苦苣菜總黃酮提取工藝的優(yōu)化及鑒別

第八屆“挑戰(zhàn)杯”甘肅省大學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品競(jìng)賽序號(hào)：編碼：第八屆“挑戰(zhàn)杯”甘肅省大學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品競(jìng)賽作品申報(bào)書作品名稱：苦苣菜總黃酮提取工藝的優(yōu)化及鑒別學(xué)校全稱：天水師范學(xué)院申報(bào)者姓名（集體名稱）馬靜靜類別：√自然科學(xué)類學(xué)術(shù)論文哲學(xué)社會(huì)科學(xué)類社會(huì)調(diào)查報(bào)告和學(xué)術(shù)論文科技發(fā)明制作A類科技發(fā)明制作B類

說(shuō)明1．申報(bào)者應(yīng)在認(rèn)真閱讀此說(shuō)明各項(xiàng)內(nèi)容后按要求詳細(xì)填寫。2．申報(bào)者在填寫申報(bào)作品情況時(shí)只需根據(jù)個(gè)人項(xiàng)目或集體項(xiàng)目填寫A1或A2表，根據(jù)作品類別（自然科學(xué)類學(xué)術(shù)論文、哲學(xué)社會(huì)科學(xué)類社會(huì)調(diào)查報(bào)告和學(xué)術(shù)論文、科技發(fā)明制作）分別填寫B(tài)1、B2或B3表。所有申報(bào)者可根據(jù)情況填寫C表。3．表內(nèi)項(xiàng)目填寫時(shí)一律用鋼筆或打印，字跡要端正、清楚，此申報(bào)書可復(fù)制。4．序號(hào)、編碼由“競(jìng)賽組委會(huì)填寫。5．學(xué)術(shù)論文、社會(huì)調(diào)查報(bào)告及所附的有關(guān)材料必須是中文（若是外文，請(qǐng)附中文本），請(qǐng)以4號(hào)楷體打印在A4紙上，附于申報(bào)書后，字?jǐn)?shù)在8000字左右（文章版面尺寸14.5×22cm）。6．每個(gè)學(xué)校選送參加競(jìng)賽的作品總數(shù)不得超過(guò)30件，每人限報(bào)一件。研究生的作品不得超過(guò)作品總數(shù)的1/2，其中，博士研究生的作品不得超過(guò)3件。7．作品申報(bào)書須按要求由各校競(jìng)賽組織協(xié)調(diào)機(jī)構(gòu)統(tǒng)一報(bào)送。8．其他參賽事宜請(qǐng)向本屆競(jìng)賽組織協(xié)調(diào)機(jī)構(gòu)咨詢。9．報(bào)送地址：第八屆“挑戰(zhàn)杯”甘肅省大學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品競(jìng)賽組委會(huì)秘書處辦公室（蘭州大學(xué)團(tuán)委）聯(lián)系人：姚志海王永仁聯(lián)系電話：（0931）52927638912914傳真：（0931）8912684地址：蘭州市天水南路222號(hào)蘭州大學(xué)團(tuán)委郵政編碼：730000A1.申報(bào)者情況（個(gè)人項(xiàng)目）說(shuō)明：1、必須由申報(bào)者本人按要求填寫，申報(bào)者情況欄內(nèi)必須填寫個(gè)人作品的第一作者（承擔(dān)申報(bào)作品60%以上的工作者）；2、本表中的學(xué)籍管理部門簽章視為對(duì)申報(bào)者情況的確認(rèn)。申報(bào)者情況姓名馬靜靜性別女出生年月1987.8學(xué)校全稱天水師范學(xué)院專業(yè)生物科學(xué)現(xiàn)學(xué)歷本科年級(jí)四學(xué)制4年入學(xué)時(shí)間2007.9作品全稱苦苣菜總黃酮提取工藝的優(yōu)化及鑒別畢業(yè)論文題目紅茂草的抑菌機(jī)理通訊地址甘肅省天水市天水師范學(xué)院57號(hào)信箱郵政編碼741000聯(lián)系電住地聯(lián)系地址天水師范學(xué)院博聞公寓五單元202郵政編碼741000單位電話合作者情況姓名性別年齡學(xué)歷所在單位齊曉燕女22本科天水師范學(xué)院高健男22本科天水師范學(xué)院資格認(rèn)定學(xué)校學(xué)籍管理部門意見(jiàn)是否為2011年7月1日前正式注冊(cè)在校的全日制非成人教育、非在職的各類高等院校中國(guó)籍學(xué)生（含?？粕⒈究粕脱芯可??！淌恰醴袢羰牵鋵W(xué)號(hào)為：272010322（部門蓋章）年月日指導(dǎo)教師意見(jiàn)（1-2名）本作品是否為課外學(xué)術(shù)科技或社會(huì)實(shí)踐活動(dòng)成果√是□否指導(dǎo)教師簽名：年月日B1．申報(bào)作品情況（自然科學(xué)類學(xué)術(shù)論文）說(shuō)明：1、必須由申報(bào)者本人填寫；2、本部分中的科研管理部門簽章視為對(duì)申報(bào)者所填內(nèi)容的確認(rèn)；3、作品分類請(qǐng)按作品的學(xué)術(shù)方向或所涉及的主要學(xué)科領(lǐng)域填寫。4、碩士研究生、博士研究生作品不在此列。作品全稱作品分類（D）A、機(jī)械與控制（包括機(jī)械、儀器儀表、自動(dòng)化控制、工程、交通、建筑等）B、信息技術(shù)（包括計(jì)算機(jī)、電信、通訊、電子等）C、數(shù)理（包括數(shù)學(xué)、物理、地球與空間科學(xué)等）D、生命科學(xué)（包括生物、農(nóng)學(xué)、藥學(xué)、醫(yī)學(xué)、健康、衛(wèi)生、食品等）E、能源化工（包括能源、材料、石油、化學(xué)、化工、生態(tài)、環(huán)保等）作品撰寫的目的和基本思路本文重點(diǎn)研究提取苦苣菜中總黃酮的最佳提取工藝,對(duì)蘆丁提取材料的選擇具有一定的指導(dǎo)意義。為開(kāi)發(fā)和利用苦苣菜中有效成分提供理論依據(jù)。本文采用單因素和正交實(shí)驗(yàn)方法探討乙醇提取法提取苦苣菜中總黃酮的最佳提取工藝,并且通過(guò)對(duì)黃酮類進(jìn)行鑒別，得出蘆丁的含量極高作品的科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處采用科學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法（如單因素控制變量，設(shè)立對(duì)照實(shí)驗(yàn)等）和嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)對(duì)所研究的問(wèn)題進(jìn)行了科學(xué)的實(shí)驗(yàn)，并對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行科學(xué)的處理，得出科學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。