養(yǎng)殖場飲水管線綠色殺菌技術(shù)規(guī)程

PAGE3養(yǎng)殖場飲水管線綠色殺菌技術(shù)規(guī)程1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了養(yǎng)殖場飲水管線細菌生物被膜的術(shù)語和定義、飲水管線被細菌生物被膜污染的判定以及控制細菌生物被膜污染飲水管線措施。本標(biāo)準(zhǔn)適用于養(yǎng)雞場飲水管線的細菌生物被膜消除，其它動物養(yǎng)殖場飲水管線的生物被膜清除也可參照此方法。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。引用文件的最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB18596畜禽養(yǎng)殖業(yè)污染物排放標(biāo)準(zhǔn)GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB4789.5食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗志賀氏菌檢驗GB4789.4食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗GB

4789.3

食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)

食品微生物學(xué)檢驗

大腸菌群計數(shù)GB/T32148家禽健康養(yǎng)殖規(guī)范GB/T13663給水用聚乙烯（PE）管材GB/T5750.12生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法NY/T1665畜禽飲用水中總大腸菌群和大腸埃希氏菌的測定酶底物法NY5027無公害食品畜禽飲用水水質(zhì)NY/T388畜禽場環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)NY/T555動物產(chǎn)品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌的檢測方法 NY/T4146動物源沙門氏菌分離與鑒定技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1飲水管線細菌生物被膜養(yǎng)雞場飲水管線中常見的微生物主要有大腸桿菌、空腸彎曲菌、志賀氏菌假單胞菌屬和沙門氏菌屬細菌，附著在管壁內(nèi)部后，其分泌物將細菌包裹而形成的有組織結(jié)構(gòu)的微生物群落。4飲水管線被細菌生物被膜污染的判定從養(yǎng)雞場飲水管線進水端、飲水杯開口處、壓力調(diào)節(jié)器取水樣，參照GB/T5750.12測定水的菌落總數(shù)。若水中菌落總數(shù)超過100CFU/ml時，表明飲水管線存在生物被膜污染；若水中菌落總數(shù)低于100CFU/ml，表明飲水管線未存在生物被膜污染。5控制飲水管線被細菌生物被膜污染措施5.1飲水管線材質(zhì)和安裝要求選用的飲水管線管材質(zhì)量都必須符合GB/T13663要求，管材內(nèi)壁光滑；養(yǎng)雞場安裝飲水管線時，接口處不漏水。5.2水源水質(zhì)要求參照NY5027檢查方法檢查水源水質(zhì)，水的感官性狀、一般化學(xué)指標(biāo)、細菌學(xué)指標(biāo)和毒理學(xué)指標(biāo)均應(yīng)符合NY5027要求。5.3預(yù)防細菌生物被膜污染飲水管線的方法5.3.1飲水管線清洗雞出欄后和雞舍補欄前，清洗飲水管線，其方法是采用反向高壓沖洗飲水管線，沖洗前關(guān)閉水源出口，打開反洗閥門，然后打開進水口，借助高壓水泵或利用水壓力差，使水反向流動，沖洗時間為7-10分鐘，水的色、渾濁度均應(yīng)符合NY5027要求，停止沖洗。必要時拆解水線接口，先利用水線毛刷清洗水線，再采用反向高壓沖洗飲水管線。5.3.2飲水管線消毒雞出欄后和補欄前，先用過氧乙酸（1:1000）或二氯異氰尿酸鈉（1:1000）浸泡飲水管線24h，同時觀察水線是否漏水。用清水清洗，水的色、渾濁度、pH均應(yīng)符合NY5027要求時，停止沖洗。5.3.3生物處理飲水管線內(nèi)的細菌秋季、冬季和春季每隔15-20天，夏季每隔7-10天，先用水溶性異綠原酸鹽處理水線，再用噬菌體處理飲水管線。5.3.3.1水溶性異綠原酸鹽處理飲水管線利用飲水設(shè)備投喂藥物方式向飲水管線中加入0.5mg/ml水溶性異綠原酸鹽，浸泡處理時間為4h。5.3.3.2噬菌體處理飲水管線首先，從飲水管線中分離鑒定細菌：按照GB/T5750從養(yǎng)殖場飲水管道采集水樣，分別按照4789.3、GB4789.4、GBGB4789.5離鑒定沙門氏菌、大腸桿菌和志賀氏菌；按傳統(tǒng)細菌分離純化方法和16srRNA鑒定銅綠假單胞菌、空腸彎曲菌。其次，噬菌體的分離鑒定。按照GB/T5750從養(yǎng)殖場飲水管道采集水樣，8000r/min離心15min，取上清液，棄沉淀，經(jīng)0.22μm微孔濾器過濾，濾液備用。將鑒定的病原菌作為誘導(dǎo)菌，利用雙層瓊脂平板法培養(yǎng)噬菌體，挑選大小一致噬菌斑；再利用雙層瓊脂平板法純化培養(yǎng)噬菌體。吸取噬菌體純化液，加至電鏡專用銅網(wǎng)上，用2%醋酸鈾染色，干燥，通過透射電子顯微鏡觀察噬菌體超微結(jié)構(gòu)。再利用雙層瓊脂平板法對具有典型形態(tài)特征的噬菌體進行純化。第三，噬菌體雞尾酒制劑制備。將上述純化后的大腸桿菌、沙門氏菌、銅綠假單胞菌、空腸彎曲菌和志賀氏菌噬菌體按照1:1:1:1:1的比例，制備成噬菌體雞尾酒制劑，噬菌體效價應(yīng)不低于109PFU/ml。第四，用水溶性異綠原酸鹽處理飲水管線4h后，再利用飲水投藥方式向水線中加入噬菌體雞尾酒制劑（效價均不低于0.75×105PFU/mL），噬菌體制劑處理飲水管線時間8h。5.4被細菌生物被膜污染的飲水管線處理方法處理被細菌生物被膜污染的飲水管線的時間通常選擇在晚上，先反向高壓沖洗飲水管線，再用消毒劑處理，最后利用生物制劑處理飲水管線。5.4.1沖洗飲水管線雞舍熄燈后，打開水線末端的閥門,徹底排凈飲水管線內(nèi)的污水。采用反向高壓沖洗飲水管線，操作方法是關(guān)閉水源出口，打開反洗閥門，再打開進水口，利用高壓水泵或水壓力差，使水反向流動，沖洗時間為7-10分鐘，水的色、渾濁度均應(yīng)符合NY5027要求，停止沖洗。必要時拆解水線接口，先利用水線毛刷清洗水線，再采用反向高壓沖洗飲水管線。5.4.2飲水管線消毒沖洗飲水管線后，選用過氧乙酸（1:1000）或二氯異氰尿酸鈉（1:1000）浸泡飲水管線6-8h，或者用100-200mg/L臭氧自動脈沖沖洗30分鐘。天亮前，用不低于2倍的水線水量的清水沖洗水線，沖洗時間為7-10分鐘，水的色、渾濁度均應(yīng)符合NY5027要求，停止沖洗。5.4.3生物處理飲水管線利用飲水投藥