臨床病原學(xué)檢查專家講座

臨床病原學(xué)檢驗臨床病原學(xué)檢查第1頁不一樣病原體(細(xì)菌、螺旋體、支原體、放線菌、衣原體、立克次體、病毒、真菌、原蟲、蠕蟲)所致感染性疾病試驗診療方法各有其特點，但幾乎都遵照以下基本標(biāo)準(zhǔn)：①正確、規(guī)范采集和運輸標(biāo)本；②經(jīng)過直接顯微鏡查見病原體或檢出病原體抗原成份；③借助分子生物學(xué)方法檢測病原體核酸；④利用免疫學(xué)方法檢測機體對病原體抗原成份產(chǎn)生免疫產(chǎn)物；⑤對病原體進(jìn)行分離與判定。在完成病原體檢出和判定任務(wù)后，結(jié)合病人病史、癥狀或體征，快速作出診療。并主動參加臨床選擇抗微生物藥品，指導(dǎo)和監(jiān)控微生物治療方案，防止耐藥菌株產(chǎn)生。臨床病原學(xué)檢查第2頁標(biāo)本采集和運輸：依據(jù)各種病原體所致感染性疾病病程確定標(biāo)本采集時間、部位和種類。全部采集標(biāo)本均置于無菌或清潔容器中，不能接觸消毒劑和抗菌藥品。標(biāo)本必須注明姓名、年紀(jì)、性別、采集日期、臨床診療、檢驗項目等。標(biāo)本采集后應(yīng)按要求處理，馬上送往病原學(xué)試驗室，對于烈性傳染病材料運輸需專員護(hù)送。臨床病原學(xué)檢查第3頁(一)血液標(biāo)本疑為菌血癥、敗血癥和膿毒血癥患者，普通在發(fā)燒早期和高峰期采集，如已用抗菌藥品治療者，則在下次用藥前采集。采樣以無菌法由肘靜脈穿刺，成人每次10-20ml，嬰兒和兒童為1-2ml，血液置于盛有抗凝劑聚茴香腦磺酸鈉無菌瓶中送檢。大多數(shù)菌血癥呈周期性，故血標(biāo)本也需在24h內(nèi)周期性搜集，普通24h內(nèi)搜集2-3次血標(biāo)本分別培養(yǎng)。臨床病原學(xué)檢查第4頁(二)腦脊液與其它無菌體液標(biāo)本無菌采集腦脊液，腦脊液通常離心10000×glOmin，取沉淀作顯微鏡檢驗。引發(fā)腦膜炎病原體腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等其抵抗力弱，不耐冷、輕易死亡，故采集腦脊液應(yīng)馬上保溫送檢或床邊接種。胸水、腹水和心包液等因標(biāo)本含菌量少宜采集較大量標(biāo)本送檢以確保檢出Tc臨床病原學(xué)檢查第5頁(三)尿液標(biāo)本外尿道借居有正常菌群，故采集尿液時更應(yīng)注意無菌操作，慣用清潔中段尿作為送檢標(biāo)本。對于厭氧菌培養(yǎng)，采取膀胱穿刺法搜集、無菌厭氧小瓶運輸。排尿困難者可導(dǎo)尿，但應(yīng)防止屢次導(dǎo)尿所致尿路感染。臨床病原學(xué)檢查第6頁(四)呼吸道標(biāo)本鼻咽拭子、痰、經(jīng)過氣管搜集標(biāo)本均可作為呼吸道標(biāo)本。后者可防止正常菌群污染，為下呼吸道感染病原學(xué)診療理想標(biāo)本。鼻咽拭子和鼻咽洗液可供鼻病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎衣原體、溶血性鏈球菌等病原學(xué)診療。不合格痰標(biāo)本(扁平上皮細(xì)胞≥25個／低倍鏡視野)富含上呼吸道正常菌群，在病原學(xué)診療時需加以注意。臨床病原學(xué)檢查第7頁(五)糞便標(biāo)本取含膿、血或粘液糞便置于清潔容器中送檢排便困難者或嬰幼兒可用直腸拭子采集。依據(jù)細(xì)菌種類不一樣選取適當(dāng)運輸培養(yǎng)液以提升陽性檢出率，如副溶血弧菌引發(fā)腹瀉糞便應(yīng)置于堿性蛋白胨水或卡一布運輸培養(yǎng)液。一次糞便培養(yǎng)陰性不能完全排除胃腸道病原菌存在，對于傳染性腹瀉患者需三次送檢糞便進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。