生物技干酪乳桿菌、植物乳桿菌穩(wěn)定性試驗(yàn)；②國

術(shù)有限公司標(biāo)草案方法對(duì)多

33發(fā)菌邦北京和美科盛生物技干酪乳桿菌、植物乳桿菌菌株區(qū)分試驗(yàn)。

術(shù)有限公司

34芯來旺臺(tái)灣生合生物科技股植物乳桿菌

份有限公司、芯來旺

生物科技（南京）有

限公司

35紫石紫石生物植物乳桿菌

4.2飼料添加劑植物乳桿菌-術(shù)語和定義的編制依據(jù)

主要參考《伯杰細(xì)菌鑒定手冊（第八版）》（R.E.布坎南，N.E.吉本斯等）、《常

見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》（東秀珠、蔡妙英等）相關(guān)植物乳桿菌的鑒定部分。

4.3飼料添加劑植物乳桿菌-微生物形態(tài)的編制依據(jù)

4.3.1菌體形態(tài)

參考《伯杰細(xì)菌鑒定手冊（第八版）》（R.E.布坎南，N.E.吉本斯等，809頁）、

《乳酸細(xì)菌分類鑒定及實(shí)驗(yàn)方法》（凌代文，6-16頁），并經(jīng)過對(duì)植物乳桿菌標(biāo)準(zhǔn)

7

菌株和樣品的革蘭氏染色和顯微觀察，確定植物乳桿菌的菌體形態(tài)為：菌體細(xì)胞

呈圓端直桿狀，通常0.9～1.2μm寬，3～8μm長，單個(gè)、成對(duì)或成短鏈

表4跟蹤檢測和評(píng)價(jià)的樣品-特征描述

編號(hào)形態(tài)革氏染色a芽孢莢膜鞭毛

5直桿、短鏈陽性無無無

11直桿、單個(gè)陽性無無無

16直桿、單個(gè)陽性無無無

17直桿、單個(gè)陽性無無無

19直桿、單個(gè)陽性無無無

20直桿、短鏈陽性無無無

22直桿、單個(gè)陽性無無無

26直桿、單個(gè)陽性無無無

29直桿、短鏈陽性無無無

32直桿、單個(gè)陽性無無無

33直桿、短鏈陽性無無無

34直桿、單個(gè)陽性無無無

35直桿、短鏈陽性無無無

a:革蘭氏染色部分為生理生化特征，放在標(biāo)準(zhǔn)中4.1.3。

圖1跟蹤檢測和評(píng)價(jià)樣品顯微形態(tài)

5（編號(hào)，下同）111617

19202226

29323334

8

35

4.3.2菌落形態(tài)

參考國家標(biāo)準(zhǔn)《乳酸細(xì)菌分類鑒定及實(shí)驗(yàn)方法》（凌代文，6-16頁）、《食品

衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)乳酸菌飲料中乳酸菌檢驗(yàn)》（GB/T4789.35）、《進(jìn)出口食品中

乳酸菌檢驗(yàn)方法第1部分：分離與計(jì)數(shù)方法》（SN/T1941.1-2007）及數(shù)十篇乳酸

菌文獻(xiàn)，選用適合乳酸菌的培養(yǎng)基為國標(biāo)草案中分離用培養(yǎng)基，見表5。跟蹤檢

測的樣品在下述培養(yǎng)基上培養(yǎng)（37℃±2℃，24-48h），菌落形態(tài)均符合典型特征，

如圖3。

表5適合乳酸菌的培養(yǎng)基及相應(yīng)菌落形態(tài)

培養(yǎng)基名稱菌落形態(tài)

改良TJA平皿底為黃色，菌落中等大小，微白色，濕潤，邊緣不整齊，直徑3mm

±1mm,如棉絮團(tuán)狀菌落

改良MC平皿底為粉紅色，菌落較小，圓形，紅色，邊緣似星狀，直徑2mm±1mm，

可有淡淡的暈

MRS平皿底為黃色，菌落中等大小，圓形，白色，濕潤，凸起，邊緣整齊，

直徑為3mm士1mm

圖2部分樣品菌落形態(tài)

