AllinceUPLC系統(tǒng)使用與維護(hù)

UltraPerformanceLC?

實(shí)驗(yàn)技術(shù)與儀器維護(hù)

內(nèi)容提要對UPLC理念的理解ACQUITYUPLC10年回顧

ACQUITYUPLC?

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實(shí)驗(yàn)技術(shù)要點(diǎn)樣品制備及溶劑的選擇常見問題的故障排除色譜柱的使用ACQUITYUPLC?

[一種整體技術(shù)]UV檢測器質(zhì)譜溶劑管理器樣品管理器色譜柱單元ACQUITYUPLC?

徹底的創(chuàng)新超高效液相色譜（UltraPerformanceLC?）是分離科學(xué)中的一個(gè)全新類別，它給實(shí)驗(yàn)室?guī)砹诵缕娑鴱?qiáng)大的能力。UPLC?借助于HPLC的理論及原理，涵蓋了小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測手段等全新技術(shù)，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。ACQUITYUltraPerformanceLC?系統(tǒng)的整體設(shè)計(jì)可以控制并優(yōu)化所有的參數(shù)，以充分實(shí)現(xiàn)今天實(shí)驗(yàn)室中UPLC技術(shù)所能帶來的任何利益。

2010年推出ACQUITYUPLC

H-Class系統(tǒng)四元溶劑管理器(QSM)樣品管理器–流路通過進(jìn)樣針(SM-FTN)色譜柱柱溫箱(CH-A)支持所有現(xiàn)有的ACQUITY檢測器PDA和PDAeλTUVFLRELSDSQD2和TQD內(nèi)容提要對UPLC理念的理解ACQUITYUPLC7年回顧

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詳解模塊詳解與注意事項(xiàng)ACQUITYUPLC?

實(shí)驗(yàn)技術(shù)要點(diǎn)樣品制備及溶劑的選擇常見問題的故障排除色譜柱的使用UPLCSolventManagerBSM二元溶劑管理器QSM四元溶劑管理器UPLC溶劑管理器對比ACQUITYUPLCACQUITYUPLCH-ClassBSM二元溶劑管理器QSM四元溶劑管理器溶劑管理器設(shè)計(jì)二元—2solvents四元—4solvents溶劑總數(shù)SolventsA1或A2和B1或B2SolventsA,B,C,D(SolventsD1-6,使用SSV選件)溶劑混合模式高壓混合低壓混合系統(tǒng)體積<120uL標(biāo)準(zhǔn)配置<400uL標(biāo)準(zhǔn)配置壓力/流速性能15,000psi最高到1mL/min9,000psi最高到2mL/min流速范圍0.01-2mL/min使用BSM和QSM的一般建議使用高質(zhì)量的溶劑,緩沖鹽和添加劑被Fisher驗(yàn)證過的Optima?

商標(biāo)的有機(jī)溶劑質(zhì)量是最穩(wěn)定的使用Milli-Q水(我們使用GradientA-10系統(tǒng))緩沖液要過濾(0.2

m濾膜)不要阻塞脫氣機(jī)的排空管路(不要將其放到廢液瓶中)使用完緩沖液后要用水將其從系統(tǒng)中沖洗干凈(用10-20%有機(jī)溶劑的水溶液保存)使用BSM和QSM的一般建議保持全部四路溶劑管路全都灌注過(未使用的管路用10-20%有機(jī)溶劑的水溶液灌注)保持柱塞清洗管路是灌注過的(90-95%水)啟動儀器之前重新灌注溶劑管路(SysPrep或Start-up)如在低波長下用TFA/ACN梯度最好用100

