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作業(yè)52微生物的培育和利用A組基礎(chǔ)達(dá)標(biāo)1.下列有關(guān)生物技術(shù)實(shí)踐試驗(yàn)中滅菌方法的敘述,錯(cuò)誤的是()A.用高壓蒸汽滅菌法對(duì)涂布器進(jìn)行滅菌B.尿素培育基用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾滅菌即可C.含葡萄糖的培育基須在500g/cm2壓力下滅菌30minD.接種環(huán)在運(yùn)用的過(guò)程中常通過(guò)灼燒滅菌(2024浙江金華十校模擬)閱讀下面材料,回答第2、3題。某技術(shù)人員設(shè)計(jì)了青霉素生產(chǎn)菌——產(chǎn)黃青霉菌的誘變育種方案,詳細(xì)包括:①配制中性偏酸的培育基,打算相關(guān)的培育皿、稀釋用水;②進(jìn)行菌種的紫外線誘變;③用接種環(huán)蘸取誘變后的產(chǎn)黃青霉菌孢子懸液在固體培育基上劃線;④放在恒溫培育箱中培育到長(zhǎng)出單菌落;⑤挑取單菌落,接種至勻整分布野生型金黃色葡萄球菌(以葡萄糖為主要碳源)的培育基上進(jìn)行生產(chǎn)青霉素性能的測(cè)定。2.下列對(duì)該方案的敘述,正確的是()A.①中應(yīng)配制中性偏堿的培育基B.③中分別菌種應(yīng)用稀釋涂布平板法C.步驟②③的依次應(yīng)當(dāng)調(diào)換D.⑤中應(yīng)將單菌落接種至含酚紅的培育基上3.下列關(guān)于該方案中無(wú)菌操作的敘述,正確的是()A.①中調(diào)整pH需在滅菌之后進(jìn)行B.試驗(yàn)結(jié)束時(shí)可用紫外線照耀的方法對(duì)④中殘余的培育基徹底滅菌C.⑤過(guò)程培育基中添加的葡萄糖可用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾除菌D.青霉素具有殺菌作用,此發(fā)酵罐不需嚴(yán)格滅菌4.(2024浙江湖州教學(xué)質(zhì)量檢測(cè))利用以尿素為唯一氮源的培育基,可從土壤中分別出能產(chǎn)脲酶的微生物。下列敘述錯(cuò)誤的是()A.需用無(wú)菌水制備和稀釋土壤菌懸液B.培育基中加入酚紅可起到鑒別作用C.尿素溶液用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾除菌D.能在該培育基上生長(zhǎng)的微生物均能產(chǎn)生脲酶5.為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染狀況,某小組同學(xué)進(jìn)行了相關(guān)試驗(yàn),其中包括制備培育基、滅菌、接種、培育及菌落視察計(jì)數(shù)。下列敘述錯(cuò)誤的是()A.LB培育基中的蛋白胨可為細(xì)菌供應(yīng)碳源和氮源B.配制好的培育基,分裝到錐形瓶,放入高壓滅菌鍋滅菌C.培育接種無(wú)菌水的平板作為比照,可檢驗(yàn)培育基的滅菌是否合格D.若試驗(yàn)組平板上出現(xiàn)形態(tài)和顏色不同的菌落,說(shuō)明湖水遭遇嚴(yán)峻污染6.(2024浙江柯橋適應(yīng)性考試)在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中,常常通過(guò)無(wú)菌操作技術(shù)避開(kāi)雜菌的污染。下列有關(guān)無(wú)菌操作技術(shù)的敘述,錯(cuò)誤的是()A.當(dāng)超凈工作臺(tái)處于紫外燈和過(guò)濾風(fēng)打開(kāi)狀態(tài)時(shí),人必需離開(kāi)B.高壓蒸汽滅菌時(shí),只要壓力達(dá)到設(shè)定要求鍋內(nèi)就可達(dá)到相應(yīng)溫度C.