應(yīng)用指南 - 用 Gibco CTS Dynabeads CD3CD28 一步分離和激活初始和早期記憶 T 細(xì)胞

種同時(shí)進(jìn)行T細(xì)胞分離和活化的一步法產(chǎn)生純凈而且均勻活CD8+T細(xì)胞在第10天維持早期記憶表型并且具有增加的克隆多樣性。早期去除磁珠是可行的并且提高γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒CD3/CD28磁珠的存在下被分離和激活，通過(guò)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行基因工程改造以表達(dá)嵌合抗原受體(CAR)。將活化的T細(xì)胞在補(bǔ)充有Gibco?CTS?免疫細(xì)胞血清替代物的Gibco?CARCART細(xì)胞再輸注到預(yù)處理患者體內(nèi)T細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞擴(kuò)增磁珠移除T細(xì)胞制劑和輸注T細(xì)胞生產(chǎn)工作流程T細(xì)胞分離和激活血液采集ThermoFisherSCIENTlFIC細(xì)胞培養(yǎng)袋中分離并激活來(lái)自健康供體的PBMC的T細(xì)細(xì)胞血清替代物，Gibco?L-谷氨酰胺和Gibco?慶大2.在移除磁珠后，在細(xì)胞培養(yǎng)板或者細(xì)胞培養(yǎng)袋中擴(kuò)增T細(xì)胞。3.將分離的和活化的T細(xì)胞在完全培養(yǎng)基(不完全培養(yǎng)基加4.用涂有重組人纖維蛋白試劑的微孔板中的編碼EGFP的γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞。5.使用流式細(xì)胞分析軟件在細(xì)胞分析儀上進(jìn)行T細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)分析。早期記憶T細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)分析顯示CD3+CD28+T細(xì)胞A起始細(xì)胞非隔離細(xì)胞CD3CD3B恢復(fù)率(n-9)757550250ACD25表達(dá)CD25B激活(n=3)7550250CD25CD71DCCD3表達(dá)DDayDay0(prE-isolation)第3天第10天T細(xì)胞純度(n=3)75502503天活化的T細(xì)胞在10天內(nèi)擴(kuò)增>100倍并且在第7–10天保留具有低PD-1表達(dá)的年輕表型A折疊擴(kuò)增BCD4:CD8比率3842221864201C第3天第10天第3天第3天PDPD-1表達(dá)表型D表型7550250PD-1第10天757550250第。天第3天第7天第10天A非轉(zhuǎn)導(dǎo)0.950.850.800.750.70BY逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)0.950.850.800.750.70激活后天數(shù)激活后天數(shù)在激活后第3天也用γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞。gibco是可行的，但在第2天和第3天出現(xiàn)一些細(xì)胞損失(T細(xì)胞恢恢復(fù)。當(dāng)去除磁珠時(shí)，激活后第2天的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率比第3天轉(zhuǎn)導(dǎo)效率更高。率高，純度高。?分離和活化的CD4+和CD8+T細(xì)胞在10天內(nèi)擴(kuò)增100至?第2天去除磁珠提高了γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。AT細(xì)胞的恢復(fù)B轉(zhuǎn)導(dǎo)效率150500804020023523磁珠去除,天數(shù)轉(zhuǎn)導(dǎo),天數(shù)-更多信息請(qǐng)?jiān)L問(wèn)/cts賽默飛官方微信免費(fèi)服務(wù)電話:銷售服務(wù)信箱:技術(shù)咨詢信箱:8008208982/4008208982sales.china@lifescience-cnts@ThermoFisherSCIENTFICForResearchuseonly.Notforuseindiagnosticprocedureso2019ThermoFisherscientificInc.Allrightsreserve