GB∕T 29344-2023 靈芝孢子粉采收及加工技術(shù)規(guī)范（正式版）

靈芝孢子粉采收及加工技術(shù)規(guī)范2023-08-06發(fā)布國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)GB/T29344—2023前言 I 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4靈芝孢子粉的采收 4.1基本要求 4.2采收條件 4.3采收方法 25靈芝孢子粉的加工 25.1加工人員管理 25.2加工車間環(huán)境 35.3孢子粉的加工步驟 36貯存 7質(zhì)量管理 4附錄A(規(guī)范性)靈芝孢子多糖的測(cè)定方法 附錄B(規(guī)范性)破壁靈芝孢子粉破壁率的測(cè)定方法 附錄C(規(guī)范性)含油率的測(cè)定方法 參考文獻(xiàn) I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件規(guī)定了食品質(zhì)量相關(guān)技術(shù)要求，食品安全相關(guān)要求見有關(guān)法律法規(guī)、政策和食品安全標(biāo)準(zhǔn)等文件。本文件代替GB/T29344—2012《靈芝孢子粉采收及加工技術(shù)規(guī)范》,與GB/T29344—2012相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動(dòng)外，主要技術(shù)變化如下：——增加了“靈芝孢子多糖的含量規(guī)定”(見4.1.5);——更改了“套筒采粉”(見4.3.1,2012年版的4.3.1);——更改了“風(fēng)機(jī)吸附采粉”(見4.3.2,2012年版的4.3.2);——更改了“地膜覆蓋采粉”(見4.3.3,2012年版的4.3.3);——更改了“車間潔凈度要求”(見5.2.4,2012年版的6.4);——更改了“過篩、除雜”(見5.3.2,2012年版的7.1);——更改了“滅菌”方法(見5.3.3,2012年版的7.2);——更改了“破壁”加工方法(見5.3.5,2012年版的7.4);——增加了“質(zhì)量管理”(見第7章);——更改了破壁率測(cè)定方法的樣品制備(見B.4、B.5.1,2012年版的A.4、A.5.1)。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由全國(guó)食品工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC64)提出并歸口。本文件起草單位：福建仙芝樓生物科技有限公司、仙芝科技(福建)股份有限公司、中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院、廣州白云山漢方現(xiàn)代藥業(yè)有限公司、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所、福建省標(biāo)準(zhǔn)化研究院、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所、福建省食用菌行業(yè)協(xié)會(huì)、深圳市標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究院、桂林大野領(lǐng)御生物科技有限公司。本文件于2012年首次發(fā)布，本次為第一次修訂。1靈芝孢子粉采收及加工技術(shù)規(guī)范1范圍本文件規(guī)定了靈芝孢子粉的采收和加工技術(shù)要求。本文件適用于赤芝[Ganodermalucidum(Leyss.exFr.)Karst]和松杉靈芝(Ganodermatsugae2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB50073—2013潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范定量包裝商品計(jì)量監(jiān)督管理辦法(國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局〔2005〕75號(hào)令)3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。靈芝孢子ganodermaspore由靈芝子實(shí)體發(fā)育產(chǎn)生并可在成熟時(shí)釋放的擔(dān)孢子。破壁靈芝孢子sporoderm-brokenganodermaspore經(jīng)加工，孢子壁被破碎的靈芝孢子。