對疑為寄生蟲感染者，應(yīng)盡快運輸水樣便，以保持原蟲滋養(yǎng)體活力；若不及時送檢，糞便標(biāo)本置于含10％甲醛和聚乙烯醇小螺口塑料容器內(nèi)保留。臨床病原學(xué)檢查第8頁(六)泌尿生殖道標(biāo)本依據(jù)不一樣疾病特征及檢驗?zāi)繕?biāo)采集不一樣標(biāo)本，如性傳輸性疾病常取尿道口分泌物、外陰糜爛面病灶邊緣分泌物、陰道宮頸口分泌物和前列腺液等。對生殖道皰疹常穿刺皰疹液，盆腔膿腫者則于直腸子宮陷凹處穿刺膿液。懷疑衣原體感染標(biāo)本不應(yīng)使用木柄拭子，因為木質(zhì)對該病原體有毒性作用。除淋病奈瑟菌保溫送檢外，全部標(biāo)本搜集后40℃保留直至培養(yǎng)。臨床病原學(xué)檢查第9頁(七)創(chuàng)傷、組織和膿腫標(biāo)本對損傷范圍較大創(chuàng)傷,應(yīng)從不一樣部位采集多份標(biāo)本。采集部位應(yīng)首先去除污物,以碘酒,酒精消毒皮膚,預(yù)防表面污染菌混入標(biāo)本影響檢測結(jié)果。開放性膿腫采集,用無菌棉拭采取膿液及病灶深部分泌物。封閉性膿腫,則以無菌干燥注射器穿刺抽取;疑為厭氧菌感染者,取膿液后馬上排凈注射器內(nèi)空氣，針頭插入無菌橡皮塞送檢,不然標(biāo)本接觸空氣造成厭氧菌死亡而降低臨床分離率。用于病毒檢測組織標(biāo)本宜放在有滅菌鹽水紗布培養(yǎng)皿內(nèi)或病毒運輸培養(yǎng)基內(nèi)運輸,用勻漿管勻漿、離心、過濾后,作病毒分離判定。臨床病原學(xué)檢查第10頁(八)血清標(biāo)本用于檢測患者特異性抗體效價以輔助診療感染性疾病。采集血液置無菌試管中，自然凝固、血塊收縮后吸收血清，56℃加熱30min以滅活補體成份。滅活血清保留于－20℃。臨床病原學(xué)檢查第11頁檢測方法由試驗技術(shù)直接或間接取得病原體及病原體結(jié)組成份，是確診感染性疾病一個主要依據(jù)。臨床試驗室中細(xì)菌性疾病以培養(yǎng)分離技術(shù)為主，病毒性疾病以免疫學(xué)方法為主。臨床病原學(xué)檢查第12頁(一)直接顯微鏡檢驗標(biāo)本直接涂片、干燥、固定后染色，或經(jīng)離心濃縮集菌，涂片染色，置光學(xué)顯微鏡下觀察病原體形態(tài)、染色性或觀察宿主細(xì)胞內(nèi)包涵體特征。另一個方法是采取懸滴法或壓滴法，在不染色狀態(tài)下借助暗視野顯微鏡或相差顯微鏡觀察病原體生長、運動方式、螺旋體形態(tài)和運動。濕式涂片有利于寄生蟲蟲卵檢驗。直接鏡檢結(jié)果對病原學(xué)診療含有一定意義，尤其是無菌體液直接鏡檢更含有診療價值，如腦脊液涂片中查見革蘭染色陰性腎形雙球菌，結(jié)合患者發(fā)燒、噴射狀嘔吐、猛烈頭痛和腦膜刺激體征，可作出流行性腦脊髓膜炎診療。臨床病原學(xué)檢查第13頁那些有正常菌群借居腔道分泌物，涂片鏡檢雖不能確定診療，但對深入檢出步驟、采取方法和分離判定病原體所需培養(yǎng)基有主要提醒作用，如在米泔水樣便懸滴片動力檢驗，發(fā)覺有運動活潑魚群樣弧菌，常提醒弧菌科細(xì)菌感染，可深入用堿性蛋白胨水增菌，分離接種于硫代硫酸鹽一檸檬酸鹽一膽汁一蔗糖(thiosulfatecitrate-bilesalts-sucrose，TCBS)選擇培養(yǎng)基。組織標(biāo)本和皰疹分泌物涂片經(jīng)瑞特染色后，查見多核巨細(xì)胞和核內(nèi)嗜酸性包涵體可早期診療皰疹病毒感染。臨床上不常規(guī)應(yīng)用電鏡檢驗，但對一些病毒感染有確診價值，如嬰幼兒急性胃腸炎腹瀉糞便電鏡下查見車輪狀雙層衣殼病毒顆粒即可診療為輪狀病毒感染。慣用電鏡技術(shù)有超薄切片標(biāo)本電鏡觀察、負(fù)染標(biāo)本電鏡觀察和免疫電鏡技術(shù)。