密閉空間內(nèi)可接受紫外線照耀消毒,在照耀前可噴灑消毒液D.用乙醇和次氯酸鈉處理過(guò)的外植體需經(jīng)無(wú)菌水清洗后才可用于組織培育7.(2024浙江杭州其次次聯(lián)考)在某病原菌勻整分布的平板上,鋪設(shè)含有不同種抗生素的圓形紙片,用紙片擴(kuò)散法測(cè)定某病原菌對(duì)各種抗生素的敏感性,圖示為培育的結(jié)果(其中抑菌圈是在紙片四周出現(xiàn)的透亮區(qū)域)。下列分析錯(cuò)誤的是()A.有些未形成抑菌圈可能是該病原菌對(duì)該抗生素很敏感B.有些抑菌圈很小可能與該抗生素?cái)U(kuò)散速度太慢有關(guān)C.若抑菌圈內(nèi)出現(xiàn)一個(gè)菌落,則該菌落可能由抗藥性變異菌體形成D.從抑菌圈邊緣挑取病原菌接著培育,連續(xù)選擇幾代后抑菌圈的直徑會(huì)變小B組素能培優(yōu)8.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板是酵母菌計(jì)數(shù)的常用工具,如圖表示一個(gè)計(jì)數(shù)室及顯微鏡下一個(gè)中方格菌體分布狀況。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.每次選取計(jì)數(shù)室四個(gè)角和中心的五個(gè)中格計(jì)數(shù),目的是減小誤差B.須要先蓋蓋玻片再滴加樣液,等酵母菌全部沉降后方可計(jì)數(shù)C.每天的取樣時(shí)間可隨意選擇,但取樣前要搖勻培育液,目的是使酵母菌勻整分布,減小誤差D.若五個(gè)中格酵母菌平均數(shù)為上圖所示,則估算酵母菌的總數(shù)為6×106個(gè)/mL9.(2024浙江6月選考節(jié)選)回答與產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌育種有關(guān)的問(wèn)題。(1)為快速分別產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌,可將土樣用制成懸液,再將含有懸液的三角瓶置于80℃的中保溫一段時(shí)間,其目的是。
(2)為提高篩選效率,可將菌種的過(guò)程與菌種的產(chǎn)酶性能測(cè)定一起進(jìn)行:將上述懸液稀釋后涂布于以淀粉為唯一碳源的固體培育基上培育,接受顯色方法,依據(jù)透亮圈與菌落直徑比值的大小,可粗略估計(jì)出菌株是否產(chǎn)酶及產(chǎn)酶性能。(3)為了獲得高產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌,可利用現(xiàn)有菌種,通過(guò)后再篩選獲得,或利用轉(zhuǎn)基因、等技術(shù)獲得。
10.(2024浙江精誠(chéng)聯(lián)盟一模)為了探究微生物在不同條件下的繁殖速度,微生物的計(jì)數(shù)是發(fā)酵工程中不行或缺的環(huán)節(jié)?;卮鹣铝袉?wèn)題。(1)測(cè)定微生物細(xì)胞數(shù)量的方法許多,通常接受稀釋涂布平板法和顯微鏡計(jì)數(shù)法,前者往往無(wú)法進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定,緣由是;顯微鏡計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)結(jié)果一般比稀釋涂布平板法大,可能的緣由是。
(2)在用顯微鏡進(jìn)行酵母菌細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí),必需將菌液,然后應(yīng)(①蓋專用蓋玻片;②滴加酵母菌懸液。按操作的先后依次填寫序號(hào)),已知血細(xì)胞計(jì)數(shù)板規(guī)格為1mm×1mm×0.1mm,在培育后期對(duì)培育液稀釋100倍后,用顯微鏡視察到其中某方格中酵母菌的分布狀況如圖,若最終幾個(gè)樣方中平均數(shù)與其相同,則培育液中酵母菌的密度為個(gè)/mL。