破壁率sporoderm-brokenrate破壁的孢子在總孢子中所占的百分比。4靈芝孢子粉的采收4.1基本要求4.1.2采收人員進(jìn)入大棚、出芝房應(yīng)頭戴工作帽，身穿工作服。4.1.3采收用紙張、薄膜、無紡布等材料及盛裝容器應(yīng)符合相應(yīng)的食品容器、包裝材料的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，不應(yīng)對(duì)孢子粉的質(zhì)量產(chǎn)生影響。4.1.4采收用毛刷、剪刀等工具應(yīng)干凈并專用。4.1.5不應(yīng)過度采收靈芝孢子粉，以免影響孢子粉的質(zhì)量，靈芝孢子粉中的多糖(以無水葡萄糖計(jì))應(yīng)不低于0.9%,靈芝孢子多糖按附錄A規(guī)定的方法測(cè)定。24.2采收條件4.2.1當(dāng)靈芝菌蓋邊緣白色生長(zhǎng)圈消失時(shí)，最后噴一次水將菌蓋清理干凈，生長(zhǎng)1d～2d,待有少量孢4.2.2環(huán)境溫度以25℃~29℃為宜。4.3采收方法取白紙皮或無紡布，根據(jù)靈芝子實(shí)體菌蓋大小和靈芝柄長(zhǎng)度來制作套筒的大小，把白紙皮或無紡布裁成長(zhǎng)35cm～60cm、高20cm～26cm的矩形，然后卷成圓筒，直徑比靈芝子實(shí)體大5cm左右。待靈芝菌蓋邊緣黃白色生長(zhǎng)圈消失，即將彈射孢子時(shí)，在地面鋪設(shè)塑料墊底薄膜，以隔離泥土。再鋪上方形的接粉薄膜或無紡布，其邊長(zhǎng)應(yīng)比套筒直徑長(zhǎng)3cm以上。鋪好接粉薄膜或無紡布后，將準(zhǔn)備好的紙筒或無紡布筒逐個(gè)套住靈芝子實(shí)體。筒壁距菌蓋邊緣應(yīng)至少2.5cm。筒口用紙封蓋或無紡布板蓋上，蓋板與靈芝菌蓋應(yīng)有不少于5cm的空隙距離。收粉時(shí)將蓋板和套筒取下后，將收集在套筒內(nèi)側(cè)的孢子粉刷入容器中。然后把靈芝子實(shí)體從基部剪切下來，將子實(shí)體上面的靈芝孢子粉掃入容器內(nèi)。最后提起接粉薄膜或無紡布，將孢子粉倒入容器內(nèi)。4.3.2風(fēng)機(jī)吸附采粉當(dāng)靈芝生長(zhǎng)至有靈芝孢子粉彈射時(shí)，將靈芝栽培房或大棚適當(dāng)密封，大棚栽培的地面鋪上塑料薄膜，以隔離泥沙。當(dāng)靈芝孢子開始釋放時(shí)，將孢子收集器放置在出芝棚中間，應(yīng)距地面1m～1.5m高，開動(dòng)風(fēng)機(jī)，形成負(fù)壓流，收集靈芝孢子粉，應(yīng)每日將收集的靈芝孢子粉取出。4.3.3地膜覆蓋采粉當(dāng)靈芝菌蓋邊緣白色生長(zhǎng)圈消失，菌蓋表面有少量孢子彈射時(shí)，在平整過的地面上鋪設(shè)塑料墊底薄膜，隔離泥土，然后再鋪接粉薄膜或無紡布，最后利用能通風(fēng)透氣的食品級(jí)的茶濾紙或無紡布搭建成小拱棚，棚高50cm以上，不高于80cm。采收孢子粉時(shí)先用專用的軟毛刷把靈芝菌蓋表面孢子粉刷入專用的容器內(nèi)，再將靈芝子實(shí)體剪下，采收地膜上的孢子粉時(shí)只采收上層膜粉，避免采收黏附在地膜上的下層孢子粉。5靈芝孢子粉的加工5.1加工人員管理5.1.1加工人員應(yīng)每年進(jìn)行健康體檢，并符合相關(guān)法律、法規(guī)的規(guī)定。5.1.2進(jìn)入車間的人員應(yīng)按規(guī)定程序進(jìn)行更衣。35.2加工車間環(huán)境5.2.2滅菌后的出料應(yīng)置于凈化車間內(nèi)。5.2.4需凈化的車間，潔凈度應(yīng)至少達(dá)到GB50073—2013中3.0.1中的第8級(jí)。5.3孢子粉的加工步驟采收后的孢子粉應(yīng)及時(shí)進(jìn)行干燥，應(yīng)在防風(fēng)避雨的棚內(nèi)曬干或用烘箱烘干，干燥至水分不大于先用孔徑180μm篩網(wǎng)除去較大雜質(zhì)，再用孔徑50μm篩網(wǎng)篩去細(xì)小雜質(zhì)，灰分不應(yīng)大于3.0%?？刹捎酶邏赫羝⑤椪盏葴缇绞?，采用輻照滅菌的，輻照劑量應(yīng)符合食品安全標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，滅菌后的微生物指標(biāo)應(yīng)符合相應(yīng)的規(guī)定。將高壓蒸汽滅菌后需要烘干的孢子粉用烘干設(shè)備進(jìn)行烘干，烘干至水分不大于9.0g/100g。