應(yīng)用EMR-Lipid檢測(cè)乳和乳制品中獸藥殘留量

1應(yīng)用EMR-Lipid檢測(cè)乳和乳制品中獸藥殘留量本文件規(guī)定了乳和乳制品中氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、林可霉素、替米考星、諾氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星殘留快速檢測(cè)方法的試劑、儀器和耗材、操作步驟、結(jié)果判定等技術(shù)要求。本文件適用于乳和乳制品。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T20762-2006畜禽肉中林可霉素、竹桃霉素、紅霉素、替米考星、泰樂菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉它霉素、交沙霉素殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法GB/T21312-2007動(dòng)物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測(cè)方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法GB/T22338-2008動(dòng)物源性食品中氯霉素類藥物殘留量測(cè)定3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理試樣提取液經(jīng)均質(zhì)、超聲提取、離心，取上清液經(jīng)CaptivaEMR-Lipid凈化，凈化液經(jīng)氮?dú)獯蹈?，定容，微孔濾膜過(guò)濾，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測(cè)定。5試劑和材料5.1甲酸（HCOOH）5.2乙腈（CH3CN）：液相色譜級(jí)5.30.1%甲酸-水溶液：向100mL容量瓶中加入0.1mL甲酸，用水定容至刻度5.45%甲酸-乙腈提取液：取50mL甲酸，加乙腈稀釋至1000mL5.5氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考：純度≥95%5.6林可霉素、替米考星：純度≥95%25.7恩諾沙星、環(huán)丙沙星和諾氟沙星標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥99%6標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和標(biāo)準(zhǔn)工作液配制6.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配置分別準(zhǔn)確稱取適量的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、林可霉素、替米考星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和諾氟沙星標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（5.5、5.6、5.7）（精確到0.1mg），用甲醇配成500μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4°C避光保存可使用6個(gè)月）。6.2標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別準(zhǔn)確移取適量的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、林可霉素、替米考星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和諾氟沙星標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋成合適濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（現(xiàn)用現(xiàn)配）。7儀器和設(shè)備液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（配有電噴霧離子源），分析天平（精確至0.0001g），渦旋振蕩器，冷凍離心機(jī)，移液槍（200μL、1mL），氮吹儀。8分析步驟8.1試液提取凈化8.1.1乳、發(fā)酵乳和風(fēng)味發(fā)酵乳等液態(tài)乳制品稱取2g（精確至0.01g）混勻的試樣，置于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入5%甲酸-乙腈提取液（5.4）柱凈化（無(wú)需活化收集濾液于玻璃管中氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?mL0.1%甲酸-水溶液（5.3）復(fù)溶，過(guò)0.45μm濾膜至進(jìn)樣瓶，待上機(jī)測(cè)定。8.1.2乳粉和粉狀乳制品渦旋振蕩1min，超聲提取10min，5000r/min、5°C離心5min。取全部上清液過(guò)CaptivaEMR-Lipid柱凈化（無(wú)需活化收集濾液于玻璃管中氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?mL0.1%甲酸-水溶液復(fù)溶，過(guò)0.45μm濾膜至進(jìn)樣瓶，待上機(jī)測(cè)定。8.2液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定8.2.1液相色譜條件8.2.1.1色譜柱：ZorbaxSB-C18、3.5μm、2.1mm*100mm、或其他等效柱8.2.1.2流動(dòng)相：A（0.1%甲酸水溶液）、B（0.1%甲酸-乙腈）梯度洗脫（梯度洗脫程序參見表1）38.2.1.3流速：0.4mL/min8.2.1.4進(jìn)樣量：5μL8.2.1.5柱溫：35°C表1梯度洗脫程序化合物時(shí)間/min0.1%甲酸-水氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素0.0090.0090.004.0055.0045.004.1090.008.0090.00林可霉素、替米考星0.0095.005.002.0095.005.008.0090.0090.0095.005.00環(huán)丙沙星0.0085.0085.003.0080.0020.006.005.0095.006.1085.008.0085.008.2.2質(zhì)譜/質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源；電離模式：正/負(fù)離子模式；質(zhì)譜掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；其他參考質(zhì)譜條件見附錄A。8.2.3定性測(cè)定按照上述條件測(cè)定樣品和建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，如果樣品中化合物質(zhì)量色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時(shí)間相比中允許偏差±2.5%之內(nèi)；待測(cè)化合物定性離子對(duì)的重構(gòu)離子色譜峰的信噪比大于或等于3（S/N≥3定量離子對(duì)的重構(gòu)離子色譜峰的信噪比大于或等于10（S/N≥10定性離子對(duì)的相對(duì)豐度與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液相比，相對(duì)豐度偏差不超過(guò)表2的規(guī)定，則可判斷樣品中存在相應(yīng)的目標(biāo)化合物。4參考保留時(shí)間見附錄B。表2定性時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度>50%>20%~50%>10%~20%≤10%允許相對(duì)偏差±20%±25%±30%±50%8.3空白試驗(yàn)不稱取試樣，按8.1的步驟做空白實(shí)驗(yàn)。9結(jié)果計(jì)算外標(biāo)法定量，按式（1）計(jì)算藥物殘留量。X=式中： C×V×K m…………………X——試樣中待測(cè)組分殘留量，單位為微克每千克(μg/kgC——根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的試樣中待測(cè)組分的濃度，單位為納克每毫升（ng/mLV——定容體積，單位為毫升（mLK——稀釋倍數(shù)；m——試樣的稱樣量，單位為g。10精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。（資料性附錄）藥物中英文名稱、CAS號(hào)、分子式和定量離子對(duì)中文名稱CAS號(hào)分子式定量離子對(duì)碰撞氣能量/V去簇電壓/V氯霉素56-75-7C11H12Cl2N2O5321.0/151.9*321.0/256.9219氟苯尼考73231-34-2C12H14Cl2FNO4S355.9/336.0*355.9/184.9521甲砜霉素15318-45-3C12H15Cl2NO5S353.9/289.9*353.9/184.9921林可霉素154-21-2C18H35ClN2O6S407.2/126.1*407.2/359.23321替米考星108050-54-0C46H80N2O13869.4/174.2*869.4/132.14949諾氟沙星70458-96-7C16H18FN3O3320.3/302.3*320.3/276.3恩諾沙星93106-60-6C19H22FN3O3360.3/316.4*360.3/