《水環(huán)境監(jiān)測》課件-學(xué)習(xí)情景41 細(xì)菌總數(shù)的測定

室內(nèi)環(huán)境檢測與控制技術(shù)專業(yè)資源庫ProfessionalResourceBaseofIndoorEnvironmentalInspectionandControlTechnology細(xì)菌總數(shù)的測定——平皿計(jì)數(shù)法一

預(yù)備知識(shí)菌落總數(shù)測定是測定水中需氧菌、兼性厭氧菌和異養(yǎng)菌密度的方法。因?yàn)榧?xì)菌能以單獨(dú)個(gè)體、成雙成對、鏈狀、成簇等形式存在，而且沒有任何單獨(dú)一種培養(yǎng)基能滿足一個(gè)水樣中所有細(xì)菌的生理要求。所以，由此法所得的菌落可能要低于真正存在的活細(xì)菌的總數(shù)。菌落總數(shù)是指水樣在營養(yǎng)瓊脂上有氧條件下37℃培養(yǎng)48h后，所得1ml水樣所含菌落的總數(shù)。此法主要作為判定飲用水、水源水等污染程度的標(biāo)志。二實(shí)訓(xùn)準(zhǔn)備準(zhǔn)備事宜名

稱方

法樣品的采集和保存

水樣采集在經(jīng)滅菌的玻璃瓶內(nèi)，要盡快分析，一般不宜超過2h，否則應(yīng)4℃保存，可保存12h。實(shí)訓(xùn)試劑水蒸餾水或純水。營養(yǎng)瓊脂成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂10~20g，蒸餾水1000ml。制法：將上述成分混合后，加熱溶解，調(diào)整pH為7.4~7.6，分裝于玻璃容器中（如用含雜質(zhì)較多的瓊脂時(shí)，應(yīng)先過濾），經(jīng)103.43kPa（121℃，151b）滅菌20min，儲(chǔ)存于暗處備用。三分析步驟生活生活飲用水水源水以無菌操作方法用滅菌吸管吸取兩份1ml充分混勻的水樣（平行接種）

以無菌操作方法吸取1ml充分混勻的水樣，注入盛有9ml滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1︰10稀釋液注入滅菌平皿中吸取1︰10稀釋液1ml注入盛有9ml滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1︰100稀釋液，按同法依次稀釋成，1︰1000，1︰10000稀釋液等備用傾注約15ml已融化并冷卻到45℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用滅菌吸管吸取未稀釋水樣和2~3個(gè)適宜稀釋度的水樣1ml，分別注入滅菌平皿內(nèi)（每個(gè)稀釋度應(yīng)做一平行接種）三分析步驟立即旋搖平皿，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻水樣接種的同時(shí)，另用一個(gè)平皿只傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基空白對照待冷卻凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，使底面向上置于36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h菌落計(jì)數(shù)（可用眼睛直接觀察，可用菌落計(jì)數(shù)器或放大鏡檢查）三分析步驟記下各平皿菌落數(shù)，求同稀釋度的平均菌落數(shù)按各種不同情況計(jì)算和報(bào)告計(jì)數(shù)結(jié)果求同稀釋度的平均數(shù)時(shí)，若其中一個(gè)平皿有較大片狀菌落生長時(shí)，不宜采用，應(yīng)以無片狀菌落生長的平皿作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌落不到平皿的一半，其余一半中菌落數(shù)分布很均勻，則可將此半皿計(jì)數(shù)后乘2以代表全皿菌落數(shù)。然后再求該稀釋度的平均菌落數(shù)①首先選擇平均菌落數(shù)在30~300之間者進(jìn)行計(jì)算，若只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍，將該菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1實(shí)例1）。②若有兩個(gè)稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30~300之間，則視二者之比值決定。比值小于2報(bào)告兩者的平均數(shù)（如表1實(shí)例2），若比值大于或等于2報(bào)告其中稀釋度較小的菌落數(shù)（見表1實(shí)例3和4）。③若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1實(shí)例5）。④若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1實(shí)例6）。⑤若所有稀釋度的平均菌落數(shù)不在30~300之間，以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1實(shí)例7）。⑥若所有稀釋度的平板上均無菌落生長，以未檢出報(bào)告之。⑦若所有平板上都菌落密布，不要用“多不可計(jì)”報(bào)告，在稀釋度最大的平板上，任意數(shù)其中2個(gè)平板1cm2中的菌落數(shù)，除2求每平方厘米內(nèi)平均菌落數(shù)，乘以皿底面積63.61cm2，再乘其稀釋倍數(shù)作報(bào)告。⑧菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告：菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采用兩位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算，也可用10的指數(shù)來表示（見表1“報(bào)告方式”欄）。三分析步驟三分析步驟實(shí)例不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩個(gè)稀釋度菌落數(shù)之比菌落總數(shù)/（CFU/ml）報(bào)告方式/（CFU/ml）10-110-210-31136516420-1640016000或1.6×10422760295461.63775038000或3.8×10432890271602.22710027000或2.7×1044150308215001500或1.5×1035多不可計(jì)1650513-513000510000或5.1×105627115-270270或2.7×1027多不可計(jì)30512-3050031000或3.1×104表1稀釋度選擇及菌落總數(shù)報(bào)告方式四菌落總數(shù)分析原始數(shù)據(jù)記錄表樣品編號(hào)不同稀釋度的菌落數(shù)兩個(gè)稀釋度菌落數(shù)之比菌落總數(shù)（CFU/ml）10010-110-210-3

1

2

平均

1

2

平均

分析人

校對人