血清學(xué)反應(yīng)試驗(yàn)

關(guān)于血清學(xué)反應(yīng)試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)鑒定：用已知抗體鑒定未知的細(xì)菌或標(biāo)本中的抗原血清學(xué)診斷：用已知抗原檢測血清中的特異性抗體第2頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗原（antigen）是一類能刺激人或動物機(jī)體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞（免疫原性），并能與這些產(chǎn)物在體內(nèi)或體外發(fā)生特異性反應(yīng)的物質(zhì)（反應(yīng)原性）。第3頁,共75頁，星期六，2024年，5月（一）抗原的性質(zhì)1.異物性異種間的物質(zhì)同種異體間的物質(zhì)眼睛水晶體蛋白質(zhì)、精細(xì)胞及甲狀腺球蛋白等自體內(nèi)隔絕物質(zhì)：抗原的性質(zhì)第4頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗原的性質(zhì)3.立體化學(xué)結(jié)構(gòu)：一般分子結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)象愈復(fù)雜的物質(zhì)，免疫原性愈強(qiáng)。4.抗原決定族antigenicdeterminant(抗原分子表面上的具有一定化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)的特殊化學(xué)基團(tuán))決定其特異性2.分子量足夠大：一般>104道爾頓第5頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗原決定族第6頁,共75頁，星期六，2024年，5月人工抗原天然抗原合成抗原異種抗原同種異體抗原自身抗原核酸抗原蛋白質(zhì)抗原脂抗原多糖抗原抗原種類抗原的種類半抗原（只有反應(yīng)原性而無免疫原性）完全抗原第7頁,共75頁，星期六，2024年，5月微生物抗原成分細(xì)菌抗原成分菌體抗原:革蘭氏陰性菌的菌體抗原稱O抗原脂多糖蛋白質(zhì)的復(fù)合物微生物抗原鞭毛抗原稱為H抗原表面抗原:不同細(xì)菌的表抗原名稱不同.大腸桿菌的表面抗原稱為封套抗原或K抗原,肺炎雙球菌的叫莢膜抗原,傷寒沙門氏菌的表面抗原稱為Vi抗原第8頁,共75頁，星期六，2024年，5月細(xì)菌抗原細(xì)菌的各種抗原第9頁,共75頁，星期六，2024年，5月微生物抗原顆?？乖M分抗原可溶性抗原微生物抗原成分病毒抗原成分第10頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗體是由抗原刺激人體或動物體的B細(xì)胞,由B細(xì)胞轉(zhuǎn)化成漿細(xì)胞所產(chǎn)生的具有特異性的免疫球蛋白(immunoglobulin,縮寫為Ig)．抗體(antigen)第11頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗體種類IgＧ：存在于血清（占血清免疫球蛋白總量的80%）和組織液中?？贵w的結(jié)構(gòu)和種類IgA：二體IgD：IgE：IgM：五體第12頁,共75頁，星期六，2024年，5月IgG結(jié)構(gòu)第13頁,共75頁，星期六，2024年，5月IgA結(jié)構(gòu)IgＡ：存在于血清（占血清免疫球蛋白總量的13%）和外分泌液中第14頁,共75頁，星期六，2024年，5月IgM等結(jié)構(gòu)IgＭ：血液中IgＤ：血清中，1%IgＥ：血清中，0.002%第15頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗體的產(chǎn)生部位淋巴器官一級淋巴器官二級淋巴器官胸腺骨髓(鳥)法氏囊淋巴結(jié)（約500-600個）脾臟第16頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗體在人體中產(chǎn)生部位thymusBonemarrowspleenLymphnode抗體的存在部位:血清、乳汁、體液第17頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗體作用第18頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）第19頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗原抗體反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)（antigen-antibodyreaction）是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。可發(fā)生于體內(nèi)（invivo），也可發(fā)生于體外(invitro)。體內(nèi)反應(yīng)可介導(dǎo)吞噬、溶菌、殺菌、中和毒素等作用；體外反應(yīng)則根據(jù)抗原的物理性狀、抗體的類型及參與反應(yīng)的介質(zhì)（例如電解質(zhì)、補(bǔ)體、固相載體等）不同，可出現(xiàn)凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、補(bǔ)體參與的反應(yīng)及中和反應(yīng)等各種不同的反應(yīng)類型。因抗體主要存在于血清中，在抗原或抗體的檢測中多采用血清作試驗(yàn)，所以體外抗原抗體反應(yīng)亦稱為血清反應(yīng)（erologicreaction）。第20頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗原抗體反應(yīng)條件抗原抗體反應(yīng)條件抗原抗體3.環(huán)境因素：（1）電介質(zhì)：0.85%NaCI；（2）溫度：37或56（3）pH值：7.0（4）振蕩：適當(dāng)?shù)臋C(jī)械振蕩

