高中生物專(zhuān)題1基因工程3基因工程的應(yīng)用學(xué)案新人教選修31025120

基因工程的應(yīng)用一、植物基因工程的成果1.植物基因工程的應(yīng)用領(lǐng)域:(1)提高農(nóng)作物的抗逆能力。(2)改良農(nóng)作物的品質(zhì)。(3)利用植物生產(chǎn)藥物等。2.抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物:(1)方法:從某些生物中分離出具有殺蟲(chóng)活性的基因,將其導(dǎo)入作物中。(2)目的基因:主要是Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制劑基因、淀粉酶抑制劑基因、植物凝集素基因等。(3)成果:轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉、轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)水稻等。(4)意義:減少化學(xué)農(nóng)藥的使用,降低生產(chǎn)成本,減少環(huán)境污染,降低對(duì)人體健康的危害。3.抗病轉(zhuǎn)基因植物:(1)方法:將抗病基因?qū)胫参镏小?2)目的基因。①抗病毒基因:病毒外殼蛋白基因和病毒的復(fù)制酶基因。②抗真菌基因:幾丁質(zhì)酶基因和抗毒素合成基因。(3)成果:抗煙草花葉病毒的轉(zhuǎn)基因煙草,抗病毒的轉(zhuǎn)基因小麥、甜椒、番茄等。(4)意義:能獲得用常規(guī)育種方法很難培育出的抗病毒新品種。4.抗逆轉(zhuǎn)基因植物:作物種類(lèi)目的基因抗鹽堿、抗干旱作物調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透壓基因耐寒作物魚(yú)的抗凍蛋白基因抗除草劑作物抗除草劑基因5.利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì):富含賴(lài)氨酸的轉(zhuǎn)基因玉米、轉(zhuǎn)基因延熟番茄、開(kāi)變異花的轉(zhuǎn)基因矮牽牛。二、動(dòng)物基因工程的應(yīng)用應(yīng)用基因來(lái)源或處理成果提高動(dòng)物的生長(zhǎng)速度外源生長(zhǎng)激素基因轉(zhuǎn)基因綿羊、轉(zhuǎn)基因鯉魚(yú)改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)腸乳糖酶基因轉(zhuǎn)基因牛分泌的乳汁中,乳糖含量降低用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物藥用蛋白基因+乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子乳腺生物反應(yīng)器或乳房生物反應(yīng)器用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作器官移植的供體抑制抗原決定基因的表達(dá)或設(shè)法除去抗原決定基因結(jié)合克隆技術(shù),培育出沒(méi)有免疫排斥反應(yīng)的轉(zhuǎn)基因克隆豬器官三、基因工程藥物1.來(lái)源:轉(zhuǎn)基因工程菌。2.成果:細(xì)胞因子、抗體、疫苗、激素等。3.作用:預(yù)防和治療人類(lèi)腫瘤、心血管疾病、傳染病、糖尿病、類(lèi)風(fēng)濕等疾病。四、基因治療1.概念:把正?；?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能,從而達(dá)到治療疾病的目的。2.方法:(1)體外基因治療:從病人體內(nèi)獲得某種細(xì)胞,進(jìn)行培養(yǎng),在體外完成基因轉(zhuǎn)移,篩選出成功轉(zhuǎn)移的細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng),最后重新輸入患者體內(nèi)。(2)體內(nèi)基因治療:直接向人體組織細(xì)胞中轉(zhuǎn)移基因。3.