自身抗體的檢測

關(guān)于自身抗體的檢測抗核抗體（ANA）的檢測與臨床應(yīng)用

抗核抗體的定義傳統(tǒng)定義：針對細胞核成分抗原總稱。廣義定義：針對細胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對ANA的理解不再局限于核成份，而是指核質(zhì)和核蛋白的總稱。第2頁,共50頁，星期六，2024年，5月ANA測定原理和方法：間接免疫熒光法（IIF):現(xiàn)多以Hep-2細胞（人喉癌上皮細胞）為底物（Ag)，其以核質(zhì)豐富而極大地提高了ANA檢測的陽性率和滴度。是系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的標準篩選試驗。我們實驗室采用歐蒙熒光檢測系統(tǒng)，將1:100作為血清起始稀釋度，所以如果是低滴度的1:100陽性，只能視為一個臨界可疑值，臨床意義不大。ANA作為自身免疫性結(jié)締組織病的篩選試驗必須強調(diào)高滴度。第3頁,共50頁，星期六，2024年，5月ANA的靶抗原分布

整個細胞，包括細胞核、細胞漿、細胞骨架、細胞分裂周期蛋白等。第4頁,共50頁，星期六，2024年，5月ANA檢測的臨床意義

ANA可見于多種自身免疫性疾病，特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締組織疾病的診斷，病情判斷和療效觀察的指標第5頁,共50頁，星期六，2024年，5月已證實ANA對很多自身免疫性疾病有診斷價值。ANA的靶抗原為細胞核內(nèi)的不同生化成份，包括核酸、細胞核蛋白和核糖體蛋白。在不同疾病中，特別是風濕性疾病，其抗體譜有一定的特意性。在炎癥性風濕病中ANA陽性率在20%-100%之間，其中類風濕性關(guān)節(jié)炎中ANA陽性率最低，為20%-40%。所以，檢測ANA對于不同類型風濕病意義重大。第6頁,共50頁，星期六，2024年，5月⑴SLE活動性：占95%-100%，非活動性：占80%-100%。（2）藥物誘導的SLE：占100%。（3）混合性結(jié)締組織疾?。赫?00%。（4）其它風濕性疾?。赫?0%-50%

（5）進行性系統(tǒng)硬化癥：占85%-95%。（6）多肌炎和皮肌炎：占30%-50%。（7）干燥綜合征：占70%-80%。（8）慢性活動性肝炎：占30%-40%。（9）潰瘍性結(jié)腸炎：占26%。常見疾病第7頁,共50頁，星期六，2024年，5月其它還可見于：非結(jié)締組織疾病中也可出現(xiàn)陽性；正常人（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽性，但滴度低，并且常表現(xiàn)為IgM型；高滴度ANA則高度提示自身免疫性疾病。第8頁,共50頁，星期六，2024年，5月ANA（＋）的原因風濕性疾病SLE多發(fā)性肌炎干燥綜合征硬皮病血管炎RA正常的健康人女性＞男性，出現(xiàn)率隨年齡而增加風濕性疾病患者親屬？孕婦藥物誘導慢性肝臟疾病慢性肺部疾病慢性感染血液系統(tǒng)異常惡性腫瘤第9頁,共50頁，星期六，2024年，5月SLE患者使用IIF法測定ANA陰性的一些解釋

技術(shù)方面臨床方面經(jīng)皮質(zhì)激素或免疫抑制劑治療。終末期腎病。隱蔽ANA：與循環(huán)中免疫復合物結(jié)合，沉積于組織。由于大量蛋白尿而從腎臟丟失。第10頁,共50頁，星期六，2024年，5月ANA的熒光染色型別細胞核：核均質(zhì)型（DNA、組蛋白和核小體等）核顆粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和Ⅱ型周期蛋白）核膜型（板層素、gp120等）核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纖維蛋白等）核漿點型（著絲點、核多點及核少點型）細胞漿：胞漿顆粒型（線粒體、Jo-1、核糖體等）胞漿纖維型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌動蛋白等分裂期細胞陽性：紡垂體、中間體、中心體等根據(jù)產(chǎn)生的熒光模型、靶抗原的分布部位分類如下：第11頁,共50頁，星期六，2024年，5月ANA篩查的方法間接免疫熒光法（IIF）基質(zhì)組合為：HEP-2細胞+靈長類肝（猴）

第12頁,共50頁，星期六，2024年，5月核顆粒型：核粗顆粒型第13頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗核抗體染色類型核仁型（nucleolar）第14頁,共50頁，星期六，2024年，5月均質(zhì)性（homogeneous）第15頁,共50頁，星期六，2024年，5月ANA的熒光類型ANA試驗的結(jié)果中一般會報告其分型，這些分型可能與某一特定的抗原反應(yīng)活性相關(guān)。分型