(3)稀釋涂布平板時(shí),若平板中菌落數(shù)過(guò)少,隨機(jī)誤差增大。要解決這個(gè)問(wèn)題可以從兩方面入手:一是在保證能精確計(jì)數(shù)的前提下降低稀釋度;二是將相同稀釋度下的多組數(shù)值取平均值后再進(jìn)行計(jì)算。除用于計(jì)數(shù),稀釋涂布平板法還能實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)微生物的。
11.(2024浙南聯(lián)盟模擬)蘋果樹腐爛病由真菌感染引起,為了找尋該病的生物防治途徑,探討者擬從土壤中分別篩選出能抑制蘋果樹腐爛病菌生長(zhǎng)的芽孢桿菌,試驗(yàn)流程如下圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。(1)配制培育基時(shí),培育基的滅菌應(yīng)當(dāng)在倒平板(填“之前”或“之后”)。
(2)圖中①過(guò)程取5g土壤加入45mL無(wú)菌水中充分振蕩得到10-1的土壤稀釋液,進(jìn)行系列稀釋后,用法接種到培育基上。在接種過(guò)程中,下列選項(xiàng)無(wú)須用到的是(填序號(hào))。
①酒精燈②涂布器③顯微鏡④接種環(huán)⑤移液器(3)接種后在37℃條件下培育24h,依據(jù)菌落特征鑒別出芽孢桿菌并進(jìn)一步純化。目的菌篩選時(shí),應(yīng)將芽孢桿菌接種于(填“A”或“B”)處,培育3~5天,篩選出抑菌率最高的菌株。
(4)與化學(xué)防治相比,該生物防治方法的優(yōu)點(diǎn)是。(只需答出一點(diǎn))。
答案:1.B應(yīng)接受已在121℃下高壓蒸汽滅菌的、孔徑最小的G6玻璃砂漏斗對(duì)尿素進(jìn)行過(guò)濾除菌,再將尿素添加到已滅菌的培育基中,B項(xiàng)錯(cuò)誤。2.B霉菌相宜在中性偏酸的環(huán)境中成長(zhǎng),A項(xiàng)錯(cuò)誤;該方案的目的是誘變出產(chǎn)黃青霉菌高產(chǎn)菌株,全部的誘變后的菌株都須要測(cè)定,應(yīng)用稀釋涂布平板法獲得全部誘變菌株的單菌落,B項(xiàng)正確;應(yīng)先對(duì)菌種進(jìn)行誘變,再接種培育純化,步驟②③的依次不能調(diào)換,C項(xiàng)錯(cuò)誤;該方案是生產(chǎn)青霉素性能的測(cè)定,不應(yīng)接種至含酚紅的培育基上,D項(xiàng)錯(cuò)誤。3.C①中調(diào)整pH時(shí)可能會(huì)帶入雜菌,應(yīng)在滅菌之前進(jìn)行,A項(xiàng)錯(cuò)誤;紫外線照耀只能消毒,殺死部分微生物,不能對(duì)④中殘余的培育基徹底滅菌,B項(xiàng)錯(cuò)誤;葡萄糖在115℃以上會(huì)焦化,可接受已在121℃下高壓蒸汽滅菌的、孔徑最小的G6玻璃砂漏斗對(duì)葡萄糖進(jìn)行過(guò)濾除菌后,再在超凈工作臺(tái)內(nèi)添加到培育基中,C項(xiàng)正確;青霉素具有殺菌作用,但不能殺死全部的微生物,所以發(fā)酵罐需嚴(yán)格滅菌,D項(xiàng)錯(cuò)誤。4.D需用無(wú)菌水制備和稀釋土壤菌懸液,避開(kāi)雜菌污染,A項(xiàng)正確;由于尿素被分解后產(chǎn)生氨會(huì)使培育基的pH上升,因此培育基中加入酚紅可起到鑒別作用,會(huì)顯紅色,B項(xiàng)正確;尿素溶液需用到高壓蒸汽滅菌的G6玻璃砂漏斗過(guò)濾,用其過(guò)濾的緣由是其孔徑小、細(xì)菌不能通過(guò),便于除菌,C項(xiàng)正確;能在該培育基上生長(zhǎng)的微生物不愿定能產(chǎn)生脲酶,比如能夠利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈吹奈⑸镆部梢栽谏厦嫔L(zhǎng),D項(xiàng)錯(cuò)誤。