L混合器查看廢液瓶是否已滿運(yùn)行梯度最好從0.1%-99.9%(最大值)如使用己烷/THF做流動相，必須更換兼容性套件：BSM:205000551,QSM:205000661BSM和QSM的常見故障真空脫氣機(jī)硬件錯(cuò)誤DegasservaccumHWerror脫氣機(jī)真空度達(dá)不到既定要求(0.9psia)BSM：反復(fù)灌注A1A2,B1B2,StrongWash,WeakWash;確認(rèn)管路中氣泡已完全排出;QSM：反復(fù)灌注ABCD及Purge;確認(rèn)管路中氣泡已經(jīng)完全排出;泵硬件超壓PumpHWoverpressure系統(tǒng)壓力超過15500psi通常是由于系統(tǒng)堵塞引起的;請拆下色譜柱及柱前的在線過濾器,再嘗試開啟流速;如仍然出錯(cuò),則說明系統(tǒng)有堵塞的地方,請聯(lián)系Waters尋求解決辦法;泵復(fù)位錯(cuò)誤Pumphomingerror重啟儀器;若仍然出現(xiàn),請記錄報(bào)錯(cuò)信息并聯(lián)系Waters技術(shù)支持;SM和FTN的常見故障樣品壓力低Samplepressurelow流路壓力低于100psi確認(rèn)Weak/StrongWash溶劑是否足夠,反復(fù)灌注清洗注射器,排除其中氣泡;反復(fù)灌注樣品注射器,排除其中氣泡;觀察樣品室內(nèi)進(jìn)樣針,確認(rèn)是否進(jìn)樣針損壞;樣品流路壓力超限Samplefluidicshighpressurelimit流路壓力高于210psi此常見報(bào)錯(cuò)通常由于樣品管理器六通閥堵塞引起,建議直接與Waters聯(lián)系取得支持;Z軸移動硬件錯(cuò)誤ZpaxismoveHWfault請先檢查樣品板是否正確放置;觀察進(jìn)樣針有無損壞;若只是進(jìn)樣時(shí)出現(xiàn)此報(bào)錯(cuò):請確認(rèn)工作站上選擇的樣品板類型是：ANSI-48Vial2MLHolderUPLCSampleManagerSM樣品管理器SampleManager-

FlowThroughNeedleUPLC樣品管理器對比ACQUITYUPLCACQUITYUPLCH-ClassSampleManagerSampleManager-FTN進(jìn)樣模式滿環(huán)和部分環(huán)方式流路通過針方式支持提前載樣和定量環(huán)離線最大體積0.1-

10uL標(biāo)配,最高可達(dá)250μL(選用定量環(huán))0.1-10uL標(biāo)配,最高可達(dá)250μL(選用定量環(huán))精度低于1%RSD(10–75%定量環(huán)體積,for2-250μL)0.3%RSD,滿環(huán)方式1%,1-10μL洗針液2種–強(qiáng)洗和弱洗一種交叉污染<0.005%<0.005%進(jìn)樣循環(huán)時(shí)間<15秒,各次進(jìn)樣之間使用“l(fā)oadahead”功能<30秒,各次進(jìn)樣之間使用“l(fā)oadahead”功能進(jìn)樣機(jī)制XYZZ’XYZRθUPLCSM進(jìn)樣方式總匯滿定量環(huán)進(jìn)樣當(dāng)準(zhǔn)度/回收率和精度是主要目標(biāo)時(shí)進(jìn)樣方式的第一選擇部分定量環(huán)進(jìn)樣–針溢出為寬范圍樣品提供最好的部分定量環(huán)進(jìn)樣準(zhǔn)度,精度和線性推薦使用2,5和10μL定量環(huán)部分定量環(huán)進(jìn)樣是第一選擇部分定量環(huán)進(jìn)樣–壓力輔助當(dāng)分析時(shí)間是主要目標(biāo)和樣品體積有限時(shí)當(dāng)進(jìn)樣體積非常大時(shí)推薦使用20和50μL定量環(huán)UPLCSM不同進(jìn)樣方式的比較項(xiàng)目滿環(huán)(FullLoop)部分環(huán)針溢出(PLUNO)部分環(huán),壓力輔助(PartialLoop,PressureAssist)優(yōu)點(diǎn)最重現(xiàn)的峰面積進(jìn)樣體積可變只是用戶指定的進(jìn)樣體積缺點(diǎn)需要較大的樣品體積需要比進(jìn)樣體積多

3uL的樣品峰面積重現(xiàn)性最小樣品耗用環(huán)體積

x溢出因子(OverFilles)用戶指定的進(jìn)樣體積

+3uL的樣品只是用戶指定的進(jìn)樣體積適用的定量環(huán)可用于所有的定量環(huán)適用于

2-10uL的定量環(huán)適用于

20到50uL定量環(huán),不推薦用于小定量環(huán)適用的進(jìn)樣體積100%環(huán)體積,最少:3X前后各4uL(默認(rèn)值)進(jìn)樣體積:25-75%環(huán)體積