成果:將腺苷酸脫氨酶基因轉(zhuǎn)入患者的淋巴細(xì)胞中,治療復(fù)合型免疫缺陷癥。4.現(xiàn)狀:(1)處于初期臨床試驗(yàn)階段。(2)存在著技術(shù)、倫理道德、安全性等方面的諸多困難。1.目的基因只能來(lái)源于微生物。 (×)【分析】目的基因既可以來(lái)源于細(xì)菌等微生物,也可來(lái)源于高等的植物、動(dòng)物等生物。2.利用乳腺生物反應(yīng)器能夠獲得一些重要的醫(yī)藥產(chǎn)品,如人的血清白蛋白,這是因?yàn)閷⑷说难灏椎鞍谆驅(qū)肓藙?dòng)物的乳腺細(xì)胞中。 (×)【分析】利用乳腺生物反應(yīng)器能夠獲得一些重要的醫(yī)藥產(chǎn)品,是將目的基因?qū)雱?dòng)物的受精卵而不是乳腺細(xì)胞。3.來(lái)自蘇云金芽孢桿菌的Bt毒蛋白基因只能應(yīng)用于棉花。 (×)【分析】Bt毒蛋白能殺死多種有害昆蟲(chóng),而對(duì)哺乳動(dòng)物無(wú)害,因而廣泛用于多種轉(zhuǎn)基因植物,如棉花、水稻等。4.轉(zhuǎn)基因生物的目的基因來(lái)自不同的物種,可見(jiàn),基因工程可以打破物種間的生殖隔離。 (√)5.由大腸桿菌工程菌獲得人的干擾素后可直接應(yīng)用。 (×)【分析】大腸桿菌是原核生物,沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體,無(wú)法對(duì)分泌蛋白進(jìn)行加工修飾,合成的干擾素?zé)o生物活性,需要進(jìn)一步加工,不能直接應(yīng)用。一、基因工程的應(yīng)用1.轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)過(guò)程圖解(以抗蟲(chóng)棉生產(chǎn)過(guò)程為例):2.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)過(guò)程圖解(以轉(zhuǎn)基因牛生產(chǎn)過(guò)程為例):3.轉(zhuǎn)基因微生物生產(chǎn)過(guò)程圖解(以可生產(chǎn)干擾素的酵母菌的培育過(guò)程為例):【易錯(cuò)提醒】轉(zhuǎn)基因作物中的目的基因的兩點(diǎn)提醒(1)目的基因并非都來(lái)自微生物:目的基因都是來(lái)自其他生物的能表現(xiàn)出優(yōu)良性狀的外源基因,并不都是來(lái)自細(xì)菌、病毒等微生物,如抗凍蛋白基因來(lái)自魚(yú)類(lèi)。(2)注意“抗蟲(chóng)”和“抗病”的區(qū)別,二者可以分別通過(guò)害蟲(chóng)接種和病毒接種來(lái)進(jìn)行個(gè)體水平的檢測(cè)。【選修對(duì)接必修】對(duì)接必修2:基因的表達(dá)(1)目的基因?qū)π誀畹目刂?有的目的基因通過(guò)控制蛋白質(zhì)的合成,直接控制生物的某種性狀,這反映了基因與性狀的直接關(guān)系;有的目的基因通過(guò)控制酶的合成來(lái)控制代謝,進(jìn)而控制生物的性狀,這體現(xiàn)的是基因和性狀的間接關(guān)系。(2)生物的表現(xiàn)型=基因型+環(huán)境。基因與基因、基因與基因產(chǎn)物、基因與環(huán)境之間相互作用,精細(xì)地調(diào)控著生物體的性狀。為增加油菜種子的含油量,研究人員嘗試將從陸地棉基因庫(kù)中獲取的酶D基因與位于擬南芥葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因相連,導(dǎo)入油菜細(xì)胞并獲得轉(zhuǎn)基因油菜品種。酶D基因、轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因所含三種限制酶(ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ)的切點(diǎn)如圖甲所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。(1)用限制酶__________和__________酶處理兩個(gè)基因后,可得到A、D端相連的目的基因。