29（編號(hào)，下同）32

9

3334

35

4.3.3生理生化特征

主要參考《伯杰細(xì)菌鑒定手冊（第八版）》（R.E.布坎南，N.E.吉本斯等，809-811

頁）。凡在改良TJA或改良MC瓊脂斜面上，于36±1℃,24h～48h培養(yǎng)，刮取菌

苔，進(jìn)行表6中試驗(yàn)，以驗(yàn)證植物乳桿菌生理生化特征；包括革蘭氏染色、4%

牛磺膽酸鈉的耐受性實(shí)驗(yàn)、利用精氨酸產(chǎn)氨及利用不同碳源實(shí)驗(yàn)。

表6植物乳桿菌生理生化特征

特征結(jié)果特征結(jié)果

革蘭氏染色+蔗糖+

4%牛磺膽酸鈉+麥芽糖+

精氨酸產(chǎn)氨-甘露醇+

碳水化合物反應(yīng)水楊苷+

七葉苷+山梨醇+

纖維二糖+棉籽糖+

10

注：+為陽性反應(yīng)；-為陰性反應(yīng)。

圖3部分樣品革蘭氏染色結(jié)果

29（編號(hào)，下同）32

3334

35

圖4跟蹤檢測樣品的生理生化反應(yīng)結(jié)果

5-26號(hào)精氨酸產(chǎn)氨實(shí)驗(yàn)29-35號(hào)精氨酸產(chǎn)氨實(shí)驗(yàn)

11

5-26號(hào)4%牛黃膽酸鈉耐受性實(shí)驗(yàn)29-35號(hào)4%牛黃膽酸鈉耐受性實(shí)驗(yàn)

表7跟蹤檢測樣品的生理生化結(jié)果描述

七葉纖維二麥芽甘露水楊山梨蔗還原4%牛精氨15℃

硝酸磺膽酸產(chǎn)生長

編號(hào)苷糖糖醇苷醇糖鹽a酸鈉氨b

5+++++++-+-+

11+++++++-+-+

16+++++++-+-+

17+++++++-+-+

19+++++++-+-+

20+++++++-+-+

22+++++++-+-+

26+++++++-+-+

29+++++++-+-+

32+++++++-+-+

33+++++++-+-+

34+++++++-+-+

35+++++++-+-+

a,b:兩項(xiàng)特征試驗(yàn)最終未列入標(biāo)準(zhǔn)的征求意見稿。

4.4飼料添加劑植物乳桿菌-感官特征的編制依據(jù)

目前，市場在售的乳酸菌類飼料添加劑大多為固態(tài)產(chǎn)品，在我們收集的樣品

中，只有2個(gè)為液態(tài)產(chǎn)品。從溶解性分析，水溶性產(chǎn)品居多，不乏腸溶性產(chǎn)品。

12

從形態(tài)分析，存在凍干菌粉、濕法造粒、載體吸附菌粉等，且粒度在20-100目

范圍，顏色都很均一。在標(biāo)準(zhǔn)草案中的表述為：“產(chǎn)品性狀應(yīng)符合包裝上標(biāo)明的

產(chǎn)品固有的形狀、色澤、氣味、均勻程度、雜質(zhì)等，無異臭味?！?/p>

表8跟蹤檢測樣品的感官特征

編號(hào)粒度形狀色澤均勻程度有無刺激有無雜質(zhì)

（目/微米）氣味

550/297粉末亮黃均勻無無

1180/178粉末淡黃均勻無無

1250/297粉末淡黃均勻無無

1680/178粉末灰白均勻無無

1750/297粉末淡黃+白均勻無無

1950/297顆粒白均勻無無

2060/250粉末白均勻無無

2250/297粉末淡黃均勻無無

2660/250顆粒+粉末顆粒：白均勻無無

粉末：黃

2945/355粉末白均勻無無

3245/355粉末淡黃均勻無無

3350/297粉末淡黃均勻無無

3450/297粉末淡黃均勻無無

3550/297粉末白均勻無無

圖5跟蹤檢測樣品的感官圖示

5（編號(hào)，下同）111617

19202226

13

4.5飼料添加劑植物乳桿菌-水分的編制依據(jù)

