T-YNZYC 0107-2023 綠色藥材 烏天麻種植用萌發(fā)菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

CCS65.020B00/09T/YNZYC云南省中藥材種植養(yǎng)殖行業(yè)協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)GreenMedicinalMaterialsTechniqueRegulationsofGerminatingArmillariellaProductiononGastrodiaT/YNZYC0107-2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由云南省中藥材種植養(yǎng)殖行業(yè)協(xié)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：昭通學(xué)院、昆明理工大學(xué)、云南省中藥材種植養(yǎng)殖行業(yè)協(xié)會(huì)、云南森浩菌業(yè)有限責(zé)任公司、昭通市天麻研究院。本文件主要起草人：楊順強(qiáng)、程立君、申開澤、崔秀明、楊野、唐鵬、何海艷、楊成翠、韓多、張永至、段明政、李世波、繆家云、蘇豹、陳曉虹。1T/YNZYC0107-2023綠色藥材烏天麻種植用萌發(fā)菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了昭通烏天麻種植用萌發(fā)菌的技術(shù)要求、生產(chǎn)規(guī)范、標(biāo)簽、包裝、運(yùn)輸和貯存。本文件適用于昭通烏天麻種植用萌發(fā)菌的綠色規(guī)范化生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4789.28食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)栽培基質(zhì)和試劑的質(zhì)量要求GB4806.1食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品接觸材料及制品通用安全要求GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志GB/T6543運(yùn)輸包裝用單瓦楞紙箱和雙瓦楞紙箱GB/T12728食用菌術(shù)語(yǔ)GB/T30642食品抽樣檢驗(yàn)通用導(dǎo)則GB/T41220食品包裝用復(fù)合塑料蓋膜NY/T1935食用菌栽培基質(zhì)質(zhì)量安全要求NY/T2375食用菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1萌發(fā)菌指能夠促進(jìn)天麻種子萌發(fā)的真菌，包含小菇科小菇屬的紫萁小菇（Mycena.osmundicola）、蘭小菇（M.prchicola）、石斛小菇（M.dendrobii）、開唇蘭小菇（M.anoectochila生產(chǎn)上以石斛小菇為主。3.2烏天麻蘭科天麻屬植物GastrodiaelataBl.f.glaucaS.Chow，其花葶、鱗片、花均呈灰烏色；塊莖多呈寬卵形、卵形、橢圓形。3.3鎖狀聯(lián)合為雙核細(xì)胞形成分裂產(chǎn)生雙核菌絲體的一種特有形式，常發(fā)生在菌絲頂端，開始時(shí)在細(xì)胞上產(chǎn)生突起，并向下彎曲，與下部細(xì)胞連接，形如鎖狀。鎖狀聯(lián)合是雙核菌絲的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，凡是產(chǎn)生鎖狀聯(lián)合的2T/YNZYC0107-2023菌絲均可斷定為雙核菌絲。形成鎖狀聯(lián)合的過(guò)程保證了雙核菌絲在進(jìn)行細(xì)胞分裂時(shí)，每節(jié)（每個(gè)細(xì)胞）都能含有兩個(gè)異質(zhì)（遺傳型不同）的核，為進(jìn)行有性生殖、通過(guò)核配形成擔(dān)子打下基礎(chǔ)。