（5）反應(yīng)時間第21頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗原抗體反應(yīng)一般規(guī)律特異性和交叉性若兩種抗原之間含有部分共同抗原時，則發(fā)生交叉反應(yīng)。親緣關(guān)系越近，交叉反應(yīng)的程度也越高。反應(yīng)的可逆性

抗原與抗體的結(jié)合為分子表面的結(jié)合，結(jié)合的適宜溫度為0～40℃、pH在4.0～9.0范圍內(nèi)。如溫度超過60℃或pH降到3.0以下，或加入解離劑臺硫氰化鉀、尿素等，則抗原抗體復(fù)合物又可重新解離，解離后的抗原或抗體性質(zhì)不改變。第22頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗原抗體反應(yīng)一般規(guī)律最適比和帶現(xiàn)象只有抗原與抗體呈適當(dāng)比例時，才可出現(xiàn)可見的結(jié)合反應(yīng)。當(dāng)抗原過多或抗體過多，則抗原抗體的結(jié)合不能形成大的復(fù)合物，因而抑制可見反應(yīng)的出現(xiàn)，這一現(xiàn)象稱為帶現(xiàn)象?？贵w過多出現(xiàn)的抑制現(xiàn)象稱前帶現(xiàn)象，而抗原過多出現(xiàn)的抑制現(xiàn)象稱后帶現(xiàn)象。為了克服帶現(xiàn)象，在進(jìn)行血清學(xué)試驗(yàn)時，需將抗原或抗體作適當(dāng)稀釋。第23頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗原抗體反應(yīng)一般規(guī)律反應(yīng)的二階段性結(jié)合階段反應(yīng)發(fā)生快，幾秒鐘至幾分鐘。反應(yīng)階段較慢，需幾分鐘、幾十分鐘或更長時間。第24頁,共75頁，星期六，2024年，5月凝集反應(yīng)顆粒性抗原（如細(xì)菌、紅血球等）或吸附在乳膠、白陶土、離子交換樹脂和紅細(xì)胞的抗原與其特異性抗體結(jié)合后，在有電介質(zhì)存在時，凝聚成肉眼可見的凝集小塊。凝集原——凝集素直接凝集反應(yīng)玻片法試管法抗原抗體反應(yīng)類型凝集反應(yīng)第25頁,共75頁，星期六，2024年，5月血清凝集試驗(yàn)第26頁,共75頁，星期六，2024年，5月間接凝集反應(yīng)將可溶性抗原（或抗體）吸附于與免疫無關(guān)的小顆粒（載體）表面，加入相應(yīng)的抗體（或抗原），在適宜條件下，發(fā)生凝集反應(yīng)。載體：動物的紅血球；聚苯乙烯乳膠；矽酸鋁；活性炭等?？乖贵w反應(yīng)類型間接凝集反應(yīng)第27頁,共75頁，星期六，2024年，5月間接血凝試驗(yàn)間接血凝試驗(yàn)吸附抗原的紅細(xì)胞就稱為致敏紅細(xì)胞。致敏紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體結(jié)合后，能出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。

用已知抗原吸附于紅細(xì)胞上檢測未知抗體稱為正向間接血凝試驗(yàn)，用已知抗體吸附于紅細(xì)胞上鑒定未知抗原稱為反向間接血凝試驗(yàn)。

常用的紅細(xì)胞有綿羊、家兔、雞及人的O型紅細(xì)胞。

抗原抗體反應(yīng)類型間接凝集反應(yīng)第28頁,共75頁，星期六，2024年，5月間接血凝抑制試驗(yàn)間接血凝抑制試驗(yàn)