對于某一固定的定量環(huán)設(shè)計(jì),部分定量環(huán)進(jìn)樣模式的準(zhǔn)度和回收率取決于體積參數(shù)/范圍以確保最大準(zhǔn)確度/回收率推薦的定量環(huán)和進(jìn)樣體積定量環(huán)進(jìn)樣體積范圍樣品進(jìn)樣體積(μL)定量環(huán)體積部分定量環(huán)方式2μL5μL10μL20μL針溢出進(jìn)樣范圍(μL)0.2–1.50.5-3.81.0-7.52.0–15.0壓力輔助進(jìn)樣范圍(μL)N.R.N.R.2.0–5.02.0-10.0滿定量環(huán)方式2μL5μL10μL20μL壓力輔助進(jìn)樣范圍(μL)251020標(biāo)準(zhǔn)

R2>0.999面積%RSD<±1.0使用SM的一般建議使用缺省條件–10Lloop和PLUNO(PartialLoopUses

Needle

Overfill,部分定量環(huán)使用針溢出)進(jìn)樣方式,在適合2.1x50和2.1x100mmACQUITY柱的進(jìn)樣體積范圍內(nèi)將得到良好的峰形,良好的回收率,良好的線性對于每一種進(jìn)樣方式和定量環(huán),保持在推薦的限度以內(nèi)若對最佳精密度和最佳準(zhǔn)確度有嚴(yán)格要求時(shí),使用滿環(huán)進(jìn)樣(FullLoop)當(dāng)需嚴(yán)格控制樣品量消耗時(shí),使用PartialLoop(壓力輔助)進(jìn)樣方式使用SM的一般建議當(dāng)循環(huán)周期成為一個(gè)問題時(shí),使用提前進(jìn)樣(LoadAhead)方式當(dāng)更換過弱洗針溶劑以及定量環(huán)和進(jìn)樣針時(shí),要重新校正針和定量環(huán)體積WeakWash溶劑盡量趨同于色譜方法(梯度方法)首行,但不使用緩沖鹽溶液對于樣品板上覆蓋有蓋墊(capmat)時(shí),使用帶不銹鋼針尖的針總是使用柱熱穩(wěn)定器(即使不使用柱溫)使用FTN的一般建議使用90:10=乙腈:水作為WashSolvent(強(qiáng)洗)溶劑使用10:90=乙腈:水作為PurgeSolvent(弱洗)溶劑工作站中標(biāo)配的樣品盤類型的選擇必須為：ANSI-48Vial2mlHolder更換定量環(huán)的注意事項(xiàng)正確固定定量環(huán)并確保環(huán)接頭正確插入六通閥的端口在上緊壓緊螺絲之前,確認(rèn)沒有產(chǎn)生死體積每一個(gè)定量環(huán)接入六通閥的接口要專用(按第一次連接的位置連接)將定量環(huán)的接頭管路與六通閥連接的位置做標(biāo)記正確選用與定量環(huán)大小相關(guān)的適用的進(jìn)樣方式UPLCDetectorsPDADetectorTUVDetectorFLRDetectorELSDetectorRIDetectorTUVDetector可變波長紫外檢測器原理：通過測定樣品在流通池中吸收紫外可見光的大小來確定樣品的含量；TUVDetector可變波長紫外檢測器光源：氘燈(2000H/購買之日起一年)波長范圍：190-700nm波長準(zhǔn)確度：±1.0nm常用采集速率：20HZ(單通道)/2HZ(雙通道)流通池最大耐壓：69bar，1000psi為正確校準(zhǔn)檢測器，必須在開啟檢測器電源之前使流通池充滿流動的溶劑?？樟魍ǔ乜赡軐?dǎo)致校正錯(cuò)誤；PDADetector二極管陣列檢測器原理：二極管陣列檢測器和普通紫外檢測器在根本原理上是一樣的，但是其得到的結(jié)果完全不同；二極管陣列檢測器可以得到某一波長范圍內(nèi)所有波長的色譜圖；

