(高清版)GBT 40977-2021 家用洗衣機(jī) 降低微生物污染測(cè)試方法

家用洗衣機(jī)降低微生物污染測(cè)試方法國家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)I 1 1 1 1 2 2 25.1試驗(yàn)條件 25.2材料和試劑 2 6 76.1試驗(yàn)原理 7 86.3試驗(yàn)微生物和含菌試驗(yàn)樣塊的準(zhǔn)備 86.4主試驗(yàn) 96.5有效性 7評(píng)價(jià) 7.1對(duì)數(shù)減少值 7.2交叉污染 8試驗(yàn)報(bào)告 附錄A(資料性)內(nèi)部研發(fā)使用危險(xiǎn)等級(jí)1級(jí)的微生物測(cè)試家用洗衣機(jī)中微生物的減少 附錄B(資料性)材料和供應(yīng)商信息 圖A.1系列稀釋液的制備過程 表1胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)成分 3表2沙氏葡萄糖瓊脂(含氯霉素)的成分 3表3溴棕三甲銨瓊脂/溴化十六烷基三甲銨瓊脂的成分 4表4Baird-parker瓊脂的成分 4表5麥芽浸粉瓊脂(MEA)的成分 4 5表7稀釋液的成分 5ⅡGB/T40977—2021表8中和劑的成分 表9溫度傳感器的具體要求 表A.1沙氏葡萄糖瓊脂的成分 Ⅲ本文件修改采用IECPAS62958:2015《家用洗本文件與IECPAS62958:2015的技術(shù)性差異及其原因如下：-—?jiǎng)h除了國際標(biāo)準(zhǔn)第2章中EN1276、EN1650和EN12353三個(gè)規(guī)范性引用文件，因相關(guān)技術(shù)1本文件不涉及安全要求，也不包含IEC60456:2010中要求的洗衣機(jī)相關(guān)性能或者對(duì)織物的影2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不ISO2267表面活性劑洗滌效果的評(píng)價(jià)未污染棉對(duì)照布的制備和使用方法(Surfaceactiveagents—Evaluationofcertaineffectsoflaundering—MethodsofpreparationanduseofunsoiledcottonMethodsformeasuringtheperformance)2N?:試驗(yàn)前2個(gè)陽性對(duì)照微生物數(shù)量的平均值(CFU/塊)N:試驗(yàn)后5個(gè)含菌試驗(yàn)樣塊微生物數(shù)量的平均值(CFU/塊)4要求3所有的培養(yǎng)基和溶液都應(yīng)是微生物用級(jí)別，使用前應(yīng)使用合適的方法進(jìn)行胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)的成分見表1。酪蛋白胨(胰酶消化物)Caseinpeptone(pancreaticdigest)大豆蛋白胨(木瓜酶消化物)Soypeptone(papaicdigest)氯化鈉Sodiumchloride沙氏葡萄糖瓊脂(含氯霉素)的成分見表2。酪蛋白胰酶消化物Pancreaticdiges動(dòng)物組織的胃消化物Pepticdig氯霉素Chloramphenicol溴棕三甲銨瓊脂/溴化十六烷基三甲銨瓊脂的4明膠胰酶水解物Pancreaticdigestofgelat氯化鎂Magnesiumchloride丙三醇Glycerine西曲溴銨Cetrimide5.2.2.1.4Baird-parker瓊脂Baird-parker瓊脂的成分見表4。酪蛋白胨(胰酶消化)Caseinpeptone(pancreaticdigest)酵母膏Yeastextract氯化鋰Lithiumchloride丙酮酸鈉Sodiumpyruvate麥芽浸粉瓊脂(MEA)的成分見表5。