抗體與游離抗原結(jié)合后就不能凝集抗原致敏的紅細(xì)胞，從而使紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象受到抑制，這一試驗(yàn)被稱為間接血凝抑制試驗(yàn)。抗原抗體反應(yīng)類型間接凝集反應(yīng)第29頁,共75頁，星期六，2024年，5月乳膠凝集試驗(yàn)乳膠凝集試驗(yàn)

以乳膠顆粒作為載體的間接凝集試驗(yàn)，稱為乳膠凝集試驗(yàn)。該試驗(yàn)既可檢測相應(yīng)的抗體也可鑒定未知的抗原，而且方法簡便、快速，在臨床診斷中廣泛應(yīng)用于偽狂犬病、流行性乙型腦炎、鉤端螺旋體病、豬細(xì)小病毒病、豬傳染性萎縮性鼻炎、禽衣原體病、山羊傳染性胸膜肺炎、囊蟲病等的診斷。

抗原抗體反應(yīng)類型間接凝集反應(yīng)第30頁,共75頁，星期六，2024年，5月協(xié)同凝集試驗(yàn)協(xié)同凝集試驗(yàn)

葡萄球菌A蛋白是大多數(shù)金黃色葡萄球菌的特異性表面抗原，能與多種哺乳動物血清中的IgG分子的Fc片段相結(jié)合，結(jié)合后的IgG仍保持其抗體活性。當(dāng)這種覆蓋著特異性抗體的葡萄球菌與相應(yīng)抗原結(jié)合時，可以相互連接引起協(xié)同凝集反應(yīng)，在玻板上數(shù)分鐘內(nèi)即可判定結(jié)果(加圖圖八)。目前已廣泛應(yīng)用于快速鑒定細(xì)菌、霉形體和病毒等抗原抗體反應(yīng)類型間接凝集反應(yīng)第31頁,共75頁，星期六，2024年，5月碳粉凝集試驗(yàn)炭粉凝集試驗(yàn)

以極細(xì)的活性炭粉作為載體的間接凝集試驗(yàn)，稱為炭粉凝集試驗(yàn)。反應(yīng)在玻板上或塑料反應(yīng)盤進(jìn)行，數(shù)分鐘后即可判定結(jié)果。通常是用抗體致敏炭粉顆粒制成炭素血清，用以檢測抗原，如馬流產(chǎn)沙門氏菌；也可用抗原致敏炭粉，用以檢測抗體，如腺病毒感染、沙門氏菌病、大腸桿菌病、囊蟲病等的診斷?？乖贵w反應(yīng)類型間接凝集反應(yīng)第32頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗原抗體反應(yīng)類型沉淀反應(yīng)（precipitationreaction)可溶性抗原（如細(xì)菌的外毒素、內(nèi)毒素、菌體裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、組織浸出液等）與相應(yīng)的抗體結(jié)合，在適量電介質(zhì)存在下，形成肉眼可見的細(xì)微的白色沉淀。第33頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗原抗體反應(yīng)類型沉淀反應(yīng)（precipitationreaction)可溶性抗原+相應(yīng)抗體

