豬圓環(huán)病毒核酸檢測方法 編制說明

1目編號：20233365-T-326對《豬圓環(huán)病毒聚2聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測方法，補(bǔ)充了引言、規(guī)范性引用文件、術(shù)語與定義、當(dāng)前，我國豬群中PCV2感染十分普遍，臨床健康豬群感染率持續(xù)高位，3實(shí)用性和可操作性的方法，在修訂《豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試驗(yàn)方法》技術(shù)指導(dǎo)和征求意見；崔進(jìn)負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)推進(jìn)項(xiàng)目、技術(shù)復(fù)核、PCR方法優(yōu)化；房456多項(xiàng)研究報(bào)道表明，同步接毒法得到的病毒含量顯著高于異步接毒，且用D-氨TritonX-100透膜、3%7 8AB驗(yàn)，確定最適退火溫度。反應(yīng)體系：10×PCRbuffer（Mg2+plus）2.5μL，dNTPs9M：DL2000Marker；1-9：1×109-1×101copies/uLPCV2質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)5）本標(biāo)準(zhǔn)PCR方法與《豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試驗(yàn)方法》1-5：1.61×102copies/μL-1.61×107copies/μLPCV2質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品1-6：1.61×107copies/μL-1.61×102copies/μ-2稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品-3稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品-4稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品35901—2018）的比較包被濃度-血清稀釋度組合中陽性血清和陰性抗原包被濃度(μg/mL）123P/NP/NP/N以商品化PCV2陽性血清國家參考品為陽性對照，以本團(tuán)隊(duì)實(shí)驗(yàn)室制備的PCV2陰性對照血清為陰性對照，用建立的間接ELISA方法檢測40份PCV2抗性臨界值=S/P+2SD=0.44。從而得到判定標(biāo)準(zhǔn)為：待檢血清S/P≥0.57，判定為PCV2抗體陽性；S/P≤0.44，判定為PCV123456789和血清流行病學(xué)調(diào)查。該方法直接采用現(xiàn)行推薦性國標(biāo)《豬圓環(huán)病毒2型阻斷利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，篩選獲得優(yōu)勢廣譜的Cap備了一株針對Cap保守抗原表位的單克隆抗體5H7，制備了HRP標(biāo)記的5斷率（PI橫向比較，在抗原包被濃度一致而血清稀釋度不同條件下，當(dāng)血清NPPI（%）NPPI（%）NPPI（%）NPPI（%）NPPI（%）號182934567X X+2SD X+3SD國三類動(dòng)物疫病，現(xiàn)行國標(biāo)及農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)按照標(biāo)準(zhǔn)編制的有關(guān)要求，項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)完善了PCVD的診斷方法，為開展測方法的標(biāo)準(zhǔn)，分別是本次擬整合修訂的《豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈反應(yīng)試驗(yàn)