本文通過(guò)對(duì)HPLC流動(dòng)相來(lái)測(cè)定苦苣菜中蘆丁的含量,該法具有樣品處理簡(jiǎn)單、分析周期短、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。作品的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義通過(guò)研究苦苣菜中總黃酮的最佳提取工藝,為開(kāi)發(fā)和利用苦苣菜中有效成分提供理論依據(jù)。通過(guò)研究苦苣菜中總黃酮的最佳提取工藝，并且對(duì)黃酮類進(jìn)行鑒別，對(duì)蘆丁提取材料的選擇具有一定的指導(dǎo)意義。學(xué)術(shù)論文文摘通過(guò)單因素分析及正交試驗(yàn)探討了提取苦苣菜中總黃酮的最佳條件，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，總黃酮的最佳提取條件為：乙醇濃度為30%、料液比為1：20、提取溫度為60℃、提取時(shí)間為1.5h，總黃酮的含量可達(dá)6.141mg/g，本實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，平均回收率為97.94%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為4.87%。通過(guò)對(duì)苦苣菜粉末中總黃酮的鑒別，得出蘆丁的含量達(dá)到2.528mg/g作品在何時(shí)、何地、何種機(jī)構(gòu)舉行的會(huì)議上或報(bào)刊上發(fā)表、所獲獎(jiǎng)勵(lì)及鑒定結(jié)果無(wú)請(qǐng)?zhí)峁?duì)于理解、審查、評(píng)價(jià)所申報(bào)作品具有參考價(jià)值的現(xiàn)有技術(shù)及技術(shù)文獻(xiàn)的檢索目錄1．JiaZ，ZhangPF，TaoBQ,etal.StudyonflavonesoftheflowerofJuglansregia[J].ChinPharmJ,2009,44(7):496-497.2．NissimGarti,KiyotakaSsto1Crystallizationandpolymorphismoffatsandfattyacids[M]1NewYork:MarcelDekkerINC,1988.3．周桂芬,張涵,呂圭源.苦苣菜中黃酮類化合物的含量測(cè)定[J]中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2008，26(1)：218-220.4．鄭和權(quán),周守標(biāo)．馬蘭總黃酮提取工藝優(yōu)化及不同部位含量測(cè)定[J].安康學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，34（11）：185-189．5．湯波,劉火安,賈云．竹葉總黃酮提取物的分離純化方法的研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19（10）：2419-2420．6．蘇健,王寶琴.銀杏葉及其制劑中黃酮苷及內(nèi)酯類活性成分含量測(cè)定方法研究進(jìn)展[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2007,26（4）：189-202．申報(bào)材料清單（申報(bào)論文一篇，相關(guān)資料名稱及數(shù)量）申報(bào)研究論文一篇科研管理部門簽章年月日C．當(dāng)前國(guó)內(nèi)外同類課題研究水平概述說(shuō)明：1、申報(bào)者可根據(jù)作品類別和情況填寫；2、填寫此欄有助于評(píng)審。黃酮類化合物是以黃酮（2-苯基色原酮）為母核而衍生的一類黃色色素。其中包括黃酮的同分異構(gòu)體及其氫化的還原產(chǎn)物。黃酮類化合物在植物界分布很廣，在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷類或碳糖基的形式存在，也有以游離形式存在的。黃酮類化合物中有藥用價(jià)值的化合物很多，如槐米中的蘆丁和陳皮中的陳皮苷，能降低血管的脆性，及改善血管的通透性、降低血脂和膽固醇，用于防治老年高血壓和腦溢血。由銀杏葉制成的舒血寧片含有黃酮和雙黃酮類，用于冠心病、心絞痛的治療。全合成的乙氧黃酮又名心脈舒通或立可定，有擴(kuò)張冠狀血管、增加冠脈流量的作用。許多黃酮類成分具有止咳、祛痰、平喘、抗菌的活性。護(hù)肝，解肝毒、抗真菌、治療急、慢性肝炎，肝硬化。Kim等首先報(bào)道銀杏雙黃酮可明顯減輕小鼠關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)。早期研究發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶9可直接降解骨與軟骨,促進(jìn)血管再生,與RA關(guān)節(jié)骨與軟骨的破壞關(guān)系密切在關(guān)節(jié)軟骨破壞中也起重要作用。從此黃酮類化合物開(kāi)發(fā)應(yīng)用才得到較大發(fā)展。近幾年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了大量研究，劉利和潘一樂(lè)在2009年春秋?！叭~總黃酮含量分析及提取工藝優(yōu)化”一文中采用分光光度法測(cè)定了不同品種春、秋桑葉總黃酮含量，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，通過(guò)正交試驗(yàn)，優(yōu)化了桑葉總黃酮的提取工藝?？敌缕皆?009年在“新疆鎖陽(yáng)中總黃酮的提取工藝優(yōu)化及含量測(cè)定”一文中法以總黃酮含量為指標(biāo),以蘆丁為對(duì)照品,用分光光度法比較了回流法、超聲法、煎煮法從鎖陽(yáng)干燥肉質(zhì)莖中提取黃酮類化合物的提取效率,采用正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了超聲法的提取工藝。鄭和權(quán)和周守標(biāo)在2009年“馬蘭總黃酮提取工藝優(yōu)化及不同部位含量測(cè)定”一文中以馬蘭全株為材料運(yùn)用超聲波輔助法進(jìn)行黃酮類化合物的提取,采用正交試驗(yàn)法分析比較乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比例、水浴溫度和提取時(shí)間對(duì)總黃酮提取量的影響。他們都運(yùn)用不同的條件優(yōu)化了總黃酮的提取方法，探討了提取黃酮的最佳提取條件，使不同的物種中的總黃酮得到最大利用，為開(kāi)發(fā)和利用總黃酮提供了較好的理論依據(jù)。應(yīng)用范圍：1在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用：1）黃酮類化合物可以治療心腦血管系統(tǒng)的一些疾病，有降血脂、膽固醇的作用，還具有抑制血栓和擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈等作用，可用于治療高血壓、動(dòng)脈硬化。