5.DLB培育基中的蛋白胨來(lái)源于動(dòng)、植物蛋白,含有糖類、維生素和有機(jī)氮化合物等養(yǎng)分物質(zhì),可為細(xì)菌供應(yīng)碳源和氮源,A項(xiàng)正確;配制好的培育基,應(yīng)分裝到錐形瓶,塞好棉塞,用牛皮紙將瓶口包袱好,放入高壓滅菌鍋滅菌,B項(xiàng)正確;培育接種無(wú)菌水的平板作為比照,可檢驗(yàn)培育基滅菌是否合格,C項(xiàng)正確;若試驗(yàn)組平板上出現(xiàn)形態(tài)和顏色不同的菌落,說(shuō)明湖水中含有多種微生物,并不能說(shuō)明湖水遭遇嚴(yán)峻污染,D項(xiàng)錯(cuò)誤。6.B當(dāng)超凈工作臺(tái)處于紫外燈和過(guò)濾風(fēng)打開(kāi)狀態(tài)時(shí),人必需離開(kāi),以免造成損害,A項(xiàng)正確。運(yùn)用高壓蒸汽滅菌鍋對(duì)培育基進(jìn)行滅菌時(shí),須要將滅菌鍋內(nèi)的冷空氣排盡后,才能關(guān)閉排氣閥,以保證鍋中的高壓只來(lái)自水蒸氣,從而能隨著加熱的進(jìn)行將壓力達(dá)到設(shè)定要求;若未將鍋內(nèi)冷空氣排盡,則會(huì)出現(xiàn)鍋內(nèi)壓力達(dá)到要求,而溫度并沒(méi)有達(dá)到相應(yīng)要求的現(xiàn)象,B項(xiàng)錯(cuò)誤。紫外線能破壞DNA結(jié)構(gòu),照耀前適量噴灑消毒液,可強(qiáng)化消毒效果,C項(xiàng)正確。用乙醇和次氯酸鈉處理過(guò)的外植體需經(jīng)無(wú)菌水多次沖洗后才可用于組織培育,D項(xiàng)正確。7.A未出現(xiàn)抑菌圈的可能緣由是該病原菌對(duì)該抗生素不敏感,A項(xiàng)錯(cuò)誤;不同的抑菌藥物的抑菌圈直徑,因受藥物在瓊脂中擴(kuò)散速度的影響而可能不同,故抗生素在平板上的擴(kuò)散速度太慢可能會(huì)導(dǎo)致抑菌圈很小,B項(xiàng)正確;部分抑菌圈內(nèi)出現(xiàn)零散細(xì)小的菌落,說(shuō)明這些菌落對(duì)該抗生素具有抗性,可能是菌株出現(xiàn)了抗藥性突變,C項(xiàng)正確;從抑菌圈邊緣的菌落上挑取病原菌接著培育,連續(xù)選擇幾代后,菌體對(duì)抗生素的抗性越來(lái)越強(qiáng),因而抑菌圈會(huì)變小,D項(xiàng)正確。8.C每次選取計(jì)數(shù)室四個(gè)角和中心的五個(gè)中格計(jì)數(shù),目的是取樣計(jì)數(shù)并求平均值,以減小誤差,A項(xiàng)正確;制片時(shí),應(yīng)先將蓋玻片蓋上,再將培育液滴在計(jì)數(shù)板的一側(cè),等酵母菌全部沉降后方可計(jì)數(shù),B項(xiàng)正確;每天計(jì)數(shù)酵母菌數(shù)量的時(shí)間要固定,防止由于取樣時(shí)間不同造成試驗(yàn)誤差,C項(xiàng)錯(cuò)誤;在計(jì)數(shù)時(shí),計(jì)數(shù)原則為“計(jì)上不計(jì)下,計(jì)左不計(jì)右”,題圖所示的中方格中酵母菌數(shù)量為24個(gè),則1mL培育液中酵母菌的總數(shù)為24÷16×400×104=6×106(個(gè)),D項(xiàng)正確。9.