相關(guān)疾病

核仁型硬皮病著絲點型CREST綜合征周邊型SLE斑點型/彌散型混合性結(jié)締組織?。∕CTD）第16頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗雙鏈DNA抗體（ds-DNA）

的檢測與臨床應(yīng)用

第17頁,共50頁，星期六，2024年，5月檢測：測定抗ds-DNA以血鞭毛蟲屬的綠螢短膜蟲為靶抗原基質(zhì)，可聯(lián)合使用HEp-2細胞及靈長類肝組織檢測。

自身抗原：位于DNA脫氧核糖磷酸框架上。第18頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗dsDNA抗體熒光模式：綠蠅短膜蟲：動基體均質(zhì)的或邊緣亮度增強的熒光。Hep-2細胞：細胞核的均質(zhì)型熒光。第19頁,共50頁，星期六，2024年，5月臨床應(yīng)用抗雙鏈DNA抗體（ds-DNA）是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性抗體，其陽性率因檢測方法而異，在40-90%。但抗ds-DNA陰性并不能排除患有SLE的可能性?？筪s-DNA抗體具有預測價值，85%的出現(xiàn)抗ds-DNA抗體的健康人在五年內(nèi)發(fā)展為SLE。已證實抗ds-DNA抗體參與SLE的病理過程，在疾病形成過程中，抗ds-DNA和其抗體形成的免疫復合物沉積在皮下毛細血管、腎和其他器官內(nèi)，激活補體系統(tǒng)，從而導致組織損傷。

第20頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗體水平與疾病活動度相關(guān)，隨著疾病活動的控制，抗ds-DNA抗體滴度可以下降或消失。

第21頁,共50頁，星期六，2024年，5月

ANA譜3檢測及臨床應(yīng)用第22頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗RNP/Sm抗體熒光模式：Hep-2片：細胞核粗顆粒，核仁陰性。肝組織切片：同上。熒光法不能區(qū)分抗RNP和抗體Sm。第23頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗RNP/Sm抗體自身抗原：抗原RNP和Sm屬于一組小核糖核蛋白（snRNP），由低分子量的RNA和多種蛋白質(zhì)組成，RNA中尿苷（U-RNA）含量較高。臨床意義：高滴度的抗RNP抗體為混合結(jié)締組織?。∕CTD）的特征，發(fā)生率為95~100%。也可出現(xiàn)于SLE，但總是與抗Sm抗體同時出現(xiàn)?？筍m抗體對SLE具有高度特異性，發(fā)生率為20~40%。第24頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗SSA／SSB抗體熒光模式Hep-2片：細胞核呈細顆粒熒光，核仁不發(fā)光。肝組織片：細顆粒熒光。第25頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗SSA／SSB抗體自身抗原：SSA抗原是一個小核糖核蛋白，由一個RNA分子和兩種不同的蛋白質(zhì)組成。蛋白質(zhì)的分子量為52KD和60KD。抗體直接針對蛋白質(zhì)的抗原決定簇。SSB抗原是分子量為48kD的磷酸化蛋白。臨床意義；最常見于干燥綜合征（SS）,也見于SLE、原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC），偶見于慢活肝。抗SSA抗體在新生兒紅斑狼瘡的發(fā)生率幾乎為100%。第26頁,共50頁，星期六，2024年，5月核仁陽性(Nucleolar)核仁熒光增強，核漿均質(zhì)型---Scl-70抗體。核仁均質(zhì)型---PM-Scl及其他抗原抗體。核仁細顆粒型---原纖維蛋白抗體。核仁粗顆粒型---RNA多聚酶-1抗體。第27頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗Scl-70抗體熒光模式：Hep-2片：細胞核幾乎均質(zhì)的熒光，核仁熒光加強而且也為均質(zhì)型，胞漿無熒光。肝組織片；細胞核顆?；蚓|(zhì)型熒光，常見到細胞核熒光。第28頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗Scl-70抗體自身抗原：為DNA拓撲異構(gòu)酶1，分子量為100KD。在DNA雙鏈的復制和轉(zhuǎn)錄中起作用。臨床意義：25~70%的系統(tǒng)性硬化癥（PSS）彌漫型患者陽性，局限型硬皮病患者陰性。第29頁,共50頁，星期六，2024年，5月細胞漿陽性胞漿均質(zhì)型---抗核糖體抗體細顆粒---抗Jo-1抗體