肉眼可見的沉淀第34頁,共75頁，星期六，2024年，5月沉淀反應(yīng)環(huán)狀沉淀反應(yīng)絮狀沉淀反應(yīng)抗原沉淀環(huán)抗血清抗原抗血清混合抗原抗體反應(yīng)類型沉淀反應(yīng)常用于毒素、類毒素和抗毒素的定量測定主要用于抗原的定性試驗(yàn)，如炭疽病的診斷（Ascoli氏試驗(yàn)）、鏈球菌的血清型鑒定和血跡鑒定等第35頁,共75頁，星期六，2024年，5月沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)：1%瓊脂凝膠的孔徑約85毫微米，可允許各種抗原抗體自由擴(kuò)散。由近及遠(yuǎn)形成濃度梯度。單向單擴(kuò)散單向雙擴(kuò)散抗原抗血清+瓊脂抗原瓊脂抗血清+瓊脂第36頁,共75頁，星期六，2024年，5月沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)：雙向單擴(kuò)散雙向雙擴(kuò)散抗血清+瓊脂抗原沉淀線孔徑3mm抗原待檢血清標(biāo)準(zhǔn)陽性抗血清第37頁,共75頁，星期六，2024年，5月單向免疫擴(kuò)散第38頁,共75頁，星期六，2024年，5月A：Ag、Ab濃度及擴(kuò)散率近似；B：Ag、Ab濃度近似，擴(kuò)散率Ag＞Ab；C：Ag、Ab濃度近似，擴(kuò)散率Ag＜Ab；D：擴(kuò)散率近似，濃度Ag＞Ab；E：濃度Ag＞Ab，擴(kuò)散率Ag＞Ab；F：濃度Ag＜Ab，擴(kuò)散率Ag＜Ab沉淀線形狀、位置與抗原抗體擴(kuò)散率及濃度的關(guān)系雙向瓊脂擴(kuò)散第39頁,共75頁，星期六，2024年，5月(1)沉淀線吻合：待檢抗原與標(biāo)準(zhǔn)抗原完全相同。(2)沉淀線相切：待檢抗原中含有與標(biāo)準(zhǔn)抗原相同的抗原，還含有另外的抗原與抗血清相對應(yīng)。(3)沉淀線相交：待檢抗原有與抗血清對應(yīng)的抗原，但和標(biāo)準(zhǔn)抗原不同。(4)沉淀線部分吻合：待測抗原和標(biāo)準(zhǔn)抗原性質(zhì)相同，但含量較低。A1：待檢抗原；A2：標(biāo)準(zhǔn)抗原雙響瓊脂擴(kuò)散第40頁,共75頁，星期六，2024年，5月抗體效價滴定用梅花型孔，中間放抗原，周圍孔放下不同稀釋度的相應(yīng)抗體，以出現(xiàn)沉淀線的最高稀釋倍數(shù)為該抗體的效價。第41頁,共75頁，星期六，2024年，5月對流免疫電泳在pH為8.6的瓊脂凝膠板上打孔，兩孔為一組，孔徑3mm，抗原、抗體孔間距為4～5mm。將抗原加入負(fù)極端孔內(nèi)，抗體加入正極端孔內(nèi)，用2～4mA/cm電流電泳1h左右，觀察結(jié)果，在兩孔之間出現(xiàn)沉淀帶的為陽性反應(yīng)。第42頁,共75頁，星期六，2024年，5月在pH8.6的瓊脂凝膠中，抗體球蛋白因等電點(diǎn)高，只帶有微弱的負(fù)電荷，而且分子又較大，因此電泳力小，小于電滲力，泳向負(fù)極；而一般抗原蛋白質(zhì)常帶較強(qiáng)的負(fù)電荷，分子較小，電泳力大，大于電滲力，泳向正極，電泳時抗原放負(fù)極側(cè)，抗體放正極側(cè)，抗原抗體相對泳動，一定時間后抗原和抗體將在兩孔之間相遇，在比例適當(dāng)處形成肉眼可見的沉淀線。對流免疫電泳原理第43頁,共75頁，星期六，2024年，5月對流免疫電泳結(jié)果判定