由銀杏葉制成的舒血寧片含有黃酮和雙黃酮類，用于冠心病、心絞痛的治療。2）另外，黃酮類化合物能增強(qiáng)機(jī)體的非特異免疫功能和體液免疫功能，黃酮類化合物可以通過(guò)對(duì)巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞（NK）、LAK細(xì)胞、細(xì)胞因子以及影響胸腺來(lái)進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)作用。3）黃酮類化合物抗菌抗病毒作用已經(jīng)得到醫(yī)藥界的肯定，這方面進(jìn)行的研究較多，如銀杏黃酮、槲皮素、桑色素、山奈酚、木樨草素和楊梅黃酮等均有抗病原微生物和抗病毒的作用。2黃酮類化合物在食品工業(yè)中的應(yīng)用1）天然甜味劑甜度為蔗糖的950倍，而且此兩種甜味劑回味無(wú)苦味，可直接用于各種食品，并具有保健作用。2）天然抗氧化劑研究表明，黃酮類化合物均具有較強(qiáng)的抗氧化能力。3）著色劑天然色素黃酮多呈黃色，同時(shí)又具有很寬的溶解性，既具有水溶性的黃酮類化合物，又有脂溶性的黃酮類化合物，所以完全可以根據(jù)食品加工的需要來(lái)選擇合適的黃酮類化合物作為著色劑。蕭偉祥等利用低檔的綠茶或茶末制取了純天然的茶黃色素和茶綠色素，并確定其中主要成分是黃酮類化合物。4）保健食品由于黃酮化合物具有多種保健功能，人們開(kāi)發(fā)出各種保健食品。3在化妝品行業(yè)中的應(yīng)用近幾年黃酮類化合物已經(jīng)得到很大的發(fā)展，目前國(guó)內(nèi)還沒(méi)有對(duì)苦苣菜中總黃酮提取工藝的研究報(bào)道，本文采用單因素和正交實(shí)驗(yàn)方法探討乙醇提取法提取苦苣菜中總黃酮的最佳提取工藝，為開(kāi)發(fā)和利用苦苣菜中有效成分提供理論依據(jù)。D．推薦者情況及對(duì)作品的說(shuō)明說(shuō)明：1、由推薦者本人填寫；2、推薦者必須具有中級(jí)專業(yè)技術(shù)職稱，其中一名必須具有高級(jí)以上專業(yè)技術(shù)職稱，并是與申報(bào)作品相同或相關(guān)領(lǐng)域的專家學(xué)者或?qū)I(yè)技術(shù)人員（教研組集體推薦亦可）；3、推薦者填寫此部分，既視為同意推薦；4、推薦者所在單位簽章僅被視為對(duì)推薦者身份的確認(rèn)。推薦者情況姓名王廷璞性別男年齡44職稱教授工作單位天水師范學(xué)院生命科學(xué)與化學(xué)學(xué)院通訊地址甘肅省天水市蓮?fù)ぢ?0號(hào)郵政編碼741000單位電話0938－8367717移動(dòng)電薦者所在單位簽章（簽章）年月日請(qǐng)對(duì)申報(bào)者申報(bào)情況的真實(shí)性作出闡述馬靜靜同學(xué)所呈交的論文，是經(jīng)過(guò)大量的文獻(xiàn)積累，在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的科研成果。論文數(shù)據(jù)真實(shí)可靠.請(qǐng)對(duì)作品的意義、技術(shù)水平、適用范圍及推廣前景作出您的評(píng)價(jià)黃酮類化合物作為天然植物中的一種有效成分,來(lái)源廣泛,藥理作用明顯，部分已進(jìn)入臨床使用,但提取工藝還需進(jìn)一步研究探討，本文通過(guò)對(duì)HPLC流動(dòng)相來(lái)測(cè)定苦苣菜中蘆丁的含量,該法具有樣品處理簡(jiǎn)單、分析周期短、重現(xiàn)性好，內(nèi)容真實(shí)，數(shù)據(jù)可靠，推薦參加大學(xué)生論文挑戰(zhàn)杯競(jìng)賽。其它說(shuō)明推薦者情況姓名趙菲佚性別男年齡38職稱副教授工作單位天水師范學(xué)院生命科學(xué)與化學(xué)學(xué)院通訊地址甘肅省天水市蓮?fù)ぢ?0號(hào)郵政編碼741000單位電話0938－8367717移動(dòng)電薦者所在單位簽章（簽章）年月日請(qǐng)對(duì)申報(bào)者申報(bào)情況的真實(shí)性作出闡述本論文所有數(shù)據(jù)均為申報(bào)學(xué)生在老師指導(dǎo)下完成，試驗(yàn)方法及過(guò)程參考已發(fā)表文獻(xiàn)及國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，試驗(yàn)設(shè)有對(duì)照及重復(fù)，數(shù)據(jù)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果真實(shí)可靠。請(qǐng)對(duì)作品的意義、技術(shù)水平、適用范圍及推廣前景作出您的評(píng)價(jià)本項(xiàng)目在參考已有的對(duì)苦苣菜總黃酮提取工藝的基礎(chǔ)之上，對(duì)影響其產(chǎn)率的各種因素做了優(yōu)化探討，以乙醇濃度、溫度、浸泡時(shí)間、料液比為考察因素，使用了正交設(shè)計(jì)方法，取得了對(duì)苦苣菜總黃酮提取的最優(yōu)因素組合。在該優(yōu)化條件下有著樣品前處理簡(jiǎn)單、提取時(shí)間短、產(chǎn)物成分穩(wěn)定的特點(diǎn)。本項(xiàng)目的完成對(duì)苦苣菜總黃酮的工業(yè)提取工藝具有一定的指導(dǎo)作用，有著較大的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。其它說(shuō)明學(xué)校組織協(xié)調(diào)機(jī)構(gòu)確認(rèn)并蓋章（團(tuán)委代章）年月日校主管領(lǐng)導(dǎo)或校主管部門確認(rèn)蓋章（蓋章）年月日E．組織委員會(huì)秘書處資格和形式審查意見(jiàn)組委會(huì)秘書處資格審查意見(jiàn)審查人（簽名）年月日組委會(huì)秘書處形式審查意見(jiàn)審查人（簽名）年月日組委會(huì)秘書處審查結(jié)果□合格□不合格負(fù)責(zé)人（簽名）年月日F.作品打印處苦苣菜總黃酮提取工藝的優(yōu)化及鑒別馬靜靜高健齊曉艷指導(dǎo)老師:王廷璞趙菲佚（天水師范學(xué)院生命科學(xué)與化學(xué)學(xué)院，甘肅天水741000）【摘要】通過(guò)單因素分析及正交試驗(yàn)探討了提取苦苣菜中總黃酮的最佳條件，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：總黃酮的最佳提取條件為，乙醇濃度為30%、料液比為1：20、提取溫度為60℃、提取時(shí)間為1.5h，總黃酮的含量可達(dá)6.141mg/g，本實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，平均回收率為97.94%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為4.87%。通過(guò)對(duì)苦苣菜粉末中總黃酮的鑒別，得出蘆丁的含量達(dá)到2.528mg/g?！