臨床病原學(xué)檢查第14頁(二)病原體分離、培養(yǎng)和判定分離培養(yǎng)是病原學(xué)檢驗中確診關(guān)鍵步驟，分離出病原體后，才能深入判定病原體和作藥敏試驗。分離培養(yǎng)細(xì)菌，應(yīng)依據(jù)可疑菌生長培養(yǎng)特征，選擇適當(dāng)培養(yǎng)基，提供適當(dāng)氣體條件、溫度和pH，使細(xì)菌在體外人工培養(yǎng)基中得以生長、繁殖形成菌落。依據(jù)菌落性狀(大小、色澤、氣味、邊緣、光滑度、色素、溶血情況等)和細(xì)菌形態(tài)、染色性，檢測細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果和血清學(xué)試驗，可對分離菌作出判定。為了盡快地對分離菌作出檢驗結(jié)論，應(yīng)選擇可靠而適用特征作為判定指標(biāo)，同時也可借助于微量判定系統(tǒng)，快速簡便判定分離菌。臨床病原學(xué)檢查第15頁對于不能人工培養(yǎng)病原體，如病毒、立克次體、衣原體，可將標(biāo)本接種易感動物、雞胚或行細(xì)胞培養(yǎng)，進(jìn)行病原體分離。接種動物后，可依據(jù)動物感染范圍、動物發(fā)病情況及潛伏期，初步推測為某種病原體。接種于雞胚病毒，依據(jù)不一樣接種路徑敏感性及所形成特殊病灶，有利于初步判定。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)病毒，因病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖后，可引發(fā)細(xì)胞病變或紅細(xì)胞吸附、干擾現(xiàn)象、血凝性質(zhì)等特征以縮小病毒判定范圍，最終用血清學(xué)方法作最終判定。臨床病原學(xué)檢查第16頁(三)病原體抗原檢測用已知抗體，借助免疫熒光技術(shù)、酶免疫技術(shù)、化學(xué)發(fā)光技術(shù)、膠乳凝集試驗等技術(shù)檢測標(biāo)本中未知病原體抗原即為病原體抗原檢測。病原體抗原有細(xì)菌菌體抗原、鞭毛抗原、毒素、侵襲性酶、病毒衣殼蛋白、包膜抗原等。病原體抗原成份檢測有利于早期診療感染性疾病，陽性結(jié)果提醒某種感染性病原體存在，但對那些存在正常菌群標(biāo)本，需考慮共同抗原引發(fā)交叉反應(yīng)，必須在有嚴(yán)格對照試驗和排除試驗時，對陽性結(jié)果才能作出正確判斷。臨床病原學(xué)檢查第17頁抗原檢驗診療價值常隨不一樣標(biāo)本各異。若在無菌體液、血液等標(biāo)本中，檢測出特異性病原體抗原，有診療價值，如腦脊液中查到腦膜炎奈瑟菌抗原可診療為流行性腦脊髓膜炎；若在宮頸拭子或男性尿道拭子檢出淋病奈瑟菌或沙眼衣原體抗原有診療意義，因為這些標(biāo)本中沒有或極少有其它微生物存在；若在肛拭中檢出病原體抗原，則因肛拭中存在有各種微生物，可因交叉抗原存在而不能必定診療。使用特異性好、效價高單克隆抗體尤為主要，在有嚴(yán)格對照和排除試驗時，選擇和制備完好細(xì)胞標(biāo)本，檢測只能在活細(xì)胞內(nèi)增殖病毒或立克次體、衣原體，陽性結(jié)果可作出準(zhǔn)確病原學(xué)診療。臨床病原學(xué)檢查第18頁(四)病原體核酸檢測核酸檢測技術(shù)主要有聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和DNA探針雜交技術(shù)。PCR是將待檢標(biāo)本經(jīng)細(xì)胞裂解液裂解后，在加有引物、四種三磷酸核苷、TaqDNA聚合酶和含Mg，、緩沖體系中，經(jīng)變性、退火、延伸三個不一樣反應(yīng)溫度進(jìn)行屢次循環(huán)，再將擴增DNA產(chǎn)物經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳染色法、Southern印跡法、酶譜分析法和序列分析法四種方法之一，檢測出病原體核酸。