1為陽性2為弱陽性3/4為強(qiáng)陽性第44頁,共75頁，星期六，2024年，5月對流電泳方法評價簡便、快速、敏感度較雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)高8~10倍，但分辨力低于雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。第45頁,共75頁，星期六，2024年，5月火箭免疫電泳(rocketimmunoelectrophoresis,RIE)第46頁,共75頁，星期六，2024年，5月火箭免疫電泳火箭免疫電泳是單向單擴(kuò)散和電泳技術(shù)相結(jié)合的一種血清學(xué)試驗(yàn)。是讓抗原在電場的作用下，在含有抗體的瓊脂中定向泳動，二者比例合適時形成類似火箭樣的沉淀峰。沉淀峰的高度與抗原的濃度成正比。第47頁,共75頁，星期六，2024年，5月火箭免疫操作步驟1.制備抗體瓊脂糖凝膠板將已融化的1.2%巴比妥緩沖瓊脂糖冷卻至55℃左右，加入適量抗血清，混勻后立即澆板，置室溫凝固。2.打孔在瓊脂凝膠板一側(cè)打孔，孔徑3mm，孔距2mm。置瓊脂板于電泳槽內(nèi)，搭橋后用微量注射器準(zhǔn)確加樣10μl。3.電泳樣品孔放負(fù)極側(cè)，電壓8~10V/cm或電流3~5mA/cm，電泳6h。4.觀察沉淀峰電泳完畢后，觀察瓊脂板上沉淀峰，并測量從孔中心到峰尖的高度。5.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖以峰高為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)(對數(shù)坐標(biāo))，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出待檢樣品內(nèi)抗原濃度第48頁,共75頁，星期六，2024年，5月火箭免疫結(jié)果若抗原與抗體比例合適，則孔前出現(xiàn)頂端完全閉合的火箭狀沉淀峰；抗原大量過剩時或不形成沉淀峰，或沉淀峰不閉合；抗原中等過剩時沉淀峰呈圓形；當(dāng)二者比例不適當(dāng)時，常不能形成火箭狀沉淀峰。第49頁,共75頁，星期六，2024年，5月火箭免疫電泳方法評價火箭電泳是一種操作簡便、省時、結(jié)果重復(fù)性好的定量檢測方法。其敏感度可測0.3mg/L抗原含量，若低于此水平則難以形成可見的沉淀峰。如加入少量125I標(biāo)記的抗原在含抗體的瓊脂板上電泳，形成的不可見火箭峰，經(jīng)洗滌干燥后，用X線膠片感光，經(jīng)顯影和定影，可呈現(xiàn)同位素顯影，這就是放射自顯影技術(shù)，可用于微量抗原含量測定，如測定血清AFP或IgE含量，可測至μg/L水平。第50頁,共75頁，星期六，2024年，5月免疫電泳(immunoelectrophoresis,IEP)是將區(qū)帶電泳和雙向瓊脂擴(kuò)散相結(jié)合的一種免疫化學(xué)分析技術(shù)。第51頁,共75頁，星期六，2024年，5月免疫電泳示意圖第52頁,共75頁，星期六，2024年，5月免疫電泳操作步驟1.取潔凈載玻片，澆注融化的瓊脂凝膠，凝固后打孔挖槽。2.用微量加樣器加待檢標(biāo)本或正常血清對照于孔內(nèi)。3.電泳條件以電壓4~6V/cm或電流2~3mA/cm為宜，電泳1.5~2h。4.電泳完畢后，用毛細(xì)滴管在槽內(nèi)加入含相應(yīng)抗原，孵育，使抗原抗體雙相擴(kuò)散，形成沉淀線。5.觀察沉淀線的數(shù)目、形狀和位置。經(jīng)漂洗、干燥、染色、脫色等步驟制作染色標(biāo)本，可長期保存。例如血漿蛋白免疫電泳。第53頁,共75頁，星期六，2024年，5月免疫電泳方法評價免疫電泳分辨率高，可分出人血清中20~30種抗原成分，可鑒定混合抗原中各組分。第54頁,共75頁，星期六，2024年，5月補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)補(bǔ)體特點(diǎn)：補(bǔ)體可與任何抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，但不能單獨(dú)與抗原或抗體結(jié)合。在有特異抗體存在時可以溶解細(xì)胞（溶菌或溶血）?？乖贵w反應(yīng)類型補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)有補(bǔ)體參加的抗原抗體反應(yīng)。第55頁,共75頁，星期六，2024年，5月補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)抗原+抗體抗原抗體復(fù)合物補(bǔ)體羊紅細(xì)胞+溶血素羊紅細(xì)胞溶血素復(fù)合物（不溶血）抗原+抗體不結(jié)合羊紅細(xì)胞+溶血素羊紅細(xì)胞溶血素復(fù)合物（溶血）補(bǔ)體指示系統(tǒng)：反應(yīng)系統(tǒng)：第56頁,共75頁，星期六，2024年，5月補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)第57頁,共75頁，星期六，2024年，5月標(biāo)記抗原抗體反應(yīng)可用放射性同位素、熒光素或酶等標(biāo)記抗原或抗體。抗原抗體反應(yīng)類型

標(biāo)記抗原抗體反應(yīng)第58頁,共75頁，星期六，2024年，5月免疫熒光技術(shù)是用熒光色素對抗體或抗原進(jìn)行標(biāo)記，再與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合，然后在熒光顯微鏡下觀察熒光以分析示蹤相應(yīng)的抗原或抗體的方法。常用的熒光色素有異硫氰酸熒光素（FITC），此外還有四乙基羅丹明（RB200）、四甲基異硫氰酸羅丹明（TMRITC）和三氯三嗪基氨基熒光素（DTAF）等。

