土壤纖維素酶（Solid-cellulaseS-CL）活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

第第頁(yè)土壤纖維素酶（Solid—cellulase，S—CL）活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)土壤纖維素酶（Solidcellulase，SCL）活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)微量法100管/48樣注意：正式測(cè)定前務(wù)必取23個(gè)預(yù)期差別較大的樣本做猜測(cè)定測(cè)定意義：SCL重要來(lái)源于土壤微生物，SCL催化農(nóng)作物秸稈產(chǎn)生的葡萄糖是重要的碳源營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。測(cè)定原理：采用蒽酮比色法測(cè)定SCL催化纖維素降解產(chǎn)生的還原糖的含量。需自備的儀器和用品：酶標(biāo)儀/可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、甲苯、硫酸（不允許快遞）和蒸餾水。試劑的構(gòu)成和配制：試劑一：甲苯10mL×1瓶，4℃保管；（自備）試劑二：液體6mL×1瓶，4℃保管；試劑三：液體40mL×1瓶，4℃保管；試劑四：粉劑×1瓶，4℃保管；臨用前加入5mL蒸餾水和45mL濃硫酸充分溶解待用。樣品處理：新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過(guò)30～50目篩。加樣表和測(cè)定步驟：對(duì)照管測(cè)定管風(fēng)干土樣（g）0.050.05試劑一（μL）5050振蕩混勻15min試劑二（μL）90試劑三（μL）370370蒸餾水（μL）1809037℃振蕩反應(yīng)3h后，90℃水浴15min（蓋緊，防止水分散失），冷卻后8000g25℃離心10min，取上清，得糖化液糖化液（μL）140140試劑四（μL）260260混勻，90℃水浴10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，測(cè)620nm下吸光值A(chǔ)，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。SCL活力計(jì)算：a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y=5.018x0.0462；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。SCL活力（mg/d/g）＝（ΔA+0.0462）÷5.018×V反總÷W÷T=19.1×（ΔA+0.0462）T：反應(yīng)時(shí)間，3h=1/8d；V反總：反應(yīng)體系總體積：0.6mL；W：樣本質(zhì)量，0.05g。b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y=2.5090x0.0462；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。SCL活力（mg/d/g）＝（ΔA+0.0462）÷2.5090×V反總÷W÷T=38.3×（ΔA+