對(duì)收集的所有完整包裝的固態(tài)樣品的水分含量的測定：稱取2.00～10.0g切

碎或磨細(xì)的樣品，精密稱量后放入置95～105℃干燥箱中，瓶蓋斜支于瓶邊，干

燥2～4h后，蓋好取出，放入干燥器內(nèi)冷卻0.5h后稱量。然后再放入95～105℃

干燥箱中干燥1h左右，取出，放干燥器內(nèi)冷卻0.5h后再稱量。至前后兩次質(zhì)量

差不超過2mg，即為恒量。結(jié)果表明：所收集的完整包裝的固態(tài)樣品的水分含量

在4.8%-7.5%區(qū)間內(nèi)。另外，隨機(jī)挑選1個(gè)樣品，調(diào)節(jié)不同水分（6%和12%），

貯存不同時(shí)間（3、6、12月），結(jié)果發(fā)現(xiàn)高水分樣品中，隨水分提高和時(shí)間延長，

霉菌總量也顯著增加?？紤]到商品加工、流通、儲(chǔ)藏、使用過程中可能帶來的誤

差和水分增加，標(biāo)準(zhǔn)草案中的表述為：“不高于8.0%?！?/p>

12%-12mon

12%-6mon

12%-3mon

6%-12mon

6%-6mon

6%-3mon

00.20.40.60.811.21.41.6

圖6隨機(jī)樣品調(diào)節(jié)不同水分—霉菌生長情況（縱坐標(biāo)：水分%+月數(shù)；橫坐標(biāo)：

霉菌增長倍數(shù)，以1.0×104CFU/g設(shè)為1）

表9跟蹤檢測樣品水分檢測結(jié)果

編號(hào)樣品1/%樣品2/%樣品3/%平均值/%標(biāo)準(zhǔn)差

56.136.186.146.150.03

115.815.825.825.820.01

164.894.844.864.860.03

175.555.535.585.550.03

196.126.116.116.110.01

207.147.177.147.150.02

14

224.044.074.054.050.02

266.066.056.056.050.01

297.567.577.547.560.02

347.047.017.037.030.02

4.6飼料添加劑植物乳桿菌-活菌數(shù)的編制依據(jù)

活菌數(shù)，是益生菌在最重要的功能性指標(biāo)之一；在FAO/WHO和歐盟對(duì)益生

菌的定義中，均強(qiáng)調(diào)“足夠數(shù)量”的必要性。所以說，活菌數(shù)的高低關(guān)系到產(chǎn)品

的質(zhì)量。目前，針對(duì)植物乳桿菌的活菌數(shù)在ISO標(biāo)準(zhǔn)、國標(biāo)、行標(biāo)中尚無強(qiáng)制規(guī)

定，但乳酸菌在食品、保健食品中相關(guān)規(guī)定、及微生物飼料添加劑產(chǎn)品的文獻(xiàn)中

數(shù)據(jù)都值得借鑒。在國標(biāo)《發(fā)酵乳》（GB19302-2010）、《乳酸菌飲料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》

（16321-2003）、《嬰兒配方食品》（GB10765–2010）、《較大嬰兒和幼兒配方食品》

（GB10767–2010）、《嬰幼兒谷類輔助食品》（GB10769–2012）等均明確：產(chǎn)品

中活性益生菌的活菌數(shù)應(yīng)≥106CFU/g(ml)。而在大量代表性雜志文獻(xiàn)中（包括

《AnimalScience》、《動(dòng)物學(xué)報(bào)》、《動(dòng)物學(xué)雜志》、《動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)》等），微生

物飼料添加劑的有效活菌濃度大多在107-1010范圍內(nèi)。從植物乳桿菌的菌種特征、

發(fā)酵規(guī)律、工業(yè)成熟度分析，飼料添加劑從業(yè)者自微生物發(fā)酵、離心收集、凍干

處理或加載體復(fù)配、干燥等步驟后，得到大于1.0×1010CFU/g的菌粉是完全可以

達(dá)到的。同時(shí)，從收集樣品的標(biāo)識(shí)和實(shí)際檢驗(yàn)來看，85%的（乳酸菌）樣品的初

始活菌數(shù)大于1.0×109CFU/g，且使用濃度均要求或建議在1.0×106CFU/g（飼料）

以上。所以，考慮到行業(yè)平均加工水平、有效使用濃度、市場實(shí)際情況，并本著

促進(jìn)行業(yè)發(fā)展、對(duì)從業(yè)者提高“適當(dāng)門檻”的原則，標(biāo)準(zhǔn)草案提出：植物乳桿菌

活菌數(shù)≥1.0×109CFU/g。

表10跟蹤檢測樣品的標(biāo)識(shí)活菌數(shù)