娟P(guān)鍵詞】：苦苣菜;總黃酮;提取工藝;優(yōu)化;鑒別TheIdentiticationandoptimizationofprocessforextractingtotalflavonoidsinConchesOleraceusLMaJingJingQiXiaoYanGaoJianSupervisor:WangTingpuZhaoFeiyi(DepartmentofLifeScienceandchemistryofTianshuiNormalUniversity,Tianshui，Gansu741000)Abstrac:Inthispaper,theoptimalparametersforextractingtotalflavonoidsinConchesOleaeusLwereassaiedusingorthogonalexperimentaldesignofsignalfactor.Theresultsshowedthattheoptimalparametterswerecombinationof30%ethanolconcentration,1:10rationofsolidtoliquidand60℃temperatureofimergeextractfor1.5h.Theyieldoftotalfoavonoidswereupto6.141mg/gemployedthismethod.Moreover,thecontentofRutinintotalextractswerepresentedat2.528mg/g.Forthequalitycontrolofassay,thefidelityfactorandRSDwere97.94%and4.87%,respctively.Together,thisnovelassayissimpleandreproducibleandshoeweditspotentialapplicationsinindustry.keywords:SonchusOleraceusTotalflavonoidsExtractiontechnologyOptimizationIdentification苦苣菜(SonchusoleraceusL1)系菊科(Composite)苦苣屬(Sonchus)1～2年生的草本植物。味苦,性寒[1]。具有清熱解毒,涼血止血等作用。主治腸炎、痢疾、黃疸、咽喉腫痛、吐血、尿血等癥[2]苦苣菜的水提液對(duì)動(dòng)物耐缺氧和急性心肌缺血具有明顯的保護(hù)作用[3]?？嘬牟丝傸S酮對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝損傷具有明顯的保護(hù)作用,苦苣菜酸性提取物具有抗腫瘤作用[4]民間常將其用于治療黃疸性肝炎,而且資源豐富,有重要的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。近年來(lái)，苦苣菜這一資源已受到廣泛的重視,被制成消暑保健食品、罐頭等,暢銷國(guó)內(nèi)外，并躋身于美國(guó)市場(chǎng)上最暢銷的“十大天然藥用植物”之一[5]，具有廣泛的發(fā)展前景。黃酮類化合物是廣泛存在于自然界的一大類化合物，具有增強(qiáng)心血管功能、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力、延緩衰老等作用[4，5],黃酮類化合物還具有降血脂、止血、抑制血小板聚集等多種藥理作用。因而廣泛用于醫(yī)藥、食品等行業(yè),具有極廣的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。因此對(duì)苦苣菜中的總黃酮進(jìn)行測(cè)定、提取有一定的意義。目前國(guó)內(nèi)還沒(méi)有對(duì)苦苣菜中總黃酮提取工藝的研究報(bào)道，本文采用單因素和正交實(shí)驗(yàn)方法探討乙醇提取法提取苦苣菜中總黃酮的最佳提取工藝，為開(kāi)發(fā)和利用苦苣菜中有效成分提供理論依據(jù)。以前蘆丁的測(cè)定方法報(bào)道中多利用其顯色反應(yīng)用比色法測(cè)定[6]，但存在操作繁,易受干擾及顯色體系不夠穩(wěn)定的缺點(diǎn)。本文通過(guò)對(duì)HPLC流動(dòng)相[7]：甲醇：水：乙酸=42:57:1。流速：1ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：368nm;樣品進(jìn)樣量：20ul。來(lái)測(cè)定苦苣菜中蘆丁的含量，該法具有樣品處理簡(jiǎn)單、分析周期短、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn),而且苦苣菜中含量達(dá)2.528mg/g。1材料與方法1．1材料1.1.1實(shí)驗(yàn)材料:苦苣菜在2009年2月10日1.1.2試劑:蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（南京替斯艾么生化試劑廠出品）；無(wú)水乙醇；硝酸亞硝酸鹽（AR）；氫氧化鈉（AR）；三氧化鋁(AR)；色譜純甲醇1.1.3儀器:756紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠)；Biofuge臺(tái)式高速離心機(jī)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司)；電熱恒溫水浴鍋(北京泰克儀器有限公司)；島津分析天平（島津制作所）；DS-1高速組織搗碎機(jī)（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）；Agilent-1100型液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司制造）1.2．方法1.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立[8]精確稱取蘆丁對(duì)照品10mg，置于25ml容量瓶中，用30%的乙醇在60℃恒溫水浴溶解并定容，精確吸取0.0ml；0.2ml；0.4ml；0.6ml；0.8ml；1.0ml置于容量瓶中，加50%NaNO2溶液0.3ml，放置50min，再加入10%的Al(NO3)3溶液0.3ml，放置5min，加4%NAOH溶液4.0ml，加水至刻度，搖勻，放置30min，分別再510nm處測(cè)定不同濃度下的吸收值作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到蘆丁濃度與吸光度A關(guān)系曲線如下:C=6.430A+0.012R=0.998如圖所示：(實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)附表表（1）圖1直線回歸方程曲線圖Fig.1Thecurveoflinearregressionequation12.2苦苣菜總黃酮的制備和含量測(cè)定[9]準(zhǔn)確稱取1.0g研細(xì)的苦苣菜末，加30ml30%乙醇，60℃下浸泡1h，趁熱抽濾，濾渣再加入20ml溶劑；浸泡0.5h，抽濾，合并濾液。