PCR只需在簡便條件下，在短短數(shù)小時內(nèi)可將病原體基因或DNA片段特異地擴增幾十萬倍。臨床病原學(xué)檢查第19頁它已廣泛應(yīng)用于感染性疾病試驗室診療尤其是那些不易分離培養(yǎng)病原體。因為PCR含有很高敏感性，試驗影響原因很多，不適當(dāng)標(biāo)本處理，外源性和內(nèi)源性蛋白酶、核酸酶、DNA多聚酶抑制劑等均可造成假陰性反應(yīng)。反應(yīng)體系中極微量待測DNA序列污染均可產(chǎn)生假陽性結(jié)果，故操作者必須制訂嚴(yán)格工作程序預(yù)防污染發(fā)生，并設(shè)置陰性對照。臨床病原學(xué)檢查第20頁將放射性核素或非放射性物質(zhì)標(biāo)識已知序列核酸單鏈探針和固定在固相載體上標(biāo)本中病原體核酸退火形成雙鏈雜交體，經(jīng)過雜交標(biāo)識物檢測，判定標(biāo)本中對應(yīng)病原體基因，此為核酸雜交法。雜交方法以固相法為多，其技術(shù)有斑點雜交、Southen印跡法、原位雜交法和Northen印跡法等。雜交信號檢測慣用顯色法、放射自顯影、放射性核素脈沖數(shù)測量和發(fā)光法。核酸雜交法適合用于當(dāng)前尚不能分離培養(yǎng)或極難分離培養(yǎng)微生物檢測。臨床病原學(xué)檢查第21頁(五)病原體抗體檢測是指用已知病原體抗原檢測患者血清中對應(yīng)抗體方法診療感染性疾病。慣用方法有凝集試驗、沉淀試驗、補體結(jié)合試驗、間接免疫熒光技術(shù)、放射免疫測定、酶聯(lián)免疫吸附試驗等。大多數(shù)抗體檢測試驗中，所用抗原為病原體特異性抗原(整個病原體、病原體成份或產(chǎn)物)，有一部分抗體檢驗使用病原體共同抗原，如診療梅毒病使用牛心提取類脂抗原，這類試驗為非特異性試驗。臨床病原學(xué)檢查第22頁抗體檢測價值慣用敏感性、特異性和預(yù)測值來評價。臨床醫(yī)生必須依據(jù)其目標(biāo)要求到達(dá)確診某一疾病、排除某一疾病或監(jiān)測疾病治療效果。理論上所希望一個高度敏感造成高陰性預(yù)測值和高度特異造成高陽性預(yù)測值試驗并不存在，實踐中常依據(jù)診療兩個基本目標(biāo)，權(quán)衡敏感性和特異性選擇試驗項目。當(dāng)目標(biāo)為排除某一疾病時，即選擇高敏感度、高陰性預(yù)測值試驗；當(dāng)目標(biāo)為確診某一疾病時，即選擇高特異度、高陽性預(yù)測值試驗。臨床病原學(xué)檢查第23頁細(xì)菌感染檢驗細(xì)菌感染檢驗一、檢驗特點各種細(xì)菌都有一定形態(tài)、染色特征、生化反應(yīng)和抗原結(jié)構(gòu)。經(jīng)過對標(biāo)本直接顯微鏡檢驗、病原菌分離培養(yǎng)判定、病原菌抗原檢測、核酸檢測和細(xì)菌感染后機體免疫應(yīng)答產(chǎn)物測定及藥品敏感性試驗，對細(xì)菌感染性疾病可作出及時、準(zhǔn)確病原學(xué)診療。在檢驗項目中，尤以細(xì)菌分離培養(yǎng)判定為主，在無菌標(biāo)本中檢驗到細(xì)菌則此細(xì)菌為感染病原，如血液中檢驗到細(xì)菌，診療為敗血癥；腦脊液中查到細(xì)菌即為細(xì)菌性腦膜炎。存在有正常菌群標(biāo)本中檢驗到細(xì)菌，應(yīng)區(qū)分是正常借居菌群或是致病細(xì)菌，常需作細(xì)菌定量計數(shù)，依據(jù)細(xì)菌數(shù)判斷是否為感染病原菌，如尿液中分離到革蘭陰性桿菌，若定量在10‘／mlcfu菌落形成單位菌數(shù)以上，則為尿路感染。臨床病原學(xué)檢查第24頁臨床病原學(xué)檢查第25頁檢測項目