PDADetector二極管陣列檢測器光源：氘燈(2000H/購買之日起一年)波長范圍：190-500nm/190-800nm（eλPDA）波長準(zhǔn)確度：±1.0nm采集速率：20HZ（常用）流通池最大耐壓：69bar，1000psi為確保流通池具有最佳性能，洗脫液必須處于流動狀態(tài)后再接通檢測器電源！啟動TUV(PDA)檢測器確保檢測池中充滿溶劑并且沒有氣泡.如果檢測池中有

氣泡,檢測器就不能很好的初始化,并有可能損壞檢測池建議在泵灌注后,用流動相沖洗流通池10分鐘后再打開檢測器電源檢測器初始化大概需要2分鐘,燈預(yù)熱大概需要3分鐘當(dāng)指示燈常綠不閃爍時(shí),通過控制臺做”Reset”來連接檢測器要得到好的數(shù)據(jù)，需要30分鐘的時(shí)間平衡檢測器和穩(wěn)定基線FLRDetector熒光檢測器原理：某些化合物吸收特定波長的光而躍升到更高的能量狀態(tài)時(shí)，會發(fā)生熒光現(xiàn)象；而測定發(fā)出的熒光能量即可定量；FLRDetector熒光檢測器光源：氙燈(1000H/購買之日起一年)激發(fā)(Ex)波長范圍：200-890nm發(fā)射(Em)波長范圍：210-900nm波長準(zhǔn)確度：±3.0nm采集速率：20HZ(常用)增益(GAIN)：1.0(常用)流通池最大耐壓：34bar，500psiWaters熒光檢測器可進(jìn)行λ-λ掃描：指定激發(fā)波長范圍內(nèi)掃描指定的發(fā)射波長范圍；對于未知樣品的分析提供了極大的幫助！若使用紫外檢測器與熒光檢測器串聯(lián)，請務(wù)必將熒光檢測器接在紫外檢測器后，以避免過大的反壓碎壞流通池！ELSDetector蒸發(fā)光散射檢測器原理：霧化來自液相色譜系統(tǒng)的溶劑，并將產(chǎn)生的液滴夾雜在氣流中。流動相從液滴中蒸發(fā)出來而分析物的揮發(fā)性低于流動相，它作為溶質(zhì)顆粒留在氣流中并到大達(dá)ELS檢測器；顆粒使光束發(fā)生散射。散射光的量可以測量出來，并且與洗脫物質(zhì)的濃度有關(guān)；ELSDetector蒸發(fā)光散射檢測器光源：鎢燈(2000H/購買之日起一年)漂移管溫度范圍：0-100°C,50°C(常用)噴霧器加熱功率:0-100%及冷卻模式氣體壓力范圍：20-60PSI,40PSI(常用)采集速率：10HZ(常用)增益GAIN：500(常用)ELSD需要恒定(表頭壓力4.5到6.9bar或65到100psi)干燥、無油經(jīng)過濾的氮?dú)?或零級無油的、經(jīng)過濾的空氣);要操作ELSD，請先打開氣體，再開啟檢測器電源！待漂移管溫度及噴霧器功率都穩(wěn)定后，再開啟流速；關(guān)閉檢測器時(shí)，請先排除檢測器內(nèi)的所有緩沖鹽溶液；先將泵流速關(guān)閉并讓霧化氣體通過檢測器至少10分鐘，以排干漂移管及檢測室！最后關(guān)氣及關(guān)電源；RIDetector示差折光檢測器原理：示差折光檢測器是通過連續(xù)測定色譜柱流出液折射率的變化而對樣品濃度進(jìn)行檢測的。溶有樣品的流動相和流動相本身之間折射率之差反映了樣品在流動相中的濃度；RIDetector示差折光檢測器光源:

870nm紅外LED燈(2000H/購買之日起一年)檢測器內(nèi)部溫控范圍:30-55oC,軟件上最高：50oC流通池最大耐壓:10.0bar,145psi采集速率:10pt/s(常用)使用RID，應(yīng)確保溶劑預(yù)先混合并脫氣，以避免基線波動或漂移；開機(jī)后，首先沖洗清除流路，以確保參比及樣品池內(nèi)是同種溶劑；同時(shí)，應(yīng)在檢測器內(nèi)部溫度達(dá)到穩(wěn)定后再開始采集數(shù)據(jù)(溫度的變化會引起折光率的改變)；若一個(gè)系統(tǒng)中有多個(gè)檢測器，必須將示差折光檢測器連接于所有檢測器之后；使用不穩(wěn)定的THF時(shí)，請確保它是新鮮的。先前打開過的THF容器含有過氧化物雜質(zhì)，將導(dǎo)致基線漂移；檢測器常見故障TUV及PDA點(diǎn)燈失敗Lamplightingfailure重啟檢測器電源更換新的氘燈光閘復(fù)位錯(cuò)誤Shuttercouldnothome以水或甲醇沖洗流通池半小時(shí)后再開機(jī)更換新的氘燈以嘗試是否能解決波長檢驗(yàn)失敗Calibrationunsuccessful在控制臺中檢查參比和樣品能量，若樣品能量過低請先用透明溶劑清洗流通池聯(lián)系Waters客服熱線尋求解決！TEL：8008202676檢測器常見故障FLR點(diǎn)燈失敗Lamplightingfailure重啟檢測器電源更換新的氙燈校正數(shù)據(jù)丟失，PMT未校正calibrationnotfound,pmtnotcalibrated多數(shù)是CPU電池沒電，聯(lián)系Waters獲取技術(shù)支持進(jìn)樣后出現(xiàn)很大的負(fù)峰Signaltoohigh樣品濃度過高，稀釋樣品后再試波長檢驗(yàn)失敗

Calibrationdiffers:n.nnm開機(jī)自檢的時(shí)候波長誤差超過2nm，一般流通池有污染會出現(xiàn)這種狀況，建議先沖洗流通池檢測器常見故障ELSD及RIDLED靈敏度過高/過低LEDIntensitytoohigh/toolow參比池及樣品池溶劑差異過大，持續(xù)灌注清除流路RAM丟失Non-volatileRAMCorrupted通常是CPU電源板上電池沒電，聯(lián)系Waters獲取技術(shù)支持內(nèi)容提要對UPLC理念的理解ACQUITYUPLC7年回顧

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實(shí)驗(yàn)技術(shù)要點(diǎn)樣品制備及溶劑的選擇常見問題的故障排除色譜柱的使用容器使用通則總是使用清潔的玻璃器皿(瓶子,量筒或溶劑過濾裝置),并在用前沖洗干凈盡量保持一組溶劑瓶和玻璃器皿專用于ACQUITYUPLC系統(tǒng)決不要用其他實(shí)驗(yàn)室(例如微生物實(shí)驗(yàn)室等)的玻璃器具來沖洗UPLC的玻璃容器溶劑瓶要貼上注明流動相配制日期的標(biāo)簽不要往系統(tǒng)上的流動相瓶中“添加”流動相每24-48小時(shí)制備新鮮的水相流動相,尤其是100%含水流動相系統(tǒng)上的溶劑瓶要用合適的瓶蓋蓋好用鋁箔密封溶劑瓶口注意:不要使用PARAFILM?(石蠟?zāi)?或其它塑料膜來密封溶劑瓶口控制水相流動相長菌流動相A組成:0.1%HCOOH配制時(shí)間:Sep17,1937您的流動相看起來是這樣嗎?這種吃藻類的細(xì)枝鯰魚似乎是下一個(gè)產(chǎn)品?UPLC流動相過濾膜的選用推薦使用:WatersP/N:1860035240.2um47mmGHPWatersP/N:WAT2005310.2um47mmPVDF避免使用:尼龍材料的膜和聚醚砜材料的膜,例如:Supor-200filter使用Supor-200filter過濾流動相,可能會對UPLC色譜柱造成污染.對污染的UPLC色譜柱入口出口篩板進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),入口篩板處被一層主要含N,S,O的物質(zhì)所覆蓋,經(jīng)紅外顯微鑒定該物質(zhì)為聚砜.而Supor-200filter正是由聚醚砜構(gòu)成的.推薦的溶劑/樣品稀釋劑甲醇超純水乙腈異丙醇乙醇二甲基亞砜N,N-二甲基甲酰胺不建議使用的溶劑/樣品稀釋劑氯仿乙酸乙酯含鹵素溶劑類(例如三氯苯,二氯甲烷)過氧化物甲苯>5%的強(qiáng)酸包含EDTA等高濃度螯合劑的溶液推薦使用的添加劑/改性劑0.2%甲酸0.1%TEA10mM磷酸鹽緩沖液50mM銨緩沖鹽0.1%EDTA0.1%TFA0.1%七氟丁酸10mM碳酸氫銨50mM乙酸銨樣品制備應(yīng)注意的問題標(biāo)樣和樣品標(biāo)樣:又稱對照品,它作為液相色譜定性和定量分析的參考標(biāo)準(zhǔn)物,