3500r/min離心20min，然后取濾液用乙醇定容到50ml備用，測(cè)定其含量[10]（方法同標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的方法測(cè)定）,計(jì)算提取率e（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)附表表（2（Y黃酮類物質(zhì)的質(zhì)量濃度mg/ml；V原提取液體積；W苦苣菜用量a稀釋倍數(shù)）根據(jù)所測(cè)定溶液的吸光度，用曲線方程計(jì)算出Y。 1.2.3回收實(shí)驗(yàn)[11]取已知含量的苦苣菜供試樣品溶液6份,每份分別加入一定量蘆丁對(duì)照品溶液,按供試樣品溶液的制備方法進(jìn)行含量測(cè)定，回收率為97.98%，結(jié)果表明該方法加樣回收率良好。（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)附表表3）*100%1.2.4重現(xiàn)率試驗(yàn)取苦苣菜粉末1g。按前述方法提取后加入標(biāo)準(zhǔn)蘆丁對(duì)照品2ml，同前樣品測(cè)定方法操作按標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測(cè)定吸光度，求出總黃酮含量，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)率高，RSD=4.87%,試驗(yàn)方法可靠。（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)附表表4）1.2.5乙醇提取法的單因素及正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)通過(guò)對(duì)乙醇提取法提取工藝中乙醇濃度、料液比、提取溫度，提取時(shí)間等影響苦苣菜中總黃酮提取量的因素進(jìn)行單因素及正交實(shí)驗(yàn),確定最佳的工藝參數(shù)。表1正交試驗(yàn)因素及水平表Table1Factorsandlevelsoforthogonalexperiment水平StandardA乙醇濃度EthanolConcentrationB溫度TemperatureC時(shí)間TimeD料液比Solid-liquidratio115%601h1：10230%701.5h1：20345%802h1：301.2.6定性實(shí)驗(yàn)------總黃酮的鑒別(1)顏色反應(yīng)1)濃氨水反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，將濾紙?jiān)跐獍彼戏窖?.5min，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點(diǎn)。2)乙酸鎂反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加10%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點(diǎn)3)HCL-Mg反應(yīng)：取乙醇提取液1ml于試管中加Mg，在加入濃鹽酸數(shù)滴，1～2min內(nèi)微熱即可顯示紫紅色。(2)紙層析取樣品溶液10ml點(diǎn)在濾紙上，用正丁醇：醋酸：水=4：1：5為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)5h，取出晾干，噴10%氯化鋁乙醇，吹干后紫外光下，可見(jiàn)熒光斑點(diǎn)，其中A,B,C為實(shí)驗(yàn)組，O為對(duì)照組。X為未知斑點(diǎn)，用濃氨水顯色處理。(3)苦苣菜中黃酮類（蘆?。┑母咝б合嗌V測(cè)定1)配制樣品溶液：提取的苦苣菜總黃酮，加30%的乙醇定容到100ml，用孔徑為45um的微孔濾膜過(guò)濾的HPLC樣品液。2)配制對(duì)照品溶液：稱10mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，用30%的乙醇定容到50ml對(duì)照液。3)選擇色譜條件：色譜柱C18(4.6mm*200mm*5um)；柱溫：室溫；流動(dòng)相：甲醇：水：乙酸=42:57：1；流速：1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：368nm樣品進(jìn)樣量：20ul。4)配制線性關(guān)系：取標(biāo)準(zhǔn)品5mg溶于12.5ml30%的乙醇中，得第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液0.4mg/ml。再依次稀釋兩倍，依次配制5個(gè)對(duì)照品應(yīng)用液。在色譜條件下進(jìn)樣2ul2次，求出平均峰面積。5)精密度試驗(yàn)以標(biāo)準(zhǔn)曲線中間濃度0.100mg/ml(2.0μg/20μl)為樣品,在色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，分析測(cè)定蘆丁的含量，記錄保留時(shí)間,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果表明,保留時(shí)間與蘆丁含量的RSD均在5%以下，表明本實(shí)驗(yàn)條件具有良好的重現(xiàn)性,色譜條件合理。6)重復(fù)性試驗(yàn)分別五次吸取苦苣菜總黃酮類樣品，每次進(jìn)樣20ul，打印高效液相色譜圖譜，統(tǒng)樣品峰高，列表計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方差（RSD）分析實(shí)驗(yàn)可重復(fù)型，結(jié)果如表（5）本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性高，RSD=2.286%，試驗(yàn)方法可靠。2結(jié)果與分析2.1.單因素試驗(yàn)2.1.1乙醇濃度對(duì)提取的影響準(zhǔn)確稱取6份（1.00g）苦苣菜粉末，分別用15%，30%，45%，60%，75%，90%的乙醇溶液，以1:50的料液比，浸泡相同量的樣品1.5小時(shí)。過(guò)濾，定容到50ml，測(cè)定其吸光度A值,結(jié)果如圖(1)所示（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)附表表（5））圖2乙醇濃度對(duì)提取的影響Fig.2Effectofethanolconcentrationonextraction從圖標(biāo)可得知：隨著乙醇濃度的提高，黃酮類物質(zhì)的提取量增加（15%-30%），當(dāng)乙醇濃度是30%時(shí)，黃酮得率最高。