(2)將上述目的基因插入如圖乙所示質(zhì)粒的__________中,構(gòu)建__________,然后將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。

(3)利用__________法將目的基因?qū)胗筒巳~片中,并通過(guò)篩選獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞,通過(guò)__________技術(shù)可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株。

(4)用__________技術(shù)可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因油菜的染色體DNA上是否插入了目的基因,用__________技術(shù)可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因油菜植株中的目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。

【解題關(guān)鍵】(1)限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi)。(2)同種限制酶切割能夠產(chǎn)生相同的黏性末端,便于質(zhì)粒和目的基因連接?！窘馕觥?1)用限制酶ClaⅠ處理兩個(gè)基因后,可露出相同的黏性末端,再用DNA連接酶連接,可得到A、D端相連的目的基因。(2)因?yàn)橥寥擂r(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA能夠轉(zhuǎn)移并整合到植物細(xì)胞的染色體DNA上,故要將上述目的基因插入圖中Ti質(zhì)粒的T-DNA中,構(gòu)建基因表達(dá)載體即重組質(zhì)粒,然后將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。(3)利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胗筒巳~片中,并通過(guò)篩選獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞,通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株。(4)用DNA分子雜交技術(shù)可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因油菜的染色體DNA上是否插入了目的基因,用抗原-抗體雜交技術(shù)可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因油菜植株中的目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。答案:(1)ClaⅠDNA連接(2)T-DNA基因表達(dá)載體(3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化植物組織培養(yǎng)(4)DNA分子雜交抗原-抗體雜交【誤區(qū)警示】(1)忽略圖中關(guān)鍵信息:對(duì)圖示三種限制酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)認(rèn)識(shí)不清,進(jìn)而無(wú)法判斷“剪切”產(chǎn)生的目的基因和載體的末端是否能夠“縫合”。(2)不清楚分子水平上的檢測(cè)方法:①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——DNA分子雜交技術(shù);②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA——分子雜交技術(shù);③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)——抗原-抗體雜交技術(shù)。1.基因疫苗是指將編碼外源抗原的基因與質(zhì)粒重組,構(gòu)建出基因表達(dá)載體,導(dǎo)入人或動(dòng)物細(xì)胞后利用宿主細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)合成外源抗原蛋白,并誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生對(duì)該抗原的免疫應(yīng)答,以達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的?？梢?jiàn),基因疫苗是一種 ()A.重組質(zhì)粒 B.外源抗原的DNA片段C.外源抗原蛋白質(zhì) 【解析】選A。從基因疫苗的制備過(guò)程可以看出,基因疫苗是目的基因與質(zhì)粒重組后的結(jié)果,即重組質(zhì)粒。2.“胰島素A、B鏈分別表達(dá)法”是生產(chǎn)胰島素的方法之一。圖1是該方法所用的基因表達(dá)載體,圖2表示利用大腸桿菌作為工程菌生產(chǎn)人胰島素的基本流程(融合蛋白A、B分別表示β-半乳糖苷酶與胰島素A、B鏈融合的蛋白)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)圖1基因表達(dá)載體中沒(méi)有標(biāo)注出來(lái)的基本結(jié)構(gòu)是_________________。

(2)圖1中啟動(dòng)子是________酶識(shí)別和結(jié)合的部位,有了它才能啟動(dòng)目的基因的表達(dá);氨芐青霉素抗性基因的作用是_____________________________。

(3)溴化氰能切斷肽鏈中甲硫氨酸羧基端的肽鍵,用溴化氰處理相應(yīng)的融合蛋白能獲得完整的A鏈或B鏈,且β-半乳糖苷酶被切成多個(gè)肽段,推測(cè)這是因?yàn)開(kāi)__________________________________________________________________________。