編號(hào)標(biāo)識(shí)活菌數(shù)，CFU/g初檢活菌數(shù)*，CFU/g

5≥1×109（復(fù)合菌組成）8

1.0×10

11≥1.51×1013（復(fù)合菌組成）10

1.0×10

16≥2.0×108（復(fù)合菌組成）6

1.0×10

172.0×101010

2.28×10

15

192.0×10109

5.9×10

20--10

1.09×10

229

3.0×10

269

2.62×10

292.0×101010

≥2.0×10

32≥1.5×109（復(fù)合菌）9

≥5.0×10

33≥1.0×109（復(fù)合菌）9

2.5×10

34≥1.0×101110

2.28×10

351.0×10119

1.5×10

*：初檢活菌數(shù)為采樣即檢測的結(jié)果。樣品初檢均在產(chǎn)品標(biāo)識(shí)保質(zhì)期的前2月內(nèi)。

4.7飼料添加劑植物乳桿菌-衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的編制依據(jù)

主要參考《微生物飼料添加劑技術(shù)通則》（NY/T1444-2007）、《飼料微生物

添加劑地衣芽孢桿菌》（NY/T1461-2007）、《飼料添加劑枯草芽孢桿菌》

（2131-2012）中關(guān)于衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)規(guī)定。其中，考慮到霉菌及其產(chǎn)生的毒素

可能對(duì)人和動(dòng)物的健康危害，我們認(rèn)為在標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)有更嚴(yán)格的上限控制；結(jié)合樣

品檢測結(jié)果，標(biāo)準(zhǔn)草案規(guī)定霉菌和酵母總數(shù)的允許量為1.0×104個(gè)/kg。標(biāo)準(zhǔn)草案表

述如表11。

在植物乳桿菌類產(chǎn)品中混有雜菌是不可避免的。雜菌可能來自環(huán)境、用水、

配料、載體及包裝等，同時(shí)雜菌的種類又具有不可預(yù)知性，這給雜菌的鑒別及其

定量帶來了極大的難度。按照通常檢測雜菌的辦法：將樣品稀釋到合適濃度，傾

注平板培養(yǎng)，根據(jù)菌落的差異辨別雜菌，并同時(shí)定量。由于常用9cm平板空間

有限，勉強(qiáng)分辨菌落形態(tài)、須平板至多長100-300個(gè)菌落，所以依靠平板培養(yǎng)方

法的分辨率僅為1%。我們嘗試過3個(gè)方案進(jìn)行這部分試驗(yàn)：a.選擇12cm或18cm

平板培養(yǎng)菌，提供更大生長空間、利于分辨雜菌；b.分子生物學(xué)方法定量植物乳

桿菌，與平板培養(yǎng)法得出的總菌數(shù)相減，得到雜菌數(shù)量；c.將常見雜菌分類，利

用與植物乳桿菌生理生化特征的差異來計(jì)算雜菌數(shù)量。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)，a方案觀察菌

16

落形態(tài)差異仍存局限，無法將雜菌分辨率提高至0.1%；b方案中分子生物學(xué)方法

定量植物乳桿菌的精確度與精密度差、對(duì)實(shí)驗(yàn)人員操作水平要求高，不適用作標(biāo)

準(zhǔn)方法（試驗(yàn)結(jié)果見附件）；c方案只能確定幾類菌群，但準(zhǔn)確度和實(shí)用性很強(qiáng)

（試驗(yàn)結(jié)果見附件）。這種情況下，將雜菌率的允許量仍設(shè)為為1.0%。

表11植物乳桿菌飼料添加劑衛(wèi)生指標(biāo)

項(xiàng)目指標(biāo)