一般是純度較高的純物質(zhì)樣品:待測物,一般是成分復(fù)雜的混合物液相色譜對樣品(包括標(biāo)樣)制備的要求:必須能溶于流動相如樣品的溶劑不是流動相,一定要用流動相試溶解度,以免在進(jìn)樣時(shí)樣品在流動相中析出堵塞管路和色譜柱樣品溶液要過濾除去微粒及雜質(zhì)了解樣品對色譜柱的基質(zhì)/填料是否有破壞作用選擇適合的UPLC樣品瓶樣品瓶是UPLC分析中易被忽視的地方使用不當(dāng)往往會使SM出現(xiàn)進(jìn)樣針故障是造成定量不準(zhǔn)的重要因素是色譜圖質(zhì)量不佳的影響因素提示:測試樣品與樣品瓶的兼容性某些化合物可能會與樣品瓶作用，或者吸附在樣品瓶表面選擇適合的瓶蓋－減小污染螺紋蓋傳統(tǒng)型蓋與墊分離(裝時(shí)可能帶來污染)

LectraBondTM蓋墊一體，不使用化學(xué)劑和粘合劑（電子焊接法）－更小的污染可能有預(yù)開口設(shè)計(jì)內(nèi)容提要對UPLC理念的理解ACQUITYUPLC7年回顧

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詳解模塊詳解與注意事項(xiàng)ACQUITYUPLC?

實(shí)驗(yàn)技術(shù)要點(diǎn)樣品制備及溶劑的選擇常見問題的故障排除色譜柱的使用系統(tǒng)壓力問題系統(tǒng)壓力是色譜系統(tǒng)正常與否的一個(gè)提示系統(tǒng)壓力受色譜柱長度,內(nèi)徑,柱溫,流動相組成及流速等多重因素影響,需要操作者養(yǎng)成記錄的習(xí)慣系統(tǒng)壓力過低,一般與漏液或流動相走干有關(guān)。應(yīng)依次檢查泵頭周圍,SealWash管路,六通閥接口,色譜柱接頭等容易漏液的地方。并用純甲醇充分灌注系統(tǒng)，以排除管路中氣泡的影響系統(tǒng)壓力問題系統(tǒng)壓力過高,則與管路不暢,在線過濾器篩板堵塞有關(guān),正常情況下,過濾器篩板反壓在BSM系統(tǒng)上不超過100psi,在QSM系統(tǒng)上不超過300psi,過高則需更換或清洗系統(tǒng)壓力也與色譜柱篩板堵塞相關(guān)，此時(shí)需更換色譜柱篩板，更換方法見后系統(tǒng)壓力波動,則多與系統(tǒng)未平衡,管路中有氣泡以及柱溫的變化有關(guān)；應(yīng)灌注系統(tǒng)排除氣泡,充分平衡方法,檢查柱溫的設(shè)置及是否有微滲的地方,并留意系統(tǒng)脫氣機(jī)的壓力顯示：BSMDegasser<0.9psiaQSMDegasser<1.2psia進(jìn)樣器污染的問題(1)檢查進(jìn)樣針是否彎曲稀釋液與洗針液是否互溶檢查強(qiáng)洗針溶劑可以試試70:20:10甲醇/水/異丙醇也許聽說過“奇妙洗液(WonderWash)”甲醇,乙腈,水,異丙醇各25%確保使用了合適量的弱洗針溶液,這樣就沒有強(qiáng)洗針溶劑殘留在管線中以至于影響到下一針進(jìn)樣能觀測到靠前洗脫的峰保留時(shí)間漂移和峰形變差就表明弱洗針液的量不夠可能造成污染的因素(2)確?？偸沁\(yùn)行了空白并已排除以下因素…樣品瓶污染流動相使用了不好的水或是有其它污染物在溶劑中如果仍不奏效,檢查樣品管理器的“清洗站(washstation)”的針密封,如有必要進(jìn)行更換