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)隨著乙醇濃度的增加，黃酮類化合物溶解度減小，同時(shí)一些醇溶性雜質(zhì)，色素，親脂性的成分溶出量增加，這些化合物競(jìng)爭(zhēng)同乙醇，水分子結(jié)合，從而導(dǎo)致黃酮得率下降，并且不利于黃酮類物質(zhì)的進(jìn)一步提純[13，14]。因此選30%的乙醇濃度浸泡最為合適。2.1.2準(zhǔn)確稱取6份（0.10g）苦苣菜粉末，用30%的乙醇溶液，以1:50的料液比，分別浸泡0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h,過(guò)濾，定容到50ml，測(cè)定其吸光度A值。結(jié)果如圖（2）所示（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)附表表（6））圖3提取時(shí)間對(duì)浸泡的影響Fig.3Effectofextractiontimeonconcentration從圖表可以得出隨著浸泡時(shí)間的延長(zhǎng)，黃酮得率增加，當(dāng)浸泡時(shí)間是1.5h時(shí)，黃酮得率達(dá)最大，延長(zhǎng)浸泡時(shí)間，黃酮得率下降，但隨著提取時(shí)間的繼續(xù)延長(zhǎng),總黃酮含量反而降低,可能是由于提取時(shí)間太長(zhǎng),有部分乙醇揮發(fā)而導(dǎo)致沸點(diǎn)逐漸增大,從而破壞某些黃酮類化合物[15]。故從提取工藝的角度來(lái)看，我們選擇1.5h左右作為考慮對(duì)象。2.1.3料液比對(duì)提取的影響準(zhǔn)確稱取6份（1.00g）苦苣菜粉末，分別以料液比（1：10，1：20，1：30，1：40，1：50，1：60）以30%的乙醇提取，提取時(shí)間1.5h，測(cè)定其吸光度A，結(jié)果如圖所示：（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)附表表7）圖4料液比對(duì)提取的影響Fig.4Effectofsolid-liquidratioonextraction從圖表可以得出隨著料液比的增加，黃酮得率下降，當(dāng)料液比為1：30以上時(shí)，增加料液比，黃酮得率略有下降，考慮到生產(chǎn)成本，料液比以1：10為佳。2.1.4浸提溫度對(duì)提取的影響準(zhǔn)確稱取6份（0.10g）苦苣菜粉末，回流溫度分別為30℃，40℃，50℃，60℃，70℃，80℃,以1：10的料液比浸泡1.5h,趁熱過(guò)濾，濾液稀釋5倍，測(cè)定其吸光度A值。結(jié)果如圖所示（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)附表表8）圖左側(cè)的字看不清。要在原圖上修改圖左側(cè)的字看不清。要在原圖上修改圖5浸提溫度對(duì)提取的影響Fig.5Effectoftemperatureonextraction從圖表可以得出隨著溫度升高，黃酮得率也在升高，60℃達(dá)到最高可能是過(guò)高高溫有利于黃酮物質(zhì)的溶出，而且過(guò)高的溫度會(huì)造成一些不穩(wěn)定黃酮類化合物的分解，故選擇60℃左右為宜。2.2提取方法的正交設(shè)計(jì)方案，得出結(jié)果（生物統(tǒng)計(jì)）（四因素水平）在試驗(yàn)中，由于各因素之間相互交叉影響，因此為全面考慮乙醇提取法的工藝參數(shù),根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果,確定以乙醇濃度、回流時(shí)間、回流溫度、料液比四種因素進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)[17]，以測(cè)定苦苣菜樣品中的總黃酮的含量。試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)下（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)附表表9）表2正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果Table2Designoforthographicexperiment試驗(yàn)水平總黃酮（mg/g）TestLevelsTotalflavonoidsABCD1156011:102.569215701.51:202.213158021:305.114430601.51:305.1075307021:101.9786308011:206.1417456021:204.6088457011:302.335945801.51:101.524T13.2983.4283.6822.024T24.062.1742.9474.32T32.8224.263.94.185R值1.2382.0860.9532.296以上單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，確定提取次數(shù)為三次，對(duì)影響苦苣菜中總黃酮的提取效果因素上進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)，并對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果如上表，從極差的分析結(jié)果來(lái)看，影響苦苣菜中總黃酮提取效率的因素主次順序是：D>B>A>C,最佳組合A2B3C1D2,即乙醇濃度為30%，溫度為80℃，提取時(shí)間為1h,料液比為1：20。因?yàn)樽罴呀M合不在試驗(yàn)設(shè)計(jì)中，需做驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。2.3驗(yàn)證試驗(yàn)按上面優(yōu)化工藝A2B3C1D2平行提取三次，平均得率為6.065mg/g,表綜上所述得出提取苦苣菜總黃酮的最佳提取工藝，既乙醇濃度為30%，提取溫度為80℃，提取時(shí)間為1h,料液比為1：20。2.4定性檢測(cè)結(jié)果對(duì)苦苣菜中提取樣品分別進(jìn)行顯色、還原、絡(luò)合反應(yīng)表3黃酮類化合物的定性鑒定項(xiàng)目Item反應(yīng)類型顯色反應(yīng)還原反應(yīng)絡(luò)合反應(yīng)（colorreaction）(reductionreaction)(complexreaction)試劑濃氨水Hcl-MgMg(Ac)2現(xiàn)象黃褐色紫紅色黃綠色由以上特征可以判斷樣品中可能含有黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇類化合物。Table(3)Qualitativeidentificationoflavonoidscompound2.5紙層析的定性分析圖6紙層析圖譜Fig6Thefingerprintoffilter-paperchromatography結(jié)果分析;粗黃酮的紙層析結(jié)果表明，苦苣菜黃酮紙層析展開(kāi)的主要斑點(diǎn)a和b的Rf值與蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品相同(Fro=0.57),說(shuō)明在該黃酮中,主要成分是蘆丁,圖中另有一微小斑點(diǎn)X與氨水顯色呈棕黃色,屬黃酮或酚類物質(zhì),具體成分尚待確定。