【解析】(1)根據(jù)題意和圖示分析可以知道:圖1基因表達(dá)載體中已包含目的基因、啟動(dòng)子和標(biāo)記基因,所以沒(méi)有標(biāo)注出來(lái)的基本結(jié)構(gòu)是終止子。(2)圖1中啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,有了它才能啟動(dòng)目的基因的表達(dá)即轉(zhuǎn)錄過(guò)程;氨芐青霉素抗性基因的作用是作為標(biāo)記基因,將含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來(lái)。(3)溴化氰能切斷肽鏈中甲硫氨酸羧基端的肽鍵,因?yàn)棣?半乳糖苷酶中含有多個(gè)甲硫氨酸,而胰島素的A、B鏈中不含甲硫氨酸,所以用溴化氰處理相應(yīng)的融合蛋白能獲得完整的A鏈或B鏈,且β-半乳糖苷酶被切成多個(gè)肽段。答案:(1)終止子(2)RNA聚合作為標(biāo)記基因,將含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來(lái)(3)β-半乳糖苷酶中含多個(gè)甲硫氨酸,而胰島素A、B鏈中不含甲硫氨酸二、乳腺生物反應(yīng)器與基因治療1.乳腺生物反應(yīng)器:(1)操作過(guò)程:(2)乳腺生物反應(yīng)器與工程菌生產(chǎn)藥物的區(qū)別:比較內(nèi)容乳腺生物反應(yīng)器工程菌含義指讓外源基因在哺乳動(dòng)物的乳腺中特異性表達(dá),利用動(dòng)物的乳腺組織生產(chǎn)藥物蛋白指用基因工程的方法,使外源基因得到高效表達(dá)的菌類(lèi)細(xì)胞株系受體基因結(jié)構(gòu)與人類(lèi)基因結(jié)構(gòu)差異動(dòng)物基因結(jié)構(gòu)與人類(lèi)的基因結(jié)構(gòu)基本相同細(xì)菌和酵母菌的基因結(jié)構(gòu)與人類(lèi)有較大差異基因表達(dá)合成的藥物蛋白與天然蛋白質(zhì)相同細(xì)菌合成的藥物蛋白可能沒(méi)有活性受體細(xì)胞動(dòng)物受精卵微生物細(xì)胞目的基因?qū)敕绞斤@微注射法感受態(tài)細(xì)胞法(3)乳腺生物反應(yīng)器的特點(diǎn):活性高,成本低,易提純,產(chǎn)量高。2.基因治療:(1)實(shí)質(zhì):正常基因表達(dá)掩蓋病變基因的表達(dá),達(dá)到治療疾病的目的。(2)過(guò)程。以治療復(fù)合型免疫缺陷癥為例:(3)治療途徑的異同點(diǎn):比較體外基因治療體內(nèi)基因治療不同點(diǎn)操作復(fù)雜,但效果較為可靠方法較簡(jiǎn)單,但效果難以控制相同點(diǎn)都是將外源基因?qū)氚屑?xì)胞,以糾正缺陷基因,目前兩種方法都處于初期臨床試驗(yàn)階段(4)基因診斷與基因治療的比較:項(xiàng)目方法備注基因診斷制作相應(yīng)探針,利用DNA分子雜交原理,快速、準(zhǔn)確檢測(cè)人類(lèi)某種疾病臨床應(yīng)用階段基因治療把健康的外源基因?qū)胗谢蛉毕莸募?xì)胞中,達(dá)到治療疾病的目的僅處于初期的臨床試驗(yàn)階段【易錯(cuò)提醒】基因治療時(shí)正常基因沒(méi)有改變病變基因的表達(dá)途徑在基因治療的過(guò)程中,正常基因、病變基因都可以表達(dá),只是正?；虻谋磉_(dá)掩蓋了病變基因控制的性狀,使病人表現(xiàn)正常,最終達(dá)到治療疾病的目的。【選修對(duì)接必修】對(duì)接必修3:免疫調(diào)節(jié)(1)吞噬細(xì)胞既參與非特異性免疫,又參與特異性免疫;T淋巴細(xì)胞既參與體液免疫,又參與細(xì)胞免疫。(2)免疫預(yù)防與免疫治療的區(qū)別:項(xiàng)目時(shí)間注射的物質(zhì)目的免疫預(yù)防病原體感染前的預(yù)防疫苗(經(jīng)處理的抗原)激發(fā)機(jī)體自身免疫反應(yīng),產(chǎn)生抗體和記憶細(xì)胞免疫治療病原體感染后的治療抗體、淋巴因子、血清等直接清除病原體或產(chǎn)生的毒素,使患者恢復(fù)健康據(jù)報(bào)道,研究人員提取了重癥聯(lián)合免疫缺陷患兒的骨髓,插入目的基因拷貝,將修飾的細(xì)胞重新輸回患者體內(nèi)。最終結(jié)果令人驚嘆:經(jīng)過(guò)治療,16名患兒中有14名免疫系統(tǒng)得到了修復(fù),還有很多基本治愈,這是基因治療成功的典型案例。理論上,基因治療可以治愈很多人類(lèi)遺傳疾病。但科研人員實(shí)施安全有效的基因治療卻并非易事,他們面臨許多挑戰(zhàn),首先要明確患病的遺傳基礎(chǔ),其次要尋找合適的載體作用于機(jī)體的發(fā)病組織,同時(shí)還要能避免意外的后果。根據(jù)以上材料,回答下列問(wèn)題:(1)基因治療屬于____________(生物技術(shù))的應(yīng)用范疇,這種技術(shù)的變異原理是______________。

(2)基因治療常選用逆轉(zhuǎn)錄病毒作為目的基因載體,但需敲除病毒的包裝蛋白基因,原因是________________________________________。

(3)構(gòu)建基因表達(dá)載體后,可直接將其轉(zhuǎn)入患者體內(nèi)受體細(xì)胞,也可在體外__________________,形成重組細(xì)胞,經(jīng)體外培養(yǎng)后再輸入患者體內(nèi)。體外培養(yǎng)重組細(xì)胞的條件包括____________________________________。

(4)從遺傳物質(zhì)變化和免疫調(diào)節(jié)角度看,基因治療可能導(dǎo)致的意外后果分別是__________________________________________________________________。