很多情況下并非系統(tǒng)問題,往往來自樣品制備的過程!!!!(~60%的情況如此!)可能造成污染的因素(3)可能來自定量環(huán)的交叉污染如果要移除一個(gè)定量環(huán)然后反向安裝在了閥上,色譜性能可能沒什么不同,但是定量環(huán)里會有一些能隱藏污染物的空隙滿定量環(huán)進(jìn)樣同時(shí)滿定量環(huán)進(jìn)空白溶液觀察交叉污染如果沒有交叉污染,那么不是定量環(huán)的原因,反回頭來查找NeedleSeal的原因如果有交叉污染,那么安裝新的定量環(huán)通訊問題控制臺上提示通訊失??？進(jìn)樣之后沒有數(shù)據(jù)采集？下面將介紹出現(xiàn)通訊問題后的解決辦法！通訊問題打開Empower軟件配置系統(tǒng)節(jié)點(diǎn)屬性檢查各個(gè)模塊的狀態(tài)通訊問題部分模塊通訊不正常？檢查此模塊電源是否開啟？軟件或硬件上是否有此模塊報(bào)錯(cuò)信息？此模塊背后的網(wǎng)線是否正確連接？所有模塊都通訊不正常？檢查所有模塊電源是否開啟？交換機(jī)電源是否正常？網(wǎng)線是否正確連接到PC？電腦的本地連接IP地址是否正確？InstrumentLANIPAddress：192.168.0.1/172.16.0.1通訊問題-部分模塊通訊不正常？檢查模塊電源是否正常，指示燈是否常綠？指示燈不亮，請嘗試重啟模塊，并確定模塊背后的電源線及插頭是插緊的；指示燈亮紅，應(yīng)有硬件故障；請讀取報(bào)錯(cuò)信息，必要時(shí)聯(lián)系Waters取得支持；檢查模塊背后網(wǎng)線連接是否正常？請檢查模塊背后的網(wǎng)線是否插緊？是否連接在正確的位置？如發(fā)現(xiàn)異常，可嘗試重新拔插網(wǎng)線或更換網(wǎng)線；UPLC系統(tǒng)的交換機(jī)一般安裝在樣品管理器或柱溫箱背后！通訊問題-部分模塊通訊不正常？打開Empower軟件，進(jìn)入節(jié)點(diǎn)屬性-配置DHCP，記錄通訊錯(cuò)誤的模塊IP地址；通訊問題-部分模塊通訊不正常？在Windows系統(tǒng)中嘗試ping此IP地址點(diǎn)擊開始菜單在運(yùn)行框內(nèi)輸入”cmd”在彈出的DOS界面輸入：Ping192.168.0.X若提示請求超時(shí)：請?jiān)俅螜z查儀器狀態(tài)，網(wǎng)線連接；可以嘗試重啟儀器及計(jì)算機(jī)；或聯(lián)系Waters得到技術(shù)支持；若提示回復(fù)正常：請檢查當(dāng)前運(yùn)行的色譜系統(tǒng)是否選擇正確，亦可嘗試重啟計(jì)算機(jī)；通訊問題-全部模塊通訊不正常？首先確認(rèn)所有模塊均已正常啟動；接下來請檢查計(jì)算機(jī)IP地址是否設(shè)置正確；打開Windows”網(wǎng)絡(luò)和共享中心”打開本地連接屬性雙擊”TCP/IPV4”檢查IP地址注意：”網(wǎng)絡(luò)及共享中心”通常有至少兩個(gè)”本地連接”；請務(wù)必先確定好儀器占用的是哪個(gè)本地連接，再做后續(xù)檢查！通訊問題-全部模塊通訊不正常？確認(rèn)IP地址無誤后，可以嘗試拔插/更換交換機(jī)至計(jì)算機(jī)的網(wǎng)線，并重啟儀器及計(jì)算機(jī)；使用外置交換機(jī)時(shí)，請檢查交換機(jī)電源！注意：UPLC交換機(jī)通常內(nèi)置在樣品管理器/柱溫箱，無法直接做檢查；如懷疑交換機(jī)故障，請聯(lián)系Waters取得更多的技術(shù)支持；安裝了Empower工作站的計(jì)算機(jī)，防火墻及自動更新均應(yīng)處在關(guān)閉狀態(tài)！電源計(jì)劃應(yīng)使計(jì)算機(jī)從不自動進(jìn)入休眠模式！聯(lián)系Waters客服熱線尋求支持！TEL：8008202676內(nèi)容提要對UPLC理念的理解ACQUITYUPLC7年回顧要點(diǎn):如何實(shí)現(xiàn)小顆粒填料的益處ACQUITYUPLC?