A、B、C三種粗黃酮點(diǎn)樣并展開(kāi),A、B兩樣品均無(wú)拖尾現(xiàn)象,而樣品C嚴(yán)重拖尾,說(shuō)明其中雜質(zhì)過(guò)多。2.6苦苣菜中黃酮類（蘆?。┑母咝б合嗌V測(cè)定結(jié)果分析：以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)峰面積作回歸曲線，得回歸方程y=21264x+81.64，R2=0.993圖7回歸方程曲線圖Fig7Thecurveoflinearregressionequation在色譜條件測(cè)樣品中蘆丁的含量,含量為苦苣菜中總黃酮的55.44%,即2.525mg/g高效液相色譜蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品圖譜TheHPLCspectrogramofrutinstandard樣品高效液相色譜譜圖TheHPLCspectrogramofrutinsample結(jié)果分析測(cè)得樣品的峰面積是1260.58521，代入回歸方程得樣品中含蘆丁為0.055mg/ml，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的含量為0.1mg/ml。則苦苣菜中總黃酮含蘆丁為55.44%，含量豐富，是提取蘆丁的優(yōu)良材料，并且分布廣泛，取材方便，便宜實(shí)惠。圖譜中出現(xiàn)的tR，顯著性差異不大，色譜分離的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品峰形對(duì)稱,并與相鄰雜質(zhì)峰能夠達(dá)到基線分離，定量值準(zhǔn)確，值得探討及加深研究，并加以應(yīng)用。2.7精密度試驗(yàn)表4精密度試驗(yàn)Table4Theassayofprecision試驗(yàn)號(hào)(TestNo)標(biāo)準(zhǔn)品峰高(Standardpeakheight)1134.872138.953137.744140.535138.36平均值（X1）(mean)138.092X-X1-3.1240.861-0.3512.4390.271標(biāo)準(zhǔn)差（S）(Standarddeviation)0.248相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD,%)(Relativestandarddeviation)2.0762.8重復(fù)型試驗(yàn)表5重復(fù)型試驗(yàn)Table5Theassayofrepetition試驗(yàn)號(hào)12345樣品峰高(Standardpeakheight)95．39995.95297.964102.57101.34平均值（X1）(Mean)98.645X-X1-3.245-2.693-0.6813.2932.696標(biāo)準(zhǔn)差（S）(Standarddeviation)0.239相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(Relativestandarddeviation)(RSD,%)2.2863小結(jié)(1)詳細(xì)研究了苦苣菜總黃酮類化合物的提取工藝，為開(kāi)發(fā)利用該資源提供有益的參考。(2)通過(guò)單因素分析及正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:苦苣菜中含有豐富的黃酮類化合物,在乙醇熱浸提提苦苣菜中的黃酮類化合物時(shí)，乙醇濃度是影響黃酮類化合物提取率的關(guān)鍵因素，影響苦苣菜中黃酮類物質(zhì)提取量的因素主次順序?yàn)?乙醇濃度>提取溫度>提取時(shí)間>料液比。測(cè)定了苦苣菜中總黃酮的最佳提取工藝條件為:乙醇濃度30%,提取溫度60℃,料液比為1:20，提取時(shí)間為1.0h。在最佳的提取工藝條件下測(cè)得苦苣菜中總黃酮含量6.141mg/g(3)通過(guò)對(duì)HPLC流動(dòng)相：甲醇：水：乙酸=42:57;1.流速：1ml/min.檢測(cè)波長(zhǎng)：368nm樣品進(jìn)樣量：20ul.來(lái)測(cè)定苦苣菜中蘆丁,該法具有樣品處理簡(jiǎn)單、分析周期短、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，而且苦苣菜中含量達(dá)2.258mg/g,證明苦苣菜是提取蘆丁的最優(yōu)材料。4討論4.1正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:苦苣菜中含有豐富的黃酮類化合物，在乙醇熱浸提提苦苣菜中的黃酮類化合物時(shí),乙醇濃度是影響黃酮類化合物提取率的關(guān)鍵因素,影響苦苣菜中黃酮類物質(zhì)提取量的因素主次順序?yàn)?乙醇濃度>提取溫度>提取時(shí)間>料液比。測(cè)定了苦苣菜中總黃酮的最佳提取工藝條件為:乙醇濃度30%,提取溫度60℃,料液比為1∶20，回流時(shí)間為1.0h。在最佳的提取工藝條件下測(cè)得苦苣菜中總黃酮含量達(dá)6.141mg/g4.2黃酮類化合物是存在于自然界的一大類化合物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分。由于黃酮化合物具有消除疲勞、保護(hù)血管、防動(dòng)脈硬化、擴(kuò)張毛細(xì)管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其他臟器細(xì)胞的功能,能起到抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老等作用[17，18],日益受到人們廣泛關(guān)注，對(duì)黃酮類化合物的研究也日益增多，由于植物藥以其天然低毒[19]的特點(diǎn)倍受青睞，因此,從植物中尋找新的黃酮藥源成為人們研究的熱點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明苦苣菜中含有豐富的黃酮類化合物，具有廣泛的開(kāi)發(fā)前景和利用價(jià)值[20]，值得綜合利用和加強(qiáng)資源開(kāi)發(fā)。4.3以前蘆丁的測(cè)定的方法報(bào)道中多利用其顯色反應(yīng)用比色法測(cè)定[21]，但存在操作繁瑣，易受干擾及顯色體系不夠穩(wěn)定的缺點(diǎn)。