雜菌率，%≤1.0

黃曲霉素B1，g/kg≤10.0

砷的允許量，mg/kg≤2.0

鉛的允許量，mg/kg≤5.0

汞的允許量，mg/kg≤0.1

鎘的允許量，mg/kg≤0.5

大腸菌群的允許量，CFU/100g≤400

霉菌總數(shù)的允許量，CFU/g＜1.0×104

致病菌（志賀氏菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌）不得檢出

如表12和表13所示，所選樣品進(jìn)行霉菌、大腸菌群、致病菌和重金屬的檢

測，結(jié)果表明分別有72%和82%的樣品在標(biāo)準(zhǔn)草案規(guī)定范圍內(nèi)。

表12跟蹤檢測樣品的霉菌、致病菌的檢測結(jié)果

編霉菌總數(shù)，沙門氏菌,大腸菌群,金黃色葡萄球志賀氏菌,

號(hào)CFU/gCFU/gCFU/100g菌,CFU/gCFU/g

2

51.3×10-380--

3

118.3×10-450--

4

161.2×10-407--

3

179.1×10-397--

4

192.13×10-157--

3

205.6×10-211--

3

227.0×10-356--

3

263.8×10-309--

2

291.32×10-107--

17

2

329.7×10-401--

4

33＞1.0×10-206--

表13部分樣品的重金屬含量分析

砷，mg/kg鉛，mg/kg鎘，mg/kg汞，mg/kg黃曲霉毒

編號(hào)素，μg/kg

50.12未檢出（＜1）未檢出（＜未檢出（＜未檢出（＜

0.01）0.005）0.5）

170.012未檢出（＜1）未檢出（＜未檢出（＜未檢出（＜

0.01）0.005）0.5）

190.074未檢出（＜1）未檢出（＜未檢出（＜未檢出（＜

0.01）0.005）0.5）

20未檢出（＜未檢出（＜1）未檢出（＜未檢出（＜未檢出（＜

0.01）0.01）0.005）0.5）

220.763.85未檢出（＜未檢出（＜未檢出（＜

0.01）0.005）0.5）

29未檢出（＜未檢出（＜1）未檢出（＜未檢出（＜未檢出（＜

0.01）0.01）0.005）0.5）

320.7222.08未檢出（＜未檢出（＜未檢出（＜

0.01）0.005）0.5）

33未檢出（＜未檢出（＜1）未檢出（＜未檢出（＜未檢出（＜

0.01）0.01）0.005）0.5）

4.8飼料添加劑植物乳桿菌-試驗(yàn)方法的編制依據(jù)

4.8.1抽樣、感官檢驗(yàn)、水分的編制依據(jù)

抽樣、感官檢驗(yàn)、水分均有專項(xiàng)國標(biāo)及其它國標(biāo)中方法作為依據(jù)。

4.8.2活菌計(jì)數(shù)試驗(yàn)方法的編制依據(jù)

如圖7所示植物乳桿菌檢驗(yàn)結(jié)果流程圖。

18

產(chǎn)品樣品

樣品無菌生理鹽水

25g+225ml

10倍系列稀釋

選擇2～3個(gè)適宜稀釋度，各以1ml加入平

皿，將45℃～50℃的改良TJA、改良MC

或MRS培養(yǎng)基傾注平板，搖勻培養(yǎng)

36℃±1℃

24h～48h

挑取5～10個(gè)菌落

菌體、菌落形態(tài)檢驗(yàn)

生理生化特征檢驗(yàn)

菌種鑒定菌落計(jì)數(shù)

報(bào)告

圖7所示植物乳桿菌檢驗(yàn)結(jié)果流程圖

主要參考《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)乳酸菌檢驗(yàn)》（GB4789.35）、《食品微生物學(xué)

