TQGCML 4275-2024 肉松食品中單核細胞增生李斯特氏菌的測定

ICS07.100.30CCSC53團 體 標 準T/QGCML4275—2024肉松食品中單核細胞增生李斯特氏菌的測定DeterminationofListeriamonocytogenesinmeatfloppings2024-05-21發(fā)布 2024-06-05實施全國城市工業(yè)品貿(mào)易中心聯(lián)合會??發(fā)布T/QGCML4275T/QGCML4275—2024PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前言 II范圍 1規(guī)范性引用文件 1術語和定義 1設備和材料 1培養(yǎng)基和試劑 1檢驗方法 2操作步驟 2結(jié)果報告 3前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由運城市綜合檢驗檢測中心提出。本文件由全國城市工業(yè)品貿(mào)易中心聯(lián)合會歸口。本文件主要起草人：韓珍珍、竇夢璇、曹本男、王彬、王彪、師娟、薄濤、李宣英。本文件為首次發(fā)布。T/QGCML4275T/QGCML4275—2024PAGEPAGE1肉松食品中單核細胞增生李斯特氏菌的測定范圍本文件規(guī)定了肉松食品中單核細胞增生李斯特氏菌測定的設備和材料、培養(yǎng)基和試劑、檢驗方法、操作步驟和結(jié)果報告。本文件適用于肉松食品中單核細胞增生李斯特氏菌的測定。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB4789.30—2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。設備和材料167除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設備外，其他設備和材料如下：生物安全柜；生化培養(yǎng)箱；均質(zhì)器；顯微鏡帶照相系統(tǒng)，10～100（油鏡）；濁度儀；全自動微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)；單核細胞增生李斯特氏菌（ATCC19114）；金黃色葡萄球菌（ATCC6538）；馬紅球菌（ATCC6939）；英諾克李斯特氏菌（ATCC33090）；伊氏李斯特氏菌（ATCC19119）；斯氏李斯特氏菌（ATCC35967）。培養(yǎng)基和試劑測定過程中使用的培養(yǎng)基和試劑如下：LBLB、L；PALCAM瓊脂；5～8％羊血瓊脂；單核細胞增生李斯特氏菌生化鑒定試劑盒；李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基；GP檢驗方法GB4789.30—2016n=501～52個平行，步驟依次為增菌、分離、初篩、鑒定和計數(shù)。檢測前應對實驗室的環(huán)境及關鍵培養(yǎng)基及菌種進行驗證，確保試驗準確。操作步驟增菌以無菌操作取樣品25g（m）放入含有225mLLB1增菌液的均質(zhì)袋中，在拍擊式均質(zhì)器上連續(xù)1min～2min225mLL28000r/in～10000r/in均質(zhì)1min～2min。于（30±1）℃培養(yǎng)（24±1）h，移取0.1mL，轉(zhuǎn)種于10mLLB2增菌液內(nèi)，于（30±1）℃培養(yǎng)（24±1）h。分離取LB2PACAM361℃24h～48hPALCAM初篩3～5（可以根據(jù)經(jīng)驗排除部分（24±1）h，同時在TSA-YE平板上劃線，于（36±1）℃培養(yǎng)18h～24h，然后選擇木糖陰性、鼠李糖陽性的純培養(yǎng)物繼續(xù)進行鑒定。鑒定溶血試驗20～25（（英諾克李斯特氏菌24h～48h，于明亮處觀察，單核細胞增生李斯特氏菌呈現(xiàn)窄清晰明亮的424h～48h協(xié)同溶血試驗1mm～2mm，同時接種單核細胞增生李斯特氏菌、英諾克李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌和斯氏李斯特氏菌，于（36±1）24h～48h。2mmβ5mm～10mmβ424h～48h再觀察。注：5％～8％的單核細胞增生李斯特氏菌在馬紅球菌一端有溶血增強現(xiàn)象。生化試劑盒及全自動生化鑒定儀鑒定從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取目標菌落，先利用濁度儀制成0.5McF濃度的菌懸液，再用GP鑒定卡參照操作說明進行操作，采用全自動微生物鑒定