實(shí)驗(yàn)技術(shù)要點(diǎn)樣品制備及溶劑的選擇常見問題的故障排除色譜柱的使用關(guān)于柱效或塔板數(shù)塔板數(shù)是綜合反映色譜柱和儀器性能的關(guān)鍵指標(biāo)塔板數(shù)取決于下列兩個(gè)參數(shù):保留時(shí)間峰寬窄峰高塔板數(shù)峰形越均勻塔板數(shù)越高分析型HPLC典型的塔板數(shù)值(5)約為100,000/米UPLC典型的塔板數(shù)值(5)

高達(dá)200,000/米塔板數(shù)值塔板數(shù)值受下列因素影響:機(jī)械因素儀器聯(lián)接(端口接頭,錐箍)柱裝填的好壞化學(xué)因素色譜因素(溶劑)填料的生產(chǎn)制造質(zhì)量防止色譜柱污染

-微生物污染(最為常見)從柱子入口處取下篩板(緊靠柱床一側(cè))上棒狀細(xì)菌的電子顯微鏡圖還可觀察到有機(jī)聚合物防止色譜柱污染

-緩沖鹽污染從柱子出口處取下的篩板(緊靠柱床一側(cè))上,沉淀物(磷酸鹽?)的電子顯微鏡圖正確使用色譜柱(一)樣品方面除去微粒及雜質(zhì)了解樣品在流動相中的溶解度如溶樣品的溶劑不是流動相，一定要用流動相試溶解度，防止其在流動相中析出了解樣品與色譜柱的基質(zhì)/填料是否有相互作用正確使用色譜柱（二）流動相方面除去微粒純度的要求超純水，梯度實(shí)驗(yàn)時(shí)水中有機(jī)雜質(zhì)含量要低緩沖液的pH值，在填料的允許范圍內(nèi)緩沖液（鹽）的濃度有機(jī)溶劑：色譜純,雜質(zhì)含量盡量低,并與填料相匹配流動相對樣品的溶解度有機(jī)溶劑或水的比例正確使用色譜柱（三）存放方面存放前的處理－除去雜質(zhì)、緩沖鹽防止細(xì)菌生長合適的存放溶劑能有效避免色譜柱床干涸避免機(jī)械震動注意存放溫度ACQUITYUPLC色譜柱清洗程序極性樣品非極性樣品蛋白樣品1.水1.異丙醇(或合適的異丙醇/水混和溶液)1.重復(fù)進(jìn)樣少量二甲基亞砜2.甲醇2.四氫呋喃2.梯度洗脫從10%到90%的B;A:0.1%三氟醋酸水液;B:0.1%三氟醋酸乙腈溶液3.四氫呋喃3.二氯甲烷4.甲醇4.正己烷5.水5.異丙醇(接著用合適比例的異丙醇/水混和溶液)3.用7mM的鹽酸胍或是7mM的尿素沖洗6.流動相6.流動相注:用低的有機(jī)溶劑組成清洗色譜柱以避免緩沖鹽沉淀柱篩板ACQUITYUPLC?柱篩板更換程序簡單,然而是用以判斷色譜柱堵塞部位(不是來源)的有價(jià)值的診斷方法證明填充床并不是問題所在有助于使用戶確信是某種東西堵塞