檢驗(yàn)雙歧桿菌檢驗(yàn)》（GB4789.34）、《飼料微生物添加劑地衣芽孢桿菌》

（NY/T1461-2007）、《飼料添加劑枯草芽孢桿菌》（2131-2012）等標(biāo)準(zhǔn)級(jí)方法，

通過定性和定量兩部分完成植物乳桿菌的檢測。所以標(biāo)準(zhǔn)草案表述為：

“5.4.2菌種鑒定

5.4.2.1樣品制備

在按照GB/T14699.1進(jìn)行采樣基礎(chǔ)上，稱取25.0g±0.01g樣品，加入225ml無菌生理鹽

水中均質(zhì)，待均勻后，再將樣品用無菌生理鹽水按十倍稀釋法制成不同濃度稀釋液。取1.0ml

合適濃度稀釋液，注入無菌平板，每個(gè)稀釋度做3次重復(fù)。將融化并冷卻至45℃～50℃的

19

改良TJA、改良MC或MRS培養(yǎng)基，向每個(gè)培養(yǎng)皿中倒入約15ml～20ml，搖勻并凝固，制

成相應(yīng)培養(yǎng)基的瓊脂平板。36℃±1℃倒置培養(yǎng)24h～48h。

5.4.2.2菌落選擇：用接種針或接種環(huán)隨機(jī)挑取5～10個(gè)菌落。

5.4.2.3菌體形態(tài)檢驗(yàn)：涂片染色，用光學(xué)顯微鏡觀察菌體形態(tài)。

5.4.2.4菌落形態(tài)檢驗(yàn)：觀察菌落顏色、形態(tài)。

5.4.2.5生理生化特征檢驗(yàn)：接種并進(jìn)行4.1.3表2中各項(xiàng)試驗(yàn)。

5.4.3菌落計(jì)數(shù)

5.4.3.1植物乳桿菌計(jì)數(shù)

5.4.2.1項(xiàng)中菌落總數(shù)減去雜菌數(shù)之差，即得植物乳桿菌計(jì)數(shù)結(jié)果。

5.4.3.2稀釋度

選取適宜的稀釋度，菌落在30～300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

5.4.3.3計(jì)算方法

計(jì)算方法見公式（1）。

N=∑C/[V(n1+0.1n2)d]…………（1）

式中：N——樣品中菌落總數(shù)

∑C——兩個(gè)連續(xù)稀釋度全部平板上菌落數(shù)總和

V——每個(gè)平板上接種的體積，ml

n1——第1個(gè)稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)

n2——第2個(gè)稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)

d——相對(duì)第1稀釋度的稀釋因數(shù)

結(jié)果為每克產(chǎn)品微生物菌落數(shù)，以科學(xué)計(jì)數(shù)法表示結(jié)果。

具體結(jié)果輸出實(shí)例應(yīng)參考GB/T4789.2-2010。

5.4.3.4允許差

兩次平行測定結(jié)果的相對(duì)偏差不大于2%。”

4.8.3雜菌允許量試驗(yàn)方法的編制依據(jù)

因?yàn)殡s菌來源多樣性和不可預(yù)知性，本標(biāo)準(zhǔn)草案重點(diǎn)關(guān)注了幾類菌群：a.致

病菌、霉菌和酵母；草案中均設(shè)定了明確限量，在衛(wèi)生指標(biāo)中單獨(dú)列出；有相應(yīng)

的國標(biāo)方法檢測。b.形態(tài)明顯差別菌；通過菌落觀察排除。標(biāo)準(zhǔn)草案表述為：

“5.5.1雜菌率檢測

雜菌率=雜菌數(shù)/（植物乳桿菌活菌數(shù)+雜菌數(shù)）×100%（2）

20

4.8.4其它試驗(yàn)方法的編制依據(jù)

檢測項(xiàng)目所采用的檢測方法如表14。

表14檢測項(xiàng)目及檢測方法一覽表

檢測項(xiàng)目檢測方法

抽樣GB/T14699.1

水分GB6435

黃曲霉毒素B1GB/T17480

砷含量GB/T13079

汞含量GB/T13081

鉛含量GB/T13080

鎘含量GB/T13082

霉菌總數(shù)GB/T4789.15

大腸菌群GB/T4789.3

致病菌GB/T4789.5、GB/T4789.10、

GB/T13091

4.9飼料添加劑植物乳桿菌-檢驗(yàn)規(guī)則的編制依據(jù)

4.9.1出廠檢驗(yàn)的編制依據(jù)

感官指標(biāo)、水分、微生物含量（包括活菌數(shù)和雜菌）是出廠最必要的3組數(shù)

據(jù)，因?yàn)?項(xiàng)指標(biāo)是產(chǎn)品表觀區(qū)分和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的直接體現(xiàn)。所以標(biāo)準(zhǔn)草案表述為：

“感官指標(biāo)、水分、微生物含量（包括活菌數(shù)和雜菌）為出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目，由生產(chǎn)

廠或公司的質(zhì)檢部門進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格并簽發(fā)質(zhì)量合格證的產(chǎn)品方可出廠?！?/p>

4.9.2型式