染色標(biāo)本顯微鏡檢測1．革蘭染色革蘭染色(Gramstain)和顯微鏡檢驗(microscopicexamination)是細(xì)菌感染快速診療簡單方法，用于各種滲出液、抽出液、尿液、腦脊液和血液細(xì)菌檢驗。2?？顾崛旧顾崛旧?fast-acidstain)適合用于痰標(biāo)本分枝桿菌檢驗，對診療結(jié)核病含有主要意義。不染色標(biāo)本顯微鏡檢測l。濕片懸滴法檢測(examinationofwetmount)借助暗視野顯微鏡或相差顯微鏡觀察標(biāo)本中病原菌生長和運動方式，有利于疾病病原體診療。2。濕片細(xì)菌計數(shù)濕片高倍視野鏡檢尿液，若每高倍視野發(fā)覺1個或1個以上細(xì)菌有診療其為尿路感染病原菌。臨床病原學(xué)檢查第26頁分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)(isolationandculture)是細(xì)菌學(xué)檢驗關(guān)鍵，其目標(biāo)是從臨床標(biāo)本中找出活細(xì)菌，深入進(jìn)行判定，確定其致病性和耐藥性，指導(dǎo)抗菌治療和預(yù)測治療效果。不一樣細(xì)菌培養(yǎng)所需條件及生長特征各異，所以必須依據(jù)臨床要求、送檢標(biāo)本性質(zhì)和培養(yǎng)目標(biāo)，選取不一樣培養(yǎng)基，不一樣接種方法和培養(yǎng)條件。臨床病原學(xué)檢查第27頁

判定技術(shù)判定(identification)是指對標(biāo)本中分離細(xì)菌按分類標(biāo)準(zhǔn)放入某系統(tǒng)適當(dāng)位置，是細(xì)菌分類試驗過程。細(xì)菌判定技術(shù)有生化判定(biochemicalidenti-fication)、血清學(xué)判定(serologicidentification)、在常量生化判定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展而來數(shù)碼判定(numeralidentification)和自動化儀器判定(automatedidentification)。核酸檢測PCR技術(shù)適合用于細(xì)菌感染診療，尤其是人工培養(yǎng)基不能生長細(xì)菌和營養(yǎng)要求高不易培養(yǎng)細(xì)菌，如麻風(fēng)桿菌、幽門螺桿菌、嗜肺軍團菌。對生長遲緩細(xì)菌(結(jié)核分枝桿菌)或一個臨床癥狀內(nèi)各種細(xì)菌感染診療也可采取PCR方法。臨床病原學(xué)檢查第28頁抗體檢測抗體檢驗適合用于經(jīng)抗生素治療后或慢性細(xì)菌性感染，因為此時病原體分離培養(yǎng)常為陰性，可用抗體檢測診療感染。因為感染后抗體反應(yīng)相當(dāng)復(fù)雜，所以抗體檢驗結(jié)果需考慮其特異性和敏感性。一次性較高效價抗體并不能完全說明問題，應(yīng)同時檢測雙份血清(1份為急性期，1份為1周或數(shù)周后恢復(fù)期)，效價4倍增加，說明曾有感染。所以，血清學(xué)診療更應(yīng)用于流行病學(xué)調(diào)查。利用血清學(xué)方法診療細(xì)菌感染有肥達(dá)反應(yīng)、抗鏈球菌溶血素“0”試驗、檢驗兔熱病和波浪熱凝集反應(yīng)、檢驗軍團菌病熒光抗體試驗等。臨床病原學(xué)檢查第29頁細(xì)菌毒素檢測1．外毒素(exotoxin)檢測有生物學(xué)法、免疫血清學(xué)法和PCR法及自動化儀器檢測法。2。內(nèi)毒素(endotoxin)檢測革蘭陰性菌極小量內(nèi)毒素(1ipopolysaCCharidC，LPS)可引發(fā)廣泛生物學(xué)作用，所以對LPS檢測有利于判定細(xì)菌感染嚴(yán)重程度，及早預(yù)防和發(fā)覺內(nèi)毒素休克發(fā)生。