應(yīng)采用低溫物理方法破壁，如用機(jī)械碾壓、氣流粉碎等方式對(duì)滅菌后的靈芝孢子粉進(jìn)行破壁，不應(yīng)采用金屬撞擊的方法破壁，破壁率應(yīng)不低于95.0%,破壁孢子粉的含油率應(yīng)不低于25.0%,破壁率按附錄B規(guī)定的方法測(cè)定，含油率按附錄C規(guī)定的方法測(cè)定。當(dāng)破壁后的孢子粉結(jié)成片狀或粒狀時(shí)，應(yīng)進(jìn)行粉碎處理，并過孔徑180μm篩網(wǎng)。封裝應(yīng)平整嚴(yán)密，破壁靈芝孢子粉應(yīng)避光，包裝材料應(yīng)符合相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求，凈含量應(yīng)符合《定量包裝商品計(jì)量監(jiān)督管理辦法》的規(guī)定。6貯存產(chǎn)品應(yīng)存放于通風(fēng)、干燥、陰涼的倉(cāng)庫(kù)內(nèi)，不應(yīng)與有害、有異味、有腐蝕性的物品混貯，堆放應(yīng)隔墻離地。47質(zhì)量管理5(規(guī)范性)靈芝孢子多糖的測(cè)定方法A.1試劑和材料A.1.1硫酸(分析純)。A.1.3無水葡萄糖對(duì)照品。A.1.4硫酸蒽酮溶液：精密稱取蒽酮0.1g,加硫酸溶液100mL使溶解，搖勻，置于棕色瓶中。A.1.5實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682規(guī)定的三級(jí)水規(guī)格。A.2儀器和設(shè)備A.2.2分光光度計(jì)(士2nm)。A.2.5容量瓶25mL,容量瓶50mL。A.2.7具塞試管10mL。A.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備A.3.1對(duì)照品溶液的制備取無水葡萄糖對(duì)照品12mg,準(zhǔn)確稱取，加水制成每1mL含0.12mg的溶液。A.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制吸取對(duì)照品溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL,分別置于10mL的具塞試管中，各加水補(bǔ)充至2.0mL,緩慢勻速加入硫酸蒽酮溶液6mL,立即搖勻，靜置15min后置于冰水浴中冷卻15min,取出，以相應(yīng)的試劑為空白，在625nm處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。A.4供試品溶液的制備取本品約1g(精確至0.001g),置圓底燒瓶中，加水60mL,靜置1h,加熱回流4h,趁熱過濾，用少量熱水洗滌濾器和濾渣，將濾紙和濾渣置圓底燒瓶中，加水60mL,加熱回流3h,趁熱過濾，合并濾液，置水浴鍋上蒸干，殘?jiān)盟?mL溶解，邊攪拌邊緩慢加入無水乙醇75mL,搖勻，在4℃放置12h,離心，棄去上清液，沉淀物用熱水溶解并轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，放冷，加水至刻度，搖勻后取適量溶液于具塞離心管中，離心，精密量取上清液3mL,置25mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。吸取供試品溶液2.0mL,置10mL具塞試管中，按照A.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的方法，自“緩慢勻速加6GB/T29344—2023入硫酸蒽酮溶液6mL”起，同法操作，測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中無水葡萄糖的質(zhì)量A.6結(jié)果計(jì)算按式(A.1)計(jì)算。式中：…………(A.1)wA——多糖的含量，%,pA——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的多糖的質(zhì)量濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL);ma——樣品質(zhì)量，單位為毫克(mg); 50——水提醇沉后獲得的沉淀物經(jīng)熱水溶解定容的體積，單位為毫升(mL)。A.7精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。7(規(guī)范性)破壁靈芝孢子粉破壁率的測(cè)定方法B.1方法提要利用血球計(jì)數(shù)板對(duì)未破壁的孢子進(jìn)行計(jì)數(shù)，分別計(jì)算出單位質(zhì)量孢子粉中靈芝孢子的數(shù)量和單位質(zhì)量破壁孢子粉中未破壁靈芝孢子的數(shù)量，從而獲得破壁孢子粉的破壁率。