4技術(shù)要求4.1菌種質(zhì)量要求4.1.1母種母種應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1萌發(fā)菌母種感官要求及微生物學(xué)要求棉塞或硅膠塞，干燥、潔凈，松緊適度，能無(wú)無(wú)無(wú)無(wú)4.1.2原種原種應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2萌發(fā)菌原種感官要求及微生物學(xué)要求3T/YNZYC0107-2023表2萌發(fā)菌原種感官要求及微生物學(xué)要求（續(xù)）無(wú)無(wú)無(wú)無(wú)4.1.3栽培種栽培種應(yīng)符合表3的規(guī)定。表3萌發(fā)菌栽培種感官要求及微生物學(xué)要求無(wú)無(wú)4T/YNZYC0107-2023表3萌發(fā)菌栽培種感官要求及微生物學(xué)要求（續(xù)）無(wú)無(wú)4.2培育場(chǎng)地布局與設(shè)施設(shè)備4.2.1廠房布局與建造應(yīng)根據(jù)場(chǎng)地特點(diǎn)和生產(chǎn)要求合理布局，生產(chǎn)區(qū)與原料庫(kù)、成品庫(kù)、生活區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開。生產(chǎn)區(qū)具有獨(dú)立隔離的攤曬場(chǎng)、配料分裝室、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、貯存室、菌種檢驗(yàn)室等，并合理安排布局，滿足萌發(fā)菌不同生長(zhǎng)階段對(duì)環(huán)境條件的需求。做到人流與物流分開、有菌區(qū)與無(wú)菌區(qū)隔離，防止污染與交叉混淆。攤曬場(chǎng)應(yīng)地面平整，無(wú)遮擋物，遠(yuǎn)離火源。配料分裝室應(yīng)空間充足，確保水電方便。配料分裝室應(yīng)保持水電方便，防雨防曬，常溫干澡，并配備防蟲、防鼠、防雜菌污染相應(yīng)設(shè)施。滅菌室應(yīng)配置水電，保證通風(fēng)良好，進(jìn)出物料方便，熱源配套，并配置安全監(jiān)測(cè)設(shè)置。冷卻室采用潔凈、防塵、易散熱設(shè)計(jì)。接種室應(yīng)設(shè)置緩沖間，內(nèi)壁采用圓角設(shè)計(jì)，光滑潔凈，保持室內(nèi)正壓，經(jīng)常清洗消毒，保證空氣潔凈度。培養(yǎng)室和貯存室應(yīng)保證內(nèi)壁和屋頂光滑，便于清洗和消毒；墻壁厚度適當(dāng)，利于控溫、控濕，便于通風(fēng)；配制防蟲防鼠措施。菌種檢驗(yàn)室應(yīng)保證水電方便，便于安裝相應(yīng)的檢驗(yàn)儀器和設(shè)備。4.2.2設(shè)施設(shè)備生產(chǎn)各環(huán)節(jié)的設(shè)施規(guī)模要配套。冷卻室、接種室、培養(yǎng)室和貯存室都要有調(diào)溫設(shè)施。應(yīng)配備攪拌機(jī)、裝瓶（袋）機(jī)、高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、磅秤、天平、調(diào)溫設(shè)備、除濕機(jī)、培養(yǎng)架、恒溫箱、冰箱、顯微鏡等及常規(guī)用具。高壓滅菌及計(jì)量設(shè)備應(yīng)每年通過(guò)經(jīng)有關(guān)部門安全檢驗(yàn)。4.2.3技術(shù)人員要求生產(chǎn)應(yīng)配有與菌種生產(chǎn)所需的技術(shù)人員，包括操作人員，檢驗(yàn)人員。4.3生產(chǎn)工藝4.3.1栽培基質(zhì)人工配制用于為各級(jí)萌發(fā)菌種提供營(yíng)養(yǎng)要素的的培養(yǎng)原料。栽培基質(zhì)所用原輔料應(yīng)符合NY/T1935的規(guī)定。用水應(yīng)符合GB5749的規(guī)定?；瘜W(xué)添加劑如硫酸鎂、磷酸二氫鉀等應(yīng)至少為化學(xué)純。各級(jí)萌發(fā)菌菌種培養(yǎng)推薦的栽培基質(zhì)配方見表4：表4萌發(fā)菌菌種栽培基質(zhì)推薦配方5T/YNZYC0107-2023表4萌發(fā)菌菌種栽培基質(zhì)推薦配方（續(xù)）4.3.2基本生產(chǎn)工藝流程栽培基質(zhì)制備（配制、分裝、滅菌、冷卻）→接種→培養(yǎng)（檢查）→成品。