臨床病原學(xué)檢查第30頁細(xì)菌感染檢驗項目標(biāo)選擇和應(yīng)用顯微鏡檢驗、分離培養(yǎng)、血清學(xué)試驗、生化判定和PCR等核酸檢測是細(xì)菌感染診療基本方法，①無菌性標(biāo)本(血液、腦脊液、體腔滲出液)，采取顯微鏡檢驗和直接藥敏試驗可作出病原學(xué)診療和提供用藥指導(dǎo)；②膿血便，革蘭染色無診療意義，需用標(biāo)識抗體染色鏡檢獲初步匯報，再經(jīng)選擇培養(yǎng)基分離培養(yǎng)，挑取可疑菌落作玻片血清凝集，陽性者可初步判定，配套生化反應(yīng)可作出最終匯報；③尿液標(biāo)本，顯微鏡檢驗可初步預(yù)計細(xì)菌菌量，作出初步診療，再經(jīng)分離培養(yǎng)判定后和菌落定量計數(shù)可作出病原學(xué)診療；④痰標(biāo)本，采取顯微鏡檢驗，判定是否為合格標(biāo)本，經(jīng)過接種培養(yǎng)，檢出致病性菌落，再進(jìn)行判定和藥敏；⑤對臨床指征明確，只為取得病原學(xué)證實細(xì)菌，常采取對某一個細(xì)菌檢驗程序。臨床病原學(xué)檢查第31頁病毒感染檢驗

臨床病原學(xué)檢查第32頁真菌感染檢驗

臨床病原學(xué)檢查第33頁臨床病原學(xué)檢查第34頁真菌抗體檢測

1.曲霉菌免疫擴散試驗(immunodiffusionofAspergillosiss)血清學(xué)檢測陽性者其培養(yǎng)結(jié)果陽性可考慮給予臨床確診。2.芽生菌病血清學(xué)試驗(serologictestofBlastomycosis)包含有補體結(jié)合試驗、免疫擴散試驗和酶免疫試驗。3．念珠菌病血清學(xué)試驗(serologictestofCandidiasis)至今抗體檢測無臨床診療價值。4．球孢子菌病補體結(jié)合試驗：含有臨床診療價值。對有癥狀患者而其雙份血清抗體效價4倍增加或效價≥1：16可作出診療。5．隱球菌病血清學(xué)試驗(serologictestofCryptococcosis)抗體檢測無臨床意義。利用膠乳凝集試驗檢測腦脊液中隱球菌多糖抗原含有診療隱球菌性腦膜炎價值。6．組織胞漿病血清學(xué)檢測(serologictestofHistoplamosis)補體結(jié)合試驗單份血清抗體效價高于1：32或雙份血清效價4倍增加可作現(xiàn)期感染診療。7．孢子絲菌病膠乳凝集試驗(1atexagglutinationofSportrichosis)抗體效價高于1：80有診療價值。臨床病原學(xué)檢查第35頁真菌感染檢驗項目標(biāo)選擇和應(yīng)用直接顯微鏡檢驗是診療淺部真菌感染主要伎倆，經(jīng)過涂片鏡檢驗找菌絲和孢子可作出真菌感染診療，再經(jīng)培養(yǎng)、菌落性狀觀察，鏡下孢子和菌絲形態(tài)特點，可作出對菌種判定。深部真菌感染常取標(biāo)本作培養(yǎng)，在觀察培養(yǎng)物性狀后，需借助理化特征作出菌種判別。血清學(xué)方法對深部真菌感染及二相型真菌感染含有一定診療價值，依各種不一樣血清學(xué)方法對不一樣真菌有不一樣診療價值。分子生物學(xué)技術(shù)是近年來發(fā)展技術(shù)，當(dāng)前較為成熟rDNA探針已經(jīng)有試劑盒應(yīng)用于診療。臨床病原學(xué)檢查第36頁寄生蟲感染檢驗檢測項目(一)顯微鏡檢驗1。糞便檢驗①新鮮糞便生理鹽水涂片檢驗滋養(yǎng)體或包囊，依據(jù)滋養(yǎng)體和包囊形態(tài)特點，可診療腸道阿米巴病、賈第蟲病，查找?guī)Ы{蟲蟲卵及孕節(jié)可作出帶絳蟲病診療；②糞便抗酸染色檢驗隱孢子蟲卵以診療隱孢子病，同時也可作金胺“?！