(高清版)GBT 40179-2021 植物中有機(jī)酸的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法

ICSCCS07.080A40GB/T40179—2021液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)IGB/T40179—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由全國(guó)生化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC387)提出并歸口。本文件起草單位：中國(guó)測(cè)試技術(shù)研究院生物研究所、四川大學(xué)、中國(guó)計(jì)量大學(xué)、北京工商大學(xué)、河北省食品檢驗(yàn)研究院。1GB/T40179—2021植物中有機(jī)酸的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法1范圍本文件規(guī)定了植物中有機(jī)酸的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定方法?；郊姿岷?,4-二羥基苯甲酸的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1有機(jī)酸organicacids植物材料中一類具有酸性的有機(jī)化合物。4原理試樣用50%甲醇溶液加熱回流提取后，經(jīng)反相色譜柱分離，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測(cè)定和確證，內(nèi)標(biāo)工作曲線法定量。5試劑或材料除非另有說(shuō)明，本方法使用的試劑均為色譜純。水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。5.2甲酸。5.30.1%甲酸溶液：移取甲酸1.0mL于1L容量瓶中，用水定容至刻度。5.450%甲醇溶液：移取甲醇500.0mL于1L容量瓶中，用水定容至刻度。信息詳見(jiàn)附錄A中表A.1,純度均≥98%。5.6單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確稱取各有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)品適量(精確到0.01mg),其中富馬酸、反式-烏頭酸2GB/T40179—2021酸、2,5-二羥基苯甲酸和3,4-二羥基苯甲酸用甲醇溶解，混勻，配制成濃度均為1000.0mg/L的有機(jī)酸單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于0℃~4℃下密封保存，有效期為3個(gè)月。5.7混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確吸取適量各有機(jī)酸單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于同一10mL容量瓶中，用50%甲的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于0℃~4℃下密封保存，有效期為3個(gè)月。5.8內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取琥珀酸-2,2,3,3-d?標(biāo)準(zhǔn)品適量(精確到0.01mg),用50%甲醇溶液溶解，混勻，配制成濃度為100mg/L的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，于0℃~4℃下密封保存，有效期為3個(gè)月。5.9內(nèi)標(biāo)溶液：準(zhǔn)確吸取內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液1.0mL于100mL容量瓶中，用50%甲醇溶液稀釋并定容至刻5.10混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取適量混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10mL容量瓶中，再分別準(zhǔn)確加入2.5mL內(nèi)標(biāo)溶液，用50%甲醇溶液稀釋配制成濃度均為0.10mg/L、0.25mg/L、0.50mg/L、0.75、1.0mg/L、1.25mg/L的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。5.110.22μm親水性尼龍微孔濾膜。6儀器設(shè)備6.1液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀：配電噴霧離子源(ESI)。6.2電子天平：感量為0.0001g和0.01mg。6.3高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于10000r/min。6.4高速均質(zhì)器。6.5高速粉碎機(jī)。6.6冷凝回流裝置。7分析步驟7.1樣品制備取金銀花、黨參、山楂、枸杞等有代表性干制成兩份，裝入潔凈的盛樣容器內(nèi)，密封并標(biāo)識(shí)，于0℃~4℃下避光保存，一周內(nèi)測(cè)定。7.2試樣處理稱取約1.5g干樣或10g鮮樣(精確至0.001g)于100mL圓底燒瓶中，加入內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液625μL和離心5min,取2.0mL上清液于10mL容量瓶中，用50%甲醇溶液定容至刻度，混勻，過(guò)0.22μ3GB/T40179—2021b)流動(dòng)相：流動(dòng)相A為0.1%甲酸溶液，流動(dòng)相B為甲醇，梯度洗脫程序見(jiàn)表1;時(shí)間/min流動(dòng)相B體積分?jǐn)?shù)/%05655555在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)，如果樣品中待測(cè)物質(zhì)的保留時(shí)間和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間一致(變化范圍在士2.5%以內(nèi)),且樣品譜圖中待測(cè)組分監(jiān)測(cè)離子的相對(duì)豐度和濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)士20士30士50見(jiàn)附錄B中表B.1,多反應(yīng)監(jiān)測(cè)圖參見(jiàn)附錄C。