4.3.3母種生產(chǎn)時(shí)間：每年8月至10月生產(chǎn)。一般在原種生產(chǎn)前的1個(gè)月～2個(gè)月。栽培基質(zhì)制備：按表1所列栽培基質(zhì)適當(dāng)增減原料配制母種栽培基質(zhì)，并分裝入玻璃試管至試管長(zhǎng)度的1/4至1/3，塞上容器蓋。高壓蒸汽滅菌30min（0.12MPa~0.15MPa，121℃~122℃),趁熱傾斜放置，斜面長(zhǎng)度為試管長(zhǎng)度的1/3至1/2，冷卻備用。接種：采用無(wú)菌操作法，在超凈工作臺(tái)上或接種箱內(nèi)用接菌鏟挑取0.5cm大小的純菌種，轉(zhuǎn)接于試管斜面上。培養(yǎng)（檢查）：萌發(fā)菌接種后，放置在18℃~20℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12d~20d。培養(yǎng)過(guò)程中及時(shí)去除不達(dá)標(biāo)菌種。母種轉(zhuǎn)管次數(shù)控制在5次內(nèi)。4.3.4原種生產(chǎn)時(shí)間：每年的10月至次年2月。一般在栽培種生產(chǎn)前3個(gè)月～4個(gè)月。栽培基質(zhì)制備：按表1所列栽培基質(zhì)適當(dāng)增減原料配制原種栽培基質(zhì)，并分裝入菌種瓶?jī)?nèi)至瓶肩處，塞上棉塞。高壓蒸汽滅菌90min（0.12MPa~0.15MPa，121℃~125℃),冷卻備用。接種：采用無(wú)菌操作法，在超凈工作臺(tái)上或接種箱內(nèi)挑取直徑1.5cm~3cm的優(yōu)質(zhì)母種塊（連同栽培基質(zhì)），移植接種于原種栽培基質(zhì)上端中央，隨即蓋塞。培養(yǎng)（檢查）：萌發(fā)菌接種后，將接種好的菌種瓶放置在18℃~20℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)45d~60d。培養(yǎng)過(guò)程及時(shí)去除不達(dá)標(biāo)菌種。菌種培養(yǎng)期間，恒溫培養(yǎng)室的濕度控制在40%~60%，每天進(jìn)行通風(fēng)換氣。4.3.5栽培種生產(chǎn)時(shí)間：每年的2月至次年3月。一般在天麻種子播種前2個(gè)月～3個(gè)月。栽培基質(zhì)制備：按表1所列栽培栽培基質(zhì)適當(dāng)增減原料配制栽培基質(zhì)，并分裝入14cm×28cm塑料袋至袋口距離為5cm左右，中間打一通氣孔，蓋塞。高壓蒸汽滅菌120min（0.12MPa~0.15MPa，接種：采用無(wú)菌操作法，在超凈工作臺(tái)上或接種箱內(nèi)挑取直徑1.5cm~3cm的優(yōu)質(zhì)原種塊（連同栽培基質(zhì)），移植接種于原種栽培基質(zhì)上端中央，隨即蓋塞或扎口。6T/YNZYC0107-2023培養(yǎng)（檢查）：萌發(fā)菌接種后放置在18℃~20℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)45d~60d。培養(yǎng)過(guò)程中及時(shí)去除不達(dá)標(biāo)菌種。菌種培養(yǎng)期間，恒溫培養(yǎng)室的濕度控制在40%~60%。5質(zhì)量檢驗(yàn)5.1組批同一栽培基質(zhì)配方、同--天接種、同一培養(yǎng)條件和質(zhì)量基本一致的符合規(guī)定數(shù)量的菌種為一批。每批次數(shù)量母種≥50支、原種≥200瓶（袋）,栽培種≥2000瓶（袋）。5.2抽樣方法從每一批中隨機(jī)抽取樣品，母種、原種、栽培種的抽樣量分別為該批菌種量的10%、5%、1%。但每批抽樣數(shù)量不得少于10支（瓶、袋）；超過(guò)100支（瓶、袋）的，可進(jìn)行二級(jí)抽樣，具體方法為：先按照該批菌種量的10%、5%、1%分成一級(jí)抽樣單位，再把抽中的一級(jí)抽樣單位按照菌種量的10%、5%、1%分成若干更小的二級(jí)抽樣單位進(jìn)行檢驗(yàn)。5.3感官檢驗(yàn)按表5相應(yīng)項(xiàng)目依次進(jìn)行感官檢驗(yàn)。