比旧S便涂片、熒光顯微鏡檢驗，可作為隱孢子蟲病篩選；③糞便重力沉淀法檢驗蟲卵或孵化法檢驗毛蚴可有利于血吸蟲病診療；④糞便濕片法查找蟲卵是診療腸道蠕蟲感染可靠方法，包含對蛔蟲病、鞭蟲病、類圓線蟲病和鉤蟲病。2．十二指腸引流液檢驗對糞便陰性者，可取十二指腸引流液直接鏡檢或離心濃集后鏡檢，其陽性率較高，可用于賈第蟲病、阿米巴病、梨形蟲病及隱孢子病檢驗。臨床病原學(xué)檢查第37頁3．血液涂片檢驗分血薄片和厚片檢驗，血液涂片檢驗是確診瘧疾唯一依據(jù)，傳統(tǒng)上用薄厚同時涂片方法，吉姆薩或瑞特染色，先在厚片中快速查找瘧原蟲，再在薄片中查找細(xì)胞內(nèi)瘧原蟲。巴貝蟲病試驗診療也有賴于血涂片顯微鏡檢驗，形態(tài)頗似惡性瘧原蟲，不一樣是無色素和配子體，在同一個紅細(xì)胞內(nèi)可見不一樣發(fā)育階段多個巴貝蟲。4．痰和支氣管灌洗液檢驗標(biāo)本用粘液溶解劑處理后離心濃縮，沉渣涂片，染色鏡檢，烏洛托品染色后見棕褐色包囊和特征性括弧樣結(jié)構(gòu)，含有診療價值。5。陰道、尿道、前列腺分泌物檢驗保暖新鮮標(biāo)本生理鹽水涂片見運動活潑蟲體，也可用標(biāo)本涂片固定后吉姆薩染色，同時還可觀察微生物病原體。6．活檢組織檢驗組織切片或壓片染色鏡檢，觀察賈第蟲原體、弓形蟲游離或胞內(nèi)滋養(yǎng)體、利什曼原蟲利一杜體，可對上述寄生蟲感染作出診療，直腸活組織檢驗、廠叮橙染色或氯化三苯四氮唑一茚三酮復(fù)染法可檢出血吸蟲蟲卵并能判別蟲卵死活。臨床病原學(xué)檢查第38頁(二)抗體檢測利用血清學(xué)方法檢驗各類寄生蟲蟲體抗原或機體對此產(chǎn)生抗體，伴隨單克隆抗體出現(xiàn)，使用比先前廣泛。(三)核酸檢測應(yīng)用DNA探針檢測標(biāo)本中寄生蟲DNA或RNA，當(dāng)前已經(jīng)有：①“P標(biāo)識惡性瘧原蟲全基因組DNA可檢出0．0001％蟲體濃度；②國內(nèi)建立杜氏利什曼原蟲kDNA檢測利什曼原蟲；③克氏錐蟲克隆基因組DNA和全基因組DNA可檢出樣品中30個錐蟲DNA；④篩選出弓形蟲特異性DNA片段克隆，經(jīng)過斑點雜交檢測出500pg弓形蟲DNA；⑤pBM68和pBM工5兩種絲蟲病診療探針可檢出300—500pg馬來絲蟲基因組DNA。近年來發(fā)展PCR技術(shù)，已應(yīng)用與錐蟲病、利什曼病、肺孢子蟲病、腸球蟲病、賈第蟲病和弓形蟲病等診療。臨床病原學(xué)檢查第39頁醫(yī)院感染檢驗醫(yī)院感染(nosocomialinfection)是指患者在入院時既不存在，亦不處于潛伏期，而在醫(yī)院內(nèi)發(fā)生感染，包含醫(yī)院內(nèi)取得而在出院后發(fā)病感染。伴隨醫(yī)療技術(shù)發(fā)展，各種侵入性操作和器官移植推廣，化療、糖皮質(zhì)激素、抗生素等廣泛應(yīng)用，醫(yī)院感染是當(dāng)今醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中主要問題。臨床病原學(xué)檢查第40頁醫(yī)院感染流行病學(xué)(一)病原學(xué)細(xì)菌為最常見病原體，細(xì)菌種類與分布因感染類型、醫(yī)院類別、患者基礎(chǔ)疾病和治療辦法不一樣各異。(二)感染源和易感人群引發(fā)醫(yī)院感染病原體起源于住院病人、醫(yī)務(wù)人員、探視者、陪住人員，來自于醫(yī)院環(huán)境及未徹底消毒滅菌醫(yī)療器械、血液制品污染菌等，大多為條件性致病菌，且有程度不一樣耐藥性。(三)常見臨床類型：1.下呼吸道感染為我國最常見醫(yī)院感染類型。2．尿路感染住院期間有尿路器械操作史患者，常因為保留導(dǎo)尿系統(tǒng)交叉污染造成導(dǎo)管外上行性感染，常以大腸埃希菌、變形桿菌為主。3．