【解題關(guān)鍵】基因治療利用的原理是基因重組,成功的關(guān)鍵在于將目的基因整合到人體的染色體DNA上并能夠表達(dá)?！窘馕觥?1)基因治療屬于基因工程的應(yīng)用范疇,原理是基因重組。(2)基因治療過(guò)程中,獲得目的基因后,需構(gòu)建基因表達(dá)載體,以保證目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)順利表達(dá)并發(fā)揮作用。以病毒作為基因的載體,需使目的基因高效轉(zhuǎn)移并有效表達(dá),而其不斷繁殖的特性必須消除。敲除病毒的包裝蛋白基因,就是不讓病毒合成相應(yīng)蛋白進(jìn)行繁殖。(3)基因表達(dá)載體構(gòu)建后,可通過(guò)兩種途徑發(fā)揮作用:一是直接將表達(dá)載體導(dǎo)入患者體內(nèi)的受體細(xì)胞,二是在體外將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞,形成重組細(xì)胞,在體外進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)后輸入患者體內(nèi)。體外細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)要提供的條件包括:無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境,營(yíng)養(yǎng),適宜的溫度和pH,氣體環(huán)境。(4)基因治療可能導(dǎo)致的意外后果包括:基因表達(dá)載體整合時(shí)引起相關(guān)基因突變或細(xì)胞癌變,重組細(xì)胞輸入患者體內(nèi)時(shí)有可能引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)和并發(fā)癥。答案:(1)基因工程基因重組(2)防止病毒合成包裝蛋白進(jìn)行繁殖(3)將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境,營(yíng)養(yǎng),適宜的溫度和pH,氣體環(huán)境(4)細(xì)胞癌變(或基因突變)、免疫排斥(并發(fā)癥)【誤區(qū)警示】(1)目的基因需要構(gòu)建表達(dá)載體后才可導(dǎo)入受體細(xì)胞,不可直接將目的基因?qū)搿?2)基因治療常選用逆轉(zhuǎn)錄病毒作為目的基因載體,便于將目的基因整合到受體細(xì)胞染色體DNA上。(3)病毒作載體時(shí),為防止病毒合成包裝蛋白進(jìn)行繁殖,務(wù)必敲除其包裝蛋白基因。1.動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器是一項(xiàng)利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的乳腺代替?zhèn)鹘y(tǒng)的生物發(fā)酵,進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)可供治療人類(lèi)疾病或用于保健的活性蛋白質(zhì)的現(xiàn)代生物技術(shù)。目前科學(xué)家已在牛和羊等動(dòng)物的乳腺生物反應(yīng)器中表達(dá)出了抗凝血酶、血清白蛋白、生長(zhǎng)激素等重要藥品。大致過(guò)程如圖所示:下列有關(guān)說(shuō)法,錯(cuò)誤的是 ()A.通過(guò)③形成的重組質(zhì)粒除了具有人的藥用蛋白基因之外,還要有啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因B.④通常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法C.在轉(zhuǎn)基因母牛的乳腺細(xì)胞中人的藥用蛋白基因才會(huì)得以表達(dá),因此可以從乳汁中提取藥物D.該技術(shù)生產(chǎn)藥物的優(yōu)點(diǎn)是產(chǎn)量高、質(zhì)量好、易提取【解析】選B。要讓藥用蛋白基因在乳腺細(xì)胞內(nèi)表達(dá)并分泌含藥物的乳汁,重組質(zhì)粒上必須具有人的藥用蛋白基因、啟動(dòng)子和終止子等調(diào)控組件,A項(xiàng)正確;轉(zhuǎn)基因動(dòng)物通常利用的受體細(xì)胞是受精卵,采用顯微注射技術(shù),B項(xiàng)錯(cuò)誤;只有轉(zhuǎn)基因母牛到達(dá)泌乳期,乳腺細(xì)胞才會(huì)表達(dá)相應(yīng)的藥用蛋白基因,乳汁中才會(huì)含有藥物,C項(xiàng)正確;從乳汁里提取藥物,優(yōu)點(diǎn)突出,使動(dòng)物本身成為“批量生產(chǎn)藥物的工廠”,D項(xiàng)正確。2.(2021·廣東適應(yīng)性測(cè)試節(jié)選)CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)可以按照人們的意愿精準(zhǔn)剪切、改變?nèi)我獍谢虻倪z傳信息,對(duì)該研究有突出貢獻(xiàn)的科學(xué)家被授予2020年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。我國(guó)科學(xué)家領(lǐng)銜的團(tuán)隊(duì)利用CRISPR/Cas9等技術(shù),將人的亨廷頓舞蹈病致病基因(HTT基因)第1外顯子(其中含150個(gè)CAG三核苷酸重復(fù)序列)“敲入”豬基因組內(nèi),獲得了人-豬“鑲嵌”HTT基因,利用胚胎工程技術(shù)成功地構(gòu)建了亨廷頓舞蹈病的動(dòng)物模型。回答下列問(wèn)題:(1)PCR技術(shù)是獲得人HTT基因常用的方法,制備PCR反應(yīng)體系時(shí),向緩沖溶液中分別加入人HTT基因模板、4種脫氧核糖核苷酸及________等,最后補(bǔ)足H2O。

(2)CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)中,SgRNA是根據(jù)靶基因設(shè)計(jì)的引導(dǎo)RNA,準(zhǔn)確引導(dǎo)Cas9切割與SgRNA配對(duì)的靶基因DNA序列,由此可見(jiàn),Cas9在功能上屬于________酶。與CRISPR/Cas9相比,限制酶的特性決定了其具有____________________________的局限性。

(3)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,為