胞漿顆粒型粗顆粒---AMA抗體滴狀點狀---溶酶體抗體核周顆粒--高爾基體抗體胞漿纖維型細纖維---波形蛋白抗體環(huán)狀纖維---原肌球蛋白抗體針狀纖維---肌動蛋白抗體第30頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗核糖體抗體熒光模式：Hep-2：胞漿細顆粒到均質(zhì)狀、非常致密的熒光。肝組織片：島狀熒光。臨床意義：SLE的特異性抗體，與精神癥狀有關(guān)。第31頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗Jo-1抗體熒光模式：Hep-2：胞漿顆粒到細塊狀熒光。肝組織片：胞漿中弱熒光。自身抗原：組氨酰tRNA合成酶。臨床意義：見于PM，發(fā)生率25~35%。第32頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗線粒體抗體熒光模式：Hep-2：胞漿內(nèi)粗的顆粒型熒光。大鼠腎組織切片：腎小管明顯熒光，腎小球熒光較弱。第33頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗線粒體抗體自身抗原：位于真核細胞線粒體膜的內(nèi)面。線粒體自身抗原為2-氧酸脫氫酶復合體的亞單位，為一組自身抗原，其中與PBC有關(guān)的包括：（1）丙酮酸脫氫酶復合體（PDC）（2）支鏈2-氧酸脫氫酶復合體（BCOADC）（3）a-酮戊二酸脫氫酶復合體（OGDC）第34頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗線粒體抗體臨床意義：AMA-M2對PBC具有診斷意義。AMA亞型與疾病的相關(guān)性：AMA-1：梅毒、干燥綜合征AMA-2：PBCAMA-3：藥物性紅斑狼瘡AMA-4：PBC與AIH重疊AMA-5：SLE、自身免疫性溶血性貧血AMA-6：異煙肼引起的藥物性肝炎AMA-7：AIHAMA-8：AIH、閉塞性血栓性血管炎AMA-9：藥物性肝炎AMA-10：SLE第35頁,共50頁，星期六，2024年，5月分裂期細胞陽性染色體陽性---染色體相關(guān)抗體，相關(guān)疾病？紡錘體纖維陽性---紡錘體纖維抗體，如燕麥細胞型支氣管肺癌中間體陽性---中間體抗體，相關(guān)疾病？細胞兩極陽性---中心粒抗體，相關(guān)疾病？著絲點陽性---抗著絲點抗體第36頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗著絲點抗體(ACA)熒光模式：Hep-2：細胞核細的、相同大小的顆粒熒光，分裂期顆粒熒光帶狀位于細胞中間。肝組織片：分布于細胞核的10~20個顆粒，熒光弱，易被忽略。第37頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗著絲點抗體自身抗原：著絲粒中的三種不同的蛋白質(zhì)：著絲點蛋白A、B、C，主要抗原為著絲點蛋白B。臨床意義：對進行性系統(tǒng)性硬化癥亞型（CREST綜合征）有診斷意義。陽性率80~95%。還可見于PBC、SS等。第38頁,共50頁，星期六，2024年，5月器官/組織特異性自身抗體抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）抗平滑肌抗體抗角蛋白抗體抗肝腎微粒體抗體抗肝細胞膜抗原抗體抗可溶性肝抗原抗體抗肝特異性蛋白抗體第39頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗中性粒細胞胞漿抗體（胞漿型）cANCA熒光模式：猴肝：肝血竇區(qū)粒細胞強熒光，而肝細胞陰性。甲醛固定的中性粒細胞：胞漿內(nèi)粗大到細的熒光顆粒。第40頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗中性粒細胞胞漿抗體（胞漿型）自身抗原：為絲氨酸蛋白酶-蛋白酶3（PR3）。該靶抗原為可溶性蛋白，存在于正常中性粒細胞的嗜苯胺藍顆粒中。臨床意義：cANCA可見于多種系統(tǒng)性血管炎。主要見于Wengener’s肉芽腫，約占ANCA陽性率的80~95%。cANCA被認為是活動性Wengener’s肉芽腫和微多動脈炎的特異和敏感的標志性抗體。還見于Churg-Strauss綜合征。第41頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗中性粒細胞胞漿抗體（核周型）pANCA熒光模式：乙醇固定的中性粒細胞：細胞核周圍平滑的帶狀熒光，細胞核陰性。猴肝：肝血竇區(qū)粒細胞強熒光，而肝細胞陰性。第42頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗中性粒細胞胞漿抗體（核周型）自身抗原：主要抗原為髓過氧化物酶（MPO），其他抗原還有白細胞彈性蛋白酶，組織蛋白酶G、溶菌酶及乳鐵蛋白等。臨床意義：見于多種系統(tǒng)性血管炎。可見于Wengener’s肉芽腫、微多動脈炎、Churg-Strauss綜合征、炎性腸病、自免肝、系統(tǒng)性風濕?。≧A、SLE、SS、PM/DM）。第43頁,共50頁，星期六，2024年，5月抗平滑肌抗體（SMA）熒光模式：大鼠胃組織，呈現(xiàn)肌膜、黏膜肌層和肌膜腺體間收縮纖維的明顯細胞漿熒光。大鼠腎組織，腎小管細胞內(nèi)原纖維、腎小球膜細胞及血管