手術(shù)切口感染清潔傷口感染大部分為外源性感染，醫(yī)務(wù)人員手指皮膚接觸傳輸起了十分主要作用。4。胃腸道感染主要見于使用抗生素所致腸炎，如金黃色葡萄球菌和艱難梭菌所致偽膜性腸炎。5。血液感染主要為菌血癥，可由靜脈內(nèi)輸液、血液透析等引發(fā)，也可源于外科手術(shù)、下呼吸道感染或皮膚感染。6．皮膚和軟組織感染由金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌等引發(fā)蜂窩織炎、褥瘡和燒傷感染等。臨床病原學(xué)檢查第41頁醫(yī)院感染病原學(xué)監(jiān)測(一)標(biāo)本采集和送檢標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)本采集和送檢基本標(biāo)準(zhǔn)：①發(fā)覺醫(yī)院感染應(yīng)及時采集標(biāo)本做病原學(xué)檢驗；②嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，防止正常菌群污染；③應(yīng)馬上送檢，床邊接種可提升檢出率；④對混有正常菌群污染標(biāo)本應(yīng)作定量(或半定量)培養(yǎng)，以判別是感染菌或定植菌；⑤對分離到病原菌應(yīng)作藥敏試驗，提倡“分級匯報”(即分階段匯報涂片鏡檢、初步培養(yǎng)、直接藥敏、初步判定、最終判定與藥敏結(jié)果)和“限時匯報”(涂片匯報2h，普通培養(yǎng)3天)。(二)涂片顯微鏡檢驗慣用于下呼吸道醫(yī)院感染痰標(biāo)本，操作簡便、結(jié)果快速，可取得最早期病原學(xué)初步診療。(三)分離、培養(yǎng)和判定該法操作簡單，結(jié)果直觀，特異性高，同時可作藥品敏感試驗指導(dǎo)臨床用藥。臨床病原學(xué)檢查第42頁醫(yī)院環(huán)境細(xì)菌監(jiān)測和消毒滅菌效果監(jiān)測(一)醫(yī)院環(huán)境污染細(xì)菌監(jiān)測方法污染環(huán)境是引發(fā)醫(yī)院感染危險原因，必須定時對空氣、物體表面、醫(yī)務(wù)人員手部和消毒滅菌效果等進(jìn)行監(jiān)測。(二)消毒滅菌效果監(jiān)測方法消毒滅菌效果監(jiān)測包含對高壓蒸氣滅菌效果監(jiān)測、紫外線殺菌效果監(jiān)測和化學(xué)消毒劑監(jiān)測。前二者滅菌效果監(jiān)測慣用生物學(xué)指標(biāo)檢驗，化學(xué)消毒劑監(jiān)測目標(biāo)是了解使用中消毒劑細(xì)菌污染程度和消毒劑最小殺菌濃度，殺菌率和殺菌指數(shù)測定。醫(yī)院感染監(jiān)測是預(yù)防醫(yī)院感染主體，只有對病人、醫(yī)務(wù)人員、醫(yī)院環(huán)境進(jìn)行深入細(xì)微監(jiān)測，才能采取針對性和有效防治辦法。監(jiān)測包含全方面綜合性監(jiān)測和目標(biāo)性監(jiān)測。前者對醫(yī)院各個科室、病房進(jìn)行全方面檢驗分析；后者是重點針對感染嚴(yán)重科室，如手術(shù)室、產(chǎn)房、ICU、母嬰同室、血液透析中心、供給室等定時進(jìn)行微生物指標(biāo)監(jiān)測、消毒滅菌效果監(jiān)測、醫(yī)院感染病原學(xué)診療、抗生素敏感資料動態(tài)分析等。監(jiān)測結(jié)果分析可及時發(fā)覺醫(yī)院感染，杜絕感染蔓延，研究醫(yī)院感染發(fā)病機制，制訂有效感染辦法。臨床病原學(xué)檢查第43頁性傳輸疾病檢驗性傳輸疾病(sexualtransmitteddisease，STDs)簡稱性病，是一組經(jīng)過性行為傳輸，侵犯皮膚、性器官和全身多臟器損害感染性疾病，有艾滋病、梅毒病、淋病、軟雹下疳、性病淋巴肉芽腫、非淋菌性尿道炎、尖銳濕疣、生殖