麥芽提取物Maltextract大豆蛋白胨(用大豆中的木瓜蛋白酶消化)Soy-peptone,5胰蛋白胨大豆肉湯(TSB)的成分見表6。胰蛋白胨，酵素消化的酪蛋白Tryptone,pancreaticdigesto大豆蛋白胨，木瓜蛋白酶消化的大豆粉Soypeptone,氯化鈉Sodiumchloride磷酸氫二鉀Dipotassiumhygrogenp稀釋液的成分見表7。胰蛋白胨，酵素消化的酪蛋白Tryptone,pancreaticdigesto氯化鈉Sodiumchloride吐溫80Polysorbate80一種宜采用的中和劑的成分見表8。吐溫80Polysorbate80組氨酸L-histidine硫代硫酸鈉Natriumthiosulohate6a)運(yùn)行待測(cè)程序3次。滅菌鍋應(yīng)能對(duì)設(shè)備及相關(guān)用品在121℃~124℃條件下進(jìn)行至少15min或者134℃~137℃條件7離心機(jī)應(yīng)能在使用50mL離心管室溫條件下提供2000g的相對(duì)離心力。基本負(fù)載應(yīng)包含IEC60456:2010中列出的棉質(zhì)基本負(fù)載。預(yù)處理的要求和所需質(zhì)量的負(fù)載含有基本負(fù)載使用次數(shù)應(yīng)不超過80次。不要求符合IEC60456:2010附錄J的要求。理10min,干燥后保存在適宜條件下避免再次污傳感器應(yīng)符合表9中的要求。溫度范圍0℃~100℃≤0.5℃(覆蓋整個(gè)測(cè)量范圍)反應(yīng)時(shí)間TC(10%～90%)——流動(dòng)空氣(2m/s)注：TC(10%～90%)是傳感器達(dá)到其最終值的10%和90%時(shí)所需要的時(shí)間。反應(yīng)TC63%的值。63%的圖是傳感器達(dá)到其最終值63%所需要的時(shí)間。對(duì)于一個(gè)給定的傳感器，TC(10%~90%)和TC63%的值基本上在一個(gè)數(shù)量級(jí)。用水量測(cè)試設(shè)備應(yīng)符合IEC60456:2010中5.5的要求。6試驗(yàn)8如果樣機(jī)沒有上述程序，應(yīng)直接在洗衣機(jī)中加入不少于50L的，溫度不低于90℃的水，運(yùn)行2個(gè)之后應(yīng)運(yùn)行2個(gè)冷水漂洗周期以冷卻洗衣機(jī)。保藏菌種應(yīng)在MEA平板上至少劃線傳代2次，獲得白色念珠菌的工作培養(yǎng)物。如果在某些特定時(shí)間里不能制備二代培養(yǎng)物，且培養(yǎng)物在培養(yǎng)箱里培養(yǎng)時(shí)間沒超過72h,可以用b)使用稀釋液調(diào)整菌懸液濃度在1.5×10?CFU/mL～5.0×10?CFU/mL,通過適當(dāng)?shù)姆绞筋A(yù)估c)為了方便計(jì)數(shù)，試驗(yàn)用菌懸液應(yīng)用稀釋液稀釋至10-?和10-7稀釋度。使用傾注平板法時(shí)，將1mL樣品加入培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)皿中加入融化冷卻至(45±1)℃9如果在某些特定時(shí)間里不能制備二代培養(yǎng)物，假如培養(yǎng)物在培養(yǎng)箱里培養(yǎng)時(shí)間沒超過48h,可以b)使用稀釋液調(diào)整菌懸液濃度在1.5×10?CFU/mL～5.0×10?CFU/mL(見5.2c)為了方便計(jì)算，試驗(yàn)用菌懸液應(yīng)用稀釋液稀釋至10-7和10-?稀釋度。使用傾注平板法時(shí)，將1mL樣品加入培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)皿中加入融化冷卻至(45±1)℃每個(gè)菌種每次試驗(yàn)使用5個(gè)微生物載體。