應用EMR-Lipid檢測乳和乳制品中獸藥殘留量

1應用EMR-Lipid檢測乳和乳制品中獸藥殘留量本文件規(guī)定了乳和乳制品中氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、林可霉素、替米考星、諾氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星殘留快速檢測方法的試劑、儀器和耗材、操作步驟、結果判定等技術要求。本文件適用于乳和乳制品。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T20762-2006畜禽肉中林可霉素、竹桃霉素、紅霉素、替米考星、泰樂菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉它霉素、交沙霉素殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法GB/T21312-2007動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法液相色譜-質譜/質譜法GB/T22338-2008動物源性食品中氯霉素類藥物殘留量測定3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4原理試樣提取液經(jīng)均質、超聲提取、離心，取上清液經(jīng)CaptivaEMR-Lipid凈化，凈化液經(jīng)氮氣吹干，定容，微孔濾膜過濾，液相色譜-質譜/質譜儀測定。5試劑和材料5.1甲酸（HCOOH）5.2乙腈（CH3CN）：液相色譜級5.30.1%甲酸-水溶液：向100mL容量瓶中加入0.1mL甲酸，用水定容至刻度5.45%甲酸-乙腈提取液：取50mL甲酸，加乙腈稀釋至1000mL5.5氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考：純度≥95%5.6林可霉素、替米考星：純度≥95%25.7恩諾沙星、環(huán)丙沙星和諾氟沙星標準物質：純度≥99%6標準品、標準儲備液和標準工作液配制6.1標準儲備液配置分別準確稱取適量的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、林可霉素、替米考星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和諾氟沙星標準物質（5.5、5.6、5.7）（精確到0.1mg），用甲醇配成500μg/mL的標準儲備液（4°C避光保存可使用6個月）。6.2標準工作溶液分別準確移取適量的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、林可霉素、替米考星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和諾氟沙星標準儲備液，用甲醇稀釋成合適濃度的混合標準工作溶液（現(xiàn)用現(xiàn)配）。7儀器和設備液相色譜-串聯(lián)質譜儀（配有電噴霧離子源），分析天平（精確至0.0001g），渦旋振蕩器，冷凍離心機，移液槍（200μL、1mL），氮吹儀。8分析步驟8.1試液提取凈化8.1.1乳、發(fā)酵乳和風味發(fā)酵乳等液態(tài)乳制品稱取2g（精確至0.01g）混勻的試樣，置于50mL離心管中，準確加入5%甲酸-乙腈提取液（5.4）柱凈化（無需活化收集濾液于玻璃管中氮氣吹干，殘渣用2mL0.1%甲酸-水溶液（5.3）復溶，過0.45μm濾膜至進樣瓶，待上機測定。8.1.2乳粉和粉狀乳制品渦旋振蕩1min，超聲提取10min，5000r/min、5°C離心5min。取全部上清液過CaptivaEMR-Lipid柱凈化（無需活化收集濾液于玻璃管中氮氣吹干，殘渣用2mL0.1%甲酸-水溶液復溶，過0.45μm濾膜至進樣瓶，待上機測定。8.2液相色譜-質譜/質譜測定8.2.1液相色譜條件8.2.1.1色譜柱：ZorbaxSB-C18、3.5μm、2.1mm*100mm、或其他等效柱8.2.1.2流動相：A（0.1%甲酸水溶液）、B（0.1%甲酸-乙腈）梯度洗脫（梯度洗脫程序參見表1）38.2.1.3流速：0.4mL/min8.2.1.4進樣量：5μL8.2.1.5柱溫：35°C表1梯度洗脫程序化合物時間/min0.1%甲酸-水氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素0.0090.0090.004.0055.0045.004.1090.008.0090.00林可霉素、替米考星0.0095.005.002.0095.005.008.0090.0090.0095.005.00環(huán)丙沙星0.0085.0085.003.0080.0020.006.005.0095.006.1085.008.0085.008.2.2質譜/質譜條件離子源：電噴霧離子源；電離模式：正/負離子模式；質譜掃描方式：多反應監(jiān)測(MRM)；其他參考質譜條件見附錄A。8.2.3定性測定按照上述條件測定樣品和建立標準工作曲線，如果樣品中化合物質量色譜峰的保留時間與標準溶液的保留時間相比中允許偏差±2.5%之內；待測化合物定性離子對的重構離子色譜峰的信噪比大于或等于3（S/N≥3定量離子對的重構離子色譜峰的信噪比大于或等于10（S/N≥10定性離子對的相對豐度與濃度相當?shù)臉藴嗜芤合啾?，相對豐度偏差不超過表2的規(guī)定，則可判斷樣品中存在相應的目標化合物。4參考保留時間見附錄B。表2定性時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度>50%>20%~50%>10%~20%≤10%允許相對偏差±20%±25%±30%±50%8.3空白試驗不稱取試樣，按8.1的步驟做空白實驗。9結果計算外標法定量，按式（1）計算藥物殘留量。X=式中： C×V×K m…………………X——試樣中待測組分殘留量，單位為微克每千克(μg/kgC——根據(jù)標準曲線計算得到的試樣中待測組分的濃度，單位為納克每毫升（ng/mLV——定容體積，單位為毫升（mLK——稀釋倍數(shù)；m——試樣的稱樣量，單位為g。10精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。（資料性附錄）藥物中英文名稱、CAS號、分子式和定量離子對中文名稱CAS號分子式定量離子對碰撞氣能量/V去簇電壓/V氯霉素56-75-7C11H12Cl2N2O5321.0/151.9*321.0/256.9219氟苯尼考73231-34-2C12H14Cl2FNO4S355.9/336.0*355.9/184.9521甲砜霉素15318-45-3C12H15Cl2NO5S353.9/289.9*353.9/184.9921林可霉素154-21-2C18H35ClN2O6S407.2/126.1*407.2/359.23321替米考星108050-54-0C46H80N2O13869.4/174.2*869.4/132.14949諾氟沙星70458-96-7C16H18FN3O3320.3/302.3*320.3/276.3恩諾沙星93106-60-6C19H22FN3O3360.3/316.4*360.3/