答案(1)無(wú)菌水水浴殺死不耐熱微生物(2)分別KI-I2(3)人工誘變?cè)|(zhì)體融合解析(1)分別產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌時(shí),需用液體培育基擴(kuò)大培育,可將土樣用無(wú)菌水制成懸液,在80℃的水浴中保溫一段時(shí)間,其目的是殺死不耐熱微生物。(2)為提高篩選效率,可將菌種的分別過(guò)程與菌種的產(chǎn)酶性能測(cè)定一起進(jìn)行:將上述懸液稀釋后涂布于以淀粉為唯一碳源的固體培育基上培育,接受KI-I2顯色方法,依據(jù)透亮圈與菌落直徑比值的大小,可粗略估計(jì)出菌株是否產(chǎn)酶及產(chǎn)酶性能。(3)利用現(xiàn)有菌種,通過(guò)人工誘變后再篩選,或利用轉(zhuǎn)基因、原生質(zhì)體融合等技術(shù)均可獲得高產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌。10.答案(1)動(dòng)物細(xì)胞無(wú)法在固體平板培育基中正常生長(zhǎng)顯微鏡計(jì)數(shù)中包含死亡菌體;稀釋涂布平板時(shí)當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌體連在一起時(shí),平板上視察到的只是一個(gè)菌落;涂布操作可能會(huì)造成細(xì)胞死亡;涂布器可能帶走小部分菌體(2)搖勻①②6×108(3)分別和純化解析(1)由于動(dòng)物細(xì)胞無(wú)法在固體平板培育基中正常生長(zhǎng),故接受稀釋涂布平板法無(wú)法進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定。顯微鏡計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)結(jié)果一般比稀釋涂布平板法大,因?yàn)轱@微鏡計(jì)數(shù)中包含死亡菌體,稀釋涂布平板時(shí)當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌體連在一起時(shí),平板上視察到的只是一個(gè)菌落,涂布操作可能會(huì)造成細(xì)胞死亡,涂布器可能帶走小部分菌體。(2)在用顯微鏡進(jìn)行酵母菌細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí),必需將菌液搖勻,然后蓋專用蓋玻片,再滴加酵母菌懸液。據(jù)題意可知,該血球計(jì)數(shù)板的規(guī)格為1mm×1mm×0.1mm、25×16,即一個(gè)大方格含有25個(gè)中方格,據(jù)圖可知,一個(gè)中方格酵母菌數(shù)量為24個(gè),因此一個(gè)大方格酵母菌數(shù)量為24×25=600(個(gè)),一個(gè)大方格內(nèi)的細(xì)胞懸液體積是10-4mL,培育液稀釋倍數(shù)為100倍,因此培育液中酵母菌的密度為600×104×102=6×108(個(gè)/mL)。(3)除用于計(jì)數(shù),稀釋涂布平板法還能實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)微生物的分別和純化。11.答案(1)之前(2)稀釋涂布平板③④(3)B(4)降低環(huán)境污染;削減化學(xué)試劑的殘留;對(duì)其他動(dòng)物干擾小(任答其中一點(diǎn),其他合理答案也可)解析(1)配制培育基的基本過(guò)程為計(jì)算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板,故在配制培育基時(shí),培育基的滅菌應(yīng)當(dāng)在倒平板之前。(2)圖中①過(guò)程取5g土壤加入45mL無(wú)菌
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