(高清版)GBT 40643-2021 山楂葉提取物中金絲桃苷的檢測 高效液相色譜法

山楂葉提取物中金絲桃苷的檢測高效液相色譜法2021-10-11發(fā)布2022-05-01實(shí)施國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由國家林業(yè)和草原局提出。本文件由全國林化產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAC/TC558)歸口。本文件起草單位：北京林業(yè)大學(xué)、中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院、中國林業(yè)科學(xué)研究院林產(chǎn)化學(xué)工業(yè)研究所、北京電子科技職業(yè)學(xué)院、浙江圣氏生物科技有限公司、浙江科技學(xué)院、深圳市品牌建設(shè)促進(jìn)中心、中山洪力健康食品產(chǎn)業(yè)研究院、河北冠卓檢測科技股份有限公司、中國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所、無限極(中國)有限公司共同。1山楂葉提取物中金絲桃苷的檢測高效液相色譜法本文件描述了利用高效液相色譜法測定山楂葉提取物中金絲桃苷的原理、儀器與設(shè)備、試劑與材本文件適用于山楂葉提取物中金絲桃苷含量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理在同一個分析周期內(nèi)，按一定時間程序調(diào)節(jié)流動相配比，使山楂葉提取物的關(guān)鍵組分按各自適宜的容量因子達(dá)到良好的分離目的。采用金絲桃苷對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)外標(biāo)法直接定量，采用的色譜柱為反相C18柱。金絲桃苷的紫外光譜測定表明其最大吸收波長為360nm,因此選定360nm作為金絲桃苷的高效液相色譜檢測波長。5試劑與材料除非另有說明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和符合GB/T6682一級的水。5.1.2冰乙酸(CH?COOH)。5.2標(biāo)準(zhǔn)品金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥98%。5.3金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液稱取200mg(精確至0.001g)金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品于100mL棕色容量瓶中，加甲醇使其溶解并定容至25.4金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液將金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液用甲醇稀釋制備一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)液濃度分別為0.02mg/mL、0.04mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.40mg/mL、0.60mg/mL、1.0mg/mL,臨用時配制。5.5材料6儀器與設(shè)備6.1分析天平：靈敏度為萬分之一克。6.2超聲波清洗器：超聲頻率40kHz,功率300W。6.3高效液相色譜儀：包含梯度洗脫、紫外檢測器及色譜工作站。7檢測方法7.1樣品處理稱取干燥的山楂葉提取物樣品0.100g(精確至0.001g),加甲醇適量，超聲輔助溶解10min～30min,7.2測定條件按照制造商操作手冊運(yùn)行高效液相色譜儀。以下分析條件可供參考，采用其他條件應(yīng)驗(yàn)證其適用性。色譜條件如下：——色譜柱：RP-C18[250mm×4.6mm(內(nèi)徑),5μm];梯度洗脫條件見表1。表1金絲桃苷的梯度洗脫條件時間/min0.5%冰乙酸水溶液(A)/%甲醇(B)/%000GB/T40643—20217.3標(biāo)準(zhǔn)曲線制作按7.2色譜條件檢測，分別吸取10μL標(biāo)準(zhǔn)工作溶液注入高效液相色譜儀，以色譜峰的峰面積為縱金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC色譜圖參見附錄A。7.4試樣測定按7.2的色譜條件，取7.1步驟中的樣品進(jìn)樣，得到試樣溶液的峰面積，根據(jù)保留時間和金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖定性。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得試樣溶液中金絲桃苷的含量。試樣溶液中金絲桃苷的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)將提取液稀釋后測定或增加提取物的質(zhì)量重新檢測。8結(jié)果計(jì)算與表示8.1結(jié)果計(jì)算山楂葉提取物中金絲桃苷含量按式(1)進(jìn)行計(jì)算：…………………(1)X——樣品中金絲桃苷的含量，單位為毫克每克(mg/g);c——樣品中金絲桃苷的濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL);8.2結(jié)果表示計(jì)算結(jié)果以重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留至小數(shù)點(diǎn)后兩位有效9重復(fù)性在重復(fù)條件下獲得的5次獨(dú)立測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%。10精密度取同一試樣，連續(xù)進(jìn)樣5次，按7.2的色譜條件檢測其HPLC圖譜；比較金絲桃苷對應(yīng)色譜峰的峰面積，5次進(jìn)樣的峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)不超過5%。11加標(biāo)回收率標(biāo)準(zhǔn)品添加量在待測樣品濃度0.5～1.5倍濃度范圍內(nèi)，加標(biāo)回收率應(yīng)在90%～110%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)小于10%nAl