本文通過(guò)對(duì)HPLC流動(dòng)相：甲醇：水：乙酸=42:57:1；流速：1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：368nm；樣品進(jìn)樣量：20ul；來(lái)測(cè)定苦苣菜中蘆丁[22],該法具有樣品處理簡(jiǎn)單、分析周期短、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn),而且苦苣菜中含量達(dá)2528mg/g，甘肅苦苣菜資源豐富，實(shí)惠便宜，利用方便，值得進(jìn)一步研究，并加以推廣應(yīng)用。4.4在黃酮類化合物中，蘆丁具有主要的藥用價(jià)值，它具有抗炎作用[23]；維生素P樣作用，具有維持血管抵抗力、降低其通透性、減少脆性等作用，對(duì)脂肪浸潤(rùn)的肝有祛脂作用，與谷胱甘肽合用祛脂效果更明顯；抗病毒作用和抑制醛糖還原酶作用。據(jù)實(shí)驗(yàn)報(bào)道[24]，冬棗，銀杏，苦丁茶，蘆筍等物質(zhì)中含有蘆丁，相比之下，苦苣菜資源分布廣，采集容易，而且可以大量人工種植，適應(yīng)性強(qiáng)[25],,容易推廣，是一種提取蘆丁的最佳材料。4.5本文對(duì)苦苣菜中總黃酮的含量及黃酮中的蘆丁的含量進(jìn)行了研究及鑒別[26]。雖然目前沒(méi)有報(bào)道黃酮中各類黃酮類物質(zhì)進(jìn)行分離及鑒別，但本文提出了黃酮的藥理活性，將進(jìn)一步做抑菌實(shí)驗(yàn)證明。而且也將對(duì)不同地區(qū)苦苣菜中總黃酮含量做出比較，來(lái)探討分子水平上對(duì)編碼黃酮的基因進(jìn)行定位分析，從群體水平上進(jìn)行遺傳分析及其對(duì)基因的分離、純化及克隆。因此為了推廣苦苣菜提取總黃酮類物質(zhì)及提取蘆丁將進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。參考文獻(xiàn)[1]伍偉超,翟延君,李正言．正交試驗(yàn)優(yōu)選柘木總黃酮提取工藝研究[J]．中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2010,28(2):352-354.[2]江蘇新醫(yī)學(xué)院．中藥大辭典·上冊(cè)[M]．上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1986:1286.[3]王曉靜,賈獻(xiàn)慧,孫敏耀等．豬毛菜總黃酮的提取工藝研究[J]．上海中醫(yī)藥雜志,2010,44(1):73-74.[4]MercaderAG,DuchowiczPR,FernándezFM,etal.QSARpredictionofinhibitionofaldosereductaseforflavonoids[J].Bioorganic&MedicinalChemistry,2008,(16):7470-7476．[5]王秋紅,劉暢,方波．花生殼黃酮微波堿法提取工藝研究[J].食品科技,2010,35（1）：207-209．[6]LaiHF,LinCW,ChenHY,etal.Microwaveassistedextractionoftheantioxidantcompo2nentsfromEuonymufortunei(Turcz)Hand2Mazzoptimizedbytheresponsesurfacemethod.FineChemIndus,2008,25:8692871.[7]馬彥梅,李炳奇,廉宜君．棉花根莖葉中黃酮類化合物的超聲提取及含量測(cè)定[J]．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2008,19（9）:2254-2256．[8]康新平．新疆鎖陽(yáng)中總黃酮的提取工藝優(yōu)化及含量測(cè)定[J]．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2009,21（1）：105-106．[9]MauricioJ,AlmeidaD,NegriG,etal.Antiproliferativeandantioxidantactivitiesofatricinacylatedglycosidefromsugarcane(Saccharumofficinarum)juice[J].Phytochemistry,2007,68:1165-1171．[10]湯波,劉火安,賈云．竹葉總黃酮提取物的分離純化方法的研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2008,9（10）：2419-2420．[11]李勝華,伍賢進(jìn),劉惠君．超聲波提取翻白草中總黃酮優(yōu)化工藝研究[J].食品科技,2008,1:167-170.[12]周桂芬,張涵,呂圭源.苦苣菜中黃酮類化合物的含量測(cè)定[J]．中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2008,26(1)：218-220.[13]劉永靜,陳丹,黃慶德.玳玳果中總黃酮研究提取工藝[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2009,29(21):1826-1821.[14]王曉靜,賈獻(xiàn)慧,孫敏耀等.豬毛菜總黃酮的提取工藝研究[J].上海中醫(yī)藥雜志,2010,44(1):73-74.[15]LeeHS,KimJG1Effectsofdebitteringonredgrapefruitjuicecontentrate[J]1FoodChemistry,2003,82(2):177-1801.[16]NissimGarti,Kiy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630%乙醇c0.00.20.40.60.810NaNO20.30.30.30.30.30.3AL(NO3)30.30.30.30.30.30.3NaOH4.04.04.04.04.04.0蒸餾水5.45.25.04.84.64.4A0.0000.0700.1500.2290.2810.3080.0000.0720.1530.2280.2810.3100.0000.0720.1520.2280.2810.309表（2）苦苣菜總黃酮的含量測(cè)定表Table(2)DeterminationoftotalflavonoidsinSonchusA值0.1500.1520.154C值0.9958總黃酮含量(mg/g)4.979表（3）回收實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表Table(3)ThedataSheetofRecoveryExperiment編號(hào)加入量(mg)測(cè)得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)10.100.504198.6620.100.509695.6930.150.606797.2440.150.611499.1197.9850.200.707897.9960.200.709399.21表（4）重現(xiàn)率試驗(yàn)數(shù)據(jù)表Table(4)ThedatasheetofReproduceTest試驗(yàn)號(hào)12345總黃酮含量（mg