4GB/T40179—20217.5平行試驗(yàn)按7.2～7.4的規(guī)定對(duì)同一試樣進(jìn)行兩次平行測(cè)定。8試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理樣品中待測(cè)物含量的計(jì)算見(jiàn)式(1): (1)式中：X——試樣中被測(cè)組分含量，單位為毫克每千克(mg/kg);p——從內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上得到的被測(cè)組分溶液質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V——試樣溶液總體積，單位為毫升(mL);m——試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留兩位小數(shù)。9精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。本方法測(cè)定14種有機(jī)酸的定量限參見(jiàn)附錄A中表A.1。5(資料性)有機(jī)酸化合物信息及定量限有機(jī)酸化合物信息及定量限見(jiàn)表A.1。表A.1有機(jī)酸化合物信息及定量限序號(hào)中文名稱英文名稱CAS號(hào)分子式相對(duì)分子質(zhì)量定量限/(mg/kg)干樣鮮樣1富馬酸fumaricacidC?H?O?0.492反式-烏頭酸t(yī)rans-aconiticacid4023-65-8C?H?O?0.253沒(méi)食子酸gallicacidC?H?O?0.120.8242,5-二羥基苯甲酸2,5-dihydroxybenzoicacid490-79-9C?H?O?0.120.825己二酸adipicacidC?H??O?0.496綠原酸chlorogenicacid327-97-90.120.827對(duì)羥基苯甲酸p-hydroxybenzoicacid99-96-7C?H?O?0.030.2083,4-二羥基苯甲酸3,4-dihydroxybenzoicacid99-50-3C?H?O?0.120.829香草酸vanillicacidCgHgO?0.986.52咖啡酸caffeicacid331-39-5C,HgO?0.25丁香酸syringicacid530-57-4C?H??O?0.49對(duì)香豆酸p-coumaricacid501-98-4C?H?O?0.120.82阿魏酸ferulicacidC??H??O?0.25水楊酸salicylicacid69-72-7C?H?O?0.120.82琥珀酸-2,2,3,3-d?succinicacid-2,2,3,3-d?14493-42-6C?H?D?O?GB/T40179—2021(資料性)e)干燥氣溫度：290℃;序號(hào)中文名稱保留時(shí)間min定量離子對(duì)m/定性離子對(duì)m/z源內(nèi)碎裂電壓V碰撞能量V1富馬酸115.0/71.0115.0/71.0;115.0/32.12反式-烏頭酸173.0/85.1173.0/85.1;173.0/128.93沒(méi)食子酸8.80169.0/125.0169.0/125.0;169.0/124.042,5-二羥基苯甲酸153.0/109.0153.0/109.0;153.0/108.05己二酸145.1/101.2145.1/101.2;145.1/83.26綠原酸353.1/191.0353.1/191.0;353.1/85.07對(duì)羥基苯甲酸137.0/93.0137.0/93.0;137.0/65.083,4-二羥基苯甲酸153.0/109.1153.0/109.1;153.0/108.09香草酸167.1/152.0167.1/152.0;167.1/108.0咖啡酸179.0/135.1179.0/135.1;179.0/134.0丁香酸197.1/182.0197.1/182.0;197.1/123.0對(duì)香豆酸163.0/119.0163.0/119.0;163.0/93.1阿魏酸193.1/134.0193.1/134.0;193.1/178.0水楊酸137.0/93.0137.0/93.0;137.0/65.1琥珀酸-2,2,3,3-d?121.0/77.0121.0/77.0;121.0/102.06響應(yīng)值/104響應(yīng)值/104響應(yīng)值/104響應(yīng)值/104響應(yīng)值/104(資料性)15種有機(jī)酸的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜MRM15種有機(jī)酸的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜MRM圖見(jiàn)圖C.1～圖C.15。響應(yīng)值門(mén)03時(shí)應(yīng)值/103響應(yīng)值/104i/min8.80minr/mll圖C.1富馬酸的MRM圖圖C.2反式-烏頭酸的MRM圖圖C.3沒(méi)食子酸的MRM圖4.5-4-0//min圖C.42,5-二羥基苯甲酸的圖C.5己二酸的MRM圖圖C.6綠原酸的MRM圖MRM圖//minminl/min16.6216.62min2.5-/min對(duì)羥基苯甲酸的MRM圖3,4-二羥基苯甲酸的MRM圖響應(yīng)值/10響應(yīng)值/10響應(yīng)值/104GB/T40179—2021響應(yīng)值/1043.5-3-2.5-2-0.5-0