B.2儀器與設(shè)備B.2.1血球計(jì)數(shù)板：25中格×16個(gè)小格或16個(gè)中格×25個(gè)小格。B.2.4光學(xué)顯微鏡：放大倍數(shù)≥200。B.3試劑和溶液B.3.2吐溫80(分析純)。B.3.3蔗糖(分析純)。B.4樣品制備分別取有代表性的靈芝孢子粉和破壁靈芝孢子粉的樣品各至少50g,分別充分混勻，置于密閉的容器內(nèi)。B.5.1取適量的靈芝孢子粉A和破壁靈芝孢子粉B,于烘箱60℃下烘干5h。B.5.2準(zhǔn)確稱取經(jīng)烘干的靈芝孢子粉A和破壁靈芝孢子粉B,其中m?=0.1000g,mg=0.1500g。B.5.3分別稱取5.0g經(jīng)過研磨后過孔徑為0.15mm(100目)篩的蔗糖粉末，分別與靈芝孢子粉A、破壁靈芝孢子粉B充分混合至色澤均一。用蒸餾水分別溶解上述樣品，在樣品溶液中加0.1mL吐溫80,用蒸餾水定容到100mL的容量瓶中，并在室溫超聲振蕩30min,使孢子充分分散。B.5.4將待測(cè)孢子懸液，用吸管吸取一滴置于蓋玻片的邊緣，使液體緩緩滲入，多余的液體用吸水紙吸取，進(jìn)樣完成后靜置約30s,然后將血球計(jì)數(shù)板置于200倍及以上放大倍數(shù)的光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察計(jì)數(shù)。B.5.5使用25中格×16個(gè)小格的計(jì)數(shù)板時(shí)，應(yīng)計(jì)算出血球計(jì)數(shù)板4個(gè)角上與中央共5個(gè)中格中含完整靈芝孢子的數(shù)目(即以80個(gè)小格為一個(gè)計(jì)數(shù)單位);當(dāng)使用16個(gè)中格×25個(gè)小格的計(jì)數(shù)板時(shí)，應(yīng)計(jì)算出血球計(jì)數(shù)板4個(gè)角上的4個(gè)中格中含完整靈芝孢子的數(shù)目(即以100個(gè)小格為一個(gè)計(jì)數(shù)單位)。如有部分孢子處于中格邊線上，計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)僅統(tǒng)計(jì)位于中格四個(gè)邊線的其中兩個(gè)邊線的孢子數(shù)，每個(gè)樣品觀察計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)去掉離群較大的值，每個(gè)樣品有效觀察計(jì)數(shù)不少于3次，然后計(jì)算它們的平均數(shù)n。8GB/T29344—2023………………(B.1式中：N——每克孢子粉中含完整靈芝孢子數(shù)，單位為個(gè)每克(個(gè)/g);nm——80個(gè)小方格內(nèi)含完整靈芝孢子的總數(shù)，單位為個(gè)；100——孢子稀釋液的體積數(shù)值；m——樣品的質(zhì)量，單位為克(g);400——指血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室內(nèi)共有400個(gè)小方格；10000——血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)室的容積為0.1mm3,1mL相當(dāng)于10000個(gè)血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)室的容積。B.6.2使用16個(gè)中格×25個(gè)小格的計(jì)數(shù)板時(shí)，每克孢子粉中含完整靈芝孢子數(shù)按式(B.2)計(jì)算?！?B.2)式中：N——每克孢子粉中含完整靈芝孢子數(shù)，單位為個(gè)每克(個(gè)/g);ne——100個(gè)小方格內(nèi)含完整靈芝孢子的總數(shù)，單位為個(gè)；100——孢子稀釋液的體積數(shù)值；m——樣品的質(zhì)量，單位為克(g);400——指血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室內(nèi)共有400個(gè)小方格；10000——血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)室的容積為0.1mm3,1mL相當(dāng)于10000個(gè)血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)室的容積。B.6.3破壁率的計(jì)算按式(B.3)計(jì)算破壁率。………