第59頁,共75頁，星期六，2024年，5月免疫熒光法第60頁,共75頁，星期六，2024年，5月熒光標(biāo)記法抗原抗體抗原抗抗體抗體直接免疫熒光法間接免疫熒光法第61頁,共75頁，星期六，2024年，5月酶標(biāo)記抗體技術(shù)（免疫酶技術(shù)）是利用抗原抗體的特異性結(jié)合和酶的高效特異的催化作用顯色而建立起來的免疫檢測技術(shù)。常用的標(biāo)記酶是辣根過氧化物酶（HRP），其作用底物為過氧化氫，催化時需要供氫體，常用的供氫體有3，3′-二氨基聯(lián)苯胺（DAB）和鄰苯二胺（OPD），前者反應(yīng)后形成不溶性的棕色物質(zhì)，適用于免疫酶組化法；后者反應(yīng)后形成可溶性的橙色產(chǎn)物，敏感性高，易被酸終止反應(yīng)，呈現(xiàn)的顏色可數(shù)小時不變，是ELISA中常用的供氫體。第62頁,共75頁，星期六，2024年，5月酶標(biāo)記抗體技術(shù)（免疫酶技術(shù)）直接法用酶標(biāo)記抗體直接處理含待檢抗原的標(biāo)本，洗滌后浸于含有過氧化氫和DAB的顯色反應(yīng)液中作用，然后在普通光學(xué)顯微鏡下觀察顏色反應(yīng)，抗原所在部位呈棕黃色。間接法含待檢抗原的標(biāo)本先用未標(biāo)記的抗血清處理，洗滌后再用相應(yīng)的酶標(biāo)記抗抗體處理，洗滌，然后浸于含有過氧化氫和DAB的顯色反應(yīng)液中作用，普通光學(xué)顯微鏡下觀察顏色反應(yīng)，以指示是否有抗原-抗體-抗抗體復(fù)合物存在。第63頁,共75頁，星期六，2024年，5月酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（簡稱ELISA）將抗原或抗體吸附于固相載體的表面，酶標(biāo)記物與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)后，形成酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物，在遇到相應(yīng)底物時，結(jié)合物上的酶催化底物產(chǎn)生水解、氧化或還原等反應(yīng)，從而生成可溶性或不溶性的有色物質(zhì)，可用肉眼或酶標(biāo)測定儀判定結(jié)果。顏色的深淺與相應(yīng)的抗體或抗原量成正比，因此，可根據(jù)顏色的深淺來定量抗體或抗原。第64頁,共75頁，星期六，2024年，5月直接法將已知抗原吸附在固相載體表面，洗除未吸附的抗原，加入一定量的酶標(biāo)記抗體與樣品(含有抗原)提取液的混合液，競爭溫育后，在固相載體表面形成抗原-抗體-酶復(fù)合物。洗除多余部分，加入酶的底物。在酶的催化作用下，底物發(fā)生降解應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)。通過酶標(biāo)檢測儀，測出酶底物的降解量，從而推知被測樣品中的抗原量。

第65頁,共75頁，星期六，2024年，5月間接法將已知抗原吸附在固相載體表面，洗除未吸附抗原，加入一定量抗體與待測樣品(含有抗原)提取液的混合液，競爭溫育后，在固相載體表面形成抗原-抗體復(fù)合物。洗除多余抗體成分，然后加入酶標(biāo)記的抗抗體，與吸附在固體表面的抗原-抗體復(fù)合物相結(jié)合，再加入酶的底物。在酶的催化作用下底物發(fā)生降解反應(yīng)，產(chǎn)生有色產(chǎn)物，通過酶標(biāo)檢測儀測出酶底物的降解量，從而推知被測樣品中的抗原量。第66頁,共75頁，星期六，2024年，5月斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)以纖維素薄膜為固相載體，在膜上進(jìn)行免疫酶反應(yīng)。先將抗原或抗體吸附在纖維素膜的表面，通過相應(yīng)的抗體或抗原和酶標(biāo)記物的一系列反應(yīng)，形成酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物，加入底物后，結(jié)合物上的酶催化底物使其水解、氧化成另一種帶色物質(zhì)，沉著于抗原抗體復(fù)合物吸附部位，呈現(xiàn)出肉眼可見的顏色斑點(diǎn)，試驗(yàn)結(jié)果可通過顏色斑點(diǎn)的出現(xiàn)與否和色澤深淺進(jìn)行判定。第67頁,共75頁，星期六，