表5感官要求檢驗(yàn)方法種栽培基質(zhì)上表面離栽培基質(zhì)灌菌絲體長(zhǎng)滿栽培基質(zhì)，潔白、濃密、生長(zhǎng)旺健，均勻，無(wú)分化，無(wú)老化，無(wú)頂端距管塞40~50外觀肉眼觀察有香味，無(wú)酸、臭、霉等5.4微生物學(xué)檢驗(yàn)5.4.1形貌觀察原種菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)用放大倍數(shù)不低于10×40倍的光學(xué)顯微鏡對(duì)培養(yǎng)物的水封片進(jìn)行觀察，每一檢樣應(yīng)觀察不少于50個(gè)視野。T/YNZYC0107-20235.4.2細(xì)菌檢驗(yàn)取少量疑有細(xì)菌污染的培養(yǎng)物，按無(wú)菌操作接入GB4789.28規(guī)定的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液中，25℃~28℃振蕩培養(yǎng)1~2天，觀察培養(yǎng)液是否混濁。培養(yǎng)液混濁，為有細(xì)菌污染；培養(yǎng)液澄清，為無(wú)細(xì)菌污染。5.4.3霉菌檢驗(yàn)取少量疑有霉菌污染的培養(yǎng)物，按無(wú)菌操作接種于表1母種推薦栽培基質(zhì)（2）上，25℃~28℃培養(yǎng)3~5天，出現(xiàn)非萌發(fā)菌菌絲形態(tài)菌落的，或有異味者為霉菌污染物，必要時(shí)進(jìn)行水封片鏡檢。5.4.4檢驗(yàn)結(jié)果與判定微生物學(xué)檢驗(yàn)要求無(wú)雜菌。5.5留樣要求各級(jí)菌種要留樣備查，留樣的數(shù)量應(yīng)每個(gè)批號(hào)母種3~5支，原種和栽培種5~7瓶，于4~6℃下貯存，母種150天，原種120天，栽培種180天。6入庫(kù)、記錄、標(biāo)簽、包裝、運(yùn)輸和貯存6.1入庫(kù)與記錄完成培養(yǎng)的菌種及時(shí)登記入庫(kù)。菌種生產(chǎn)各環(huán)節(jié)應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)記錄。6.2標(biāo)簽6.2.1每支(瓶、袋)菌種應(yīng)有清晰注明以下要素的標(biāo)簽：a)產(chǎn)品名稱；b)品種名稱；c)生產(chǎn)單位；d)接種日期；e)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。6.2.2每箱菌種應(yīng)有清晰注明以下要素的包裝標(biāo)簽：a)產(chǎn)品名稱；b)品種名稱；c)廠名、廠址、聯(lián)系電話；d)出廠日期；e)保質(zhì)期、貯存條件；f)數(shù)量；g)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。6.2.3包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志還應(yīng)包括：a)小心輕放標(biāo)志；b)防水、防潮、防凍標(biāo)志；c)防曬、防高溫標(biāo)志；d)防止倒置標(biāo)志；8T/YNZYC0107-2023e)防止重壓標(biāo)志等。6.3包裝6.3.1母種外包裝采用木盒或有足夠強(qiáng)度的紙材制做的紙箱，內(nèi)部用棉花、碎紙、報(bào)紙等具有緩沖作用的輕質(zhì)材料填滿。原種、栽培種外包裝采用有足夠強(qiáng)度的紙材制做的紙箱，菌種間用碎紙、報(bào)紙等具有緩沖作用的輕質(zhì)材料填滿。包裝箱內(nèi)應(yīng)附上使用說(shuō)明。包裝應(yīng)嚴(yán)密、整齊、無(wú)破損。6.3.2產(chǎn)品內(nèi)包裝材料的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合GB4806.1的要求。產(chǎn)品運(yùn)輸用外包裝用瓦楞紙箱應(yīng)符合GB/T6543的規(guī)定，外包裝箱內(nèi)不應(yīng)使用過(guò)度的隔板；包裝應(yīng)封口牢固，確保箱內(nèi)產(chǎn)品不受損傷。產(chǎn)品外包裝箱圖示標(biāo)志應(yīng)符合GB/