微生物載體應(yīng)在菌懸液中放置20min～30min,然后用鑷子轉(zhuǎn)移至開蓋培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中每個(gè)接種的載體用無菌鑷子分別轉(zhuǎn)移至袋子中，每種微生物的5個(gè)載體應(yīng)放置在5個(gè)棉袋中。每個(gè)測(cè)試程序至少進(jìn)行3次試驗(yàn)?！裨囼?yàn)日期；●用電量；(資料性)本試驗(yàn)方法允許使用危險(xiǎn)等級(jí)1級(jí)的微生物用于預(yù)評(píng)估或者內(nèi)部研發(fā)。雖然本方法采用的危險(xiǎn)等級(jí)1級(jí)的微生物不是病原菌，相關(guān)操作還是需要受過無菌操作專業(yè)培訓(xùn)允許危險(xiǎn)等級(jí)1級(jí)的微生物有少量意外的溢出或者丟棄，但試驗(yàn)室宜將瓊脂平板和緩沖液等高壓A.3材料和試劑●熒光假單胞菌(ATCC17397/DSM50091);●阿爾萊特葡萄球菌(ATCC43957/DSM20672);A.3.3.1胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)酪蛋白胰酶消化物Pancreaticdiges動(dòng)物組織的胃消化物Pepticdig一水合葡萄糖DextrosemonohydrateA.3.3.3沙氏葡萄糖瓊脂(含氯霉素)A.3.3.7哥倫比亞CAN瓊脂的成分哥倫比亞CAN瓊脂的成分見表A.2。表A.2哥倫比亞CAN瓊脂的成分胰酶消化的酪蛋白Pancreaticdigestof胃蛋白酶消化的動(dòng)物組織Pepticdigestofanimaltis酵母富集蛋白胨Yeastentiche脫纖維羊血DefibrinatedsheA.5試驗(yàn)A.5.3.1培養(yǎng)物熒光假單胞菌和阿爾萊特葡萄球菌工作培養(yǎng)物的制備按照6.3.1.3中惡臭假單胞菌和金黃色葡萄每個(gè)菌種每次試驗(yàn)使用5個(gè)微生物載體。微生物載體在菌懸液中放置20min～30min,然后用鑷子轉(zhuǎn)移至開蓋培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中至每個(gè)接種的載體用無菌鑷子分別轉(zhuǎn)移至袋子中，每種微生物的5個(gè)載體應(yīng)放置在5個(gè)棉袋中。菌試驗(yàn)樣塊應(yīng)用無菌鑷子分別轉(zhuǎn)移至5個(gè)棉布袋中。A.5.4主試驗(yàn)為了準(zhǔn)備系列梯度稀釋(圖A.1),需要使用無菌槍頭。1mL含菌試驗(yàn)樣塊懸液加入9mL中和劑釋至V-5,每個(gè)稀釋度中取0.1mL用涂布棒在平板上旋轉(zhuǎn)涂布。細(xì)菌在大豆胰蛋白胨瓊脂(A.3.3.1)釀酒酵母在(30±1)℃條件下，熒光假單胞菌和阿爾萊特葡萄球菌在(36±1)℃條件下培養(yǎng)1d~y0微生物計(jì)數(shù)應(yīng)選擇合適的合適的稀釋度，每個(gè)平板上的菌落總數(shù)在15～300之間的可用于進(jìn)一步A.5.5.1試驗(yàn)前微生物數(shù)量N?樣塊上微生物數(shù)量的計(jì)數(shù)按照6.4.2進(jìn)行。兩個(gè)含菌試驗(yàn)樣塊的算術(shù)平均值(log10CFU/含菌試驗(yàn)樣(±1log10CFU/含菌試驗(yàn)樣塊)的條件下，N。才是有效的。按照A.5.4.2中的方法測(cè)定前面無菌載體上的微生物數(shù)量。不同的微生物在相應(yīng)的選擇性培養(yǎng)基平板計(jì)數(shù)/含菌試驗(yàn)樣塊=(平板1的計(jì)數(shù)+平板2的計(jì)數(shù))/2每種微生物的對(duì)數(shù)減少值=log(N?/N)N——試驗(yàn)后5個(gè)含菌