化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則 第13部分：溞類急性活動(dòng)抑制試驗(yàn) 征求意見稿

2化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則第13部分：溞類急性活動(dòng)抑制試驗(yàn)本文件規(guī)定了化學(xué)農(nóng)藥溞類急性活動(dòng)抑制試驗(yàn)的試驗(yàn)試驗(yàn)步驟、試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理、質(zhì)量控制以及試驗(yàn)報(bào)告等的基本文件適用于為化學(xué)農(nóng)藥登記而進(jìn)行的溞類急性活動(dòng)抑下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修NY/T3273難處理農(nóng)藥水生生物毒性試驗(yàn)指南NY/T4195.5農(nóng)藥登記環(huán)境影響試驗(yàn)生物試材培養(yǎng)第5部分：大型溞半數(shù)抑制濃度medianeffectiveco3不同濃度的試驗(yàn)藥液中，染毒周期為48h。試驗(yàn)期間每天觀察并記錄d)溶解氧含量應(yīng)≥3.0mg/L。a)在實(shí)驗(yàn)室條件下按NY/T4195.5的要求培養(yǎng)3代以上。b)處于孤雌生殖狀態(tài),未出現(xiàn)雄溞和冬卵。c)未表現(xiàn)出任何受脅迫現(xiàn)象，例如高死亡率、頭胎延遲、體色異4試驗(yàn)容器及任何可能接觸到試驗(yàn)藥液的器件均應(yīng)由玻璃或其他化學(xué)惰性材料制成。避免使用有機(jī)硅塑料等吸附性很強(qiáng)的材質(zhì)。不應(yīng)使用硅膠管、硅膠密封圈等吸附性較強(qiáng)的材料，確需使用時(shí)，相關(guān)器件不能重復(fù)利用，試驗(yàn)后立即作為廢棄物處理。試驗(yàn)容器宜配備蓋子。對(duì)于易揮發(fā)被可選用注明配方的重組水、清潔的天然水（地表水或地下水）或脫氯自來水，以使用為宜，例如ISO標(biāo)準(zhǔn)稀釋水、ElendtM4培養(yǎng)液和ElendtM7培養(yǎng)液。其中，El配制用試劑應(yīng)為分析純，去離子水或蒸餾水的電導(dǎo)率應(yīng)≤10微西門子每厘米(μS/cm）。如使用試驗(yàn)用水應(yīng)保持水質(zhì)穩(wěn)定，確保在培養(yǎng)期、馴養(yǎng)期以及試驗(yàn)期間（對(duì)照組）對(duì)溞的存活無不57.10氣相色譜儀、高效液相色譜儀、質(zhì)譜儀、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、高效液相色譜-質(zhì)a)劑型，以及有效成分結(jié)構(gòu)式、分子量、含量等基本b)在水中和有機(jī)溶劑中的溶解度；h)作用方式；i)用于定量檢測(cè)試驗(yàn)藥液中被試物濃度的分試幼溞24h～48h的中毒癥狀和受抑制數(shù)量，確定正式試驗(yàn)濃度范圍。6參照預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，按一定比例間距設(shè)置至少5個(gè)處理組，濃度幾何級(jí)差≤2.2。同時(shí)設(shè)空白對(duì)照，使用溶劑助溶時(shí)還應(yīng)增設(shè)溶劑對(duì)照。處理組和對(duì)照組均設(shè)4將被試物或由被試物制備而成的儲(chǔ)備液稀釋成一定濃度的試驗(yàn)藥液，通過超聲、攪拌等方顏色和狀態(tài)（例如是否澄清、是否為均勻分散的懸浮液或乳狀液、是否出現(xiàn)沉淀等），應(yīng)改變被試物特性。例如，對(duì)于農(nóng)藥混配制劑，試驗(yàn)藥液中有效成分的比例不應(yīng)與其產(chǎn)品配比發(fā)前的水平，然后再稀釋到設(shè)定的試驗(yàn)濃度。對(duì)于離子型被試物等特殊情況，應(yīng)開展預(yù)試驗(yàn)并選擇作均須確保受試溞始終在水中。轉(zhuǎn)移受試溞可采用玻璃滴管，但應(yīng)確保滴管頂端的孔徑能夠使溞染毒后，試驗(yàn)容器在試驗(yàn)區(qū)域內(nèi)隨機(jī)擺放，按第5章的條件培養(yǎng)，表現(xiàn)。在試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)（半靜態(tài)試驗(yàn)中還包括每次更換藥液前后）分別測(cè)定每個(gè)處理組和對(duì)照組試驗(yàn)容器中的溫度、溶解氧和pH值，并在其中一個(gè)試驗(yàn)容器中進(jìn)行溫度連續(xù)監(jiān)一個(gè)暴露期內(nèi)試驗(yàn)藥液更換前后的被試物濃度。應(yīng)在暴露開始前測(cè)定試驗(yàn)藥液中被試物濃度，并7根據(jù)被試物在儲(chǔ)備液中的穩(wěn)定性以及儲(chǔ)備液更新頻率確定采樣頻率數(shù)據(jù)表明試驗(yàn)期間被試物濃度可維持在設(shè)定濃度的80%～120%時(shí)，可僅檢測(cè)最高濃度、最檢測(cè)方法應(yīng)確保測(cè)定結(jié)果能夠反映被試物的溶解態(tài)濃度。當(dāng)試驗(yàn)藥水中溶解度時(shí)，在對(duì)水樣進(jìn)行提取等化學(xué)分析前處理操作之前，應(yīng)進(jìn)行離心或過當(dāng)被試物不穩(wěn)定時(shí)，應(yīng)立即對(duì)采集的樣品進(jìn)行分析檢測(cè)，否則應(yīng)進(jìn)行儲(chǔ)存穩(wěn)定性微囊劑型應(yīng)同時(shí)測(cè)定全態(tài)濃度無需開展正式試驗(yàn)。處理組濃度設(shè)為下述2個(gè)濃應(yīng)定期開展參比物試驗(yàn)，至少每季度一次。參比物為重鉻以表格形式總結(jié)數(shù)據(jù)，給出每個(gè)觀察時(shí)間，每個(gè)處理組和對(duì)照組（包括溶以濃度對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以累積受抑制百分率對(duì)應(yīng)的概率單位為縱坐標(biāo)，繪8b)必要時(shí)，斯皮爾曼—卡伯法、二項(xiàng)式法、移動(dòng)平均法或圖解法等其他方法。宜選用基于實(shí)測(cè)濃度（幾何均值）的EC50及其95%置信區(qū)間表示試驗(yàn)結(jié)果。實(shí)測(cè)濃度與設(shè)定濃度（或初始實(shí)測(cè)濃度）偏差＜20%時(shí)，也可以設(shè)定濃度（或初始實(shí)測(cè)濃度）表示。微囊劑型還應(yīng)分別給出以總濃度和以游離態(tài)濃度計(jì)的試b)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)照組和處理組的溶解氧濃度均≥3.0mg/L。c)試驗(yàn)開始前最近一次參比物試驗(yàn)中重鉻酸鉀對(duì)大型溞的24h-EC50介于（0.6～2.1）mg/L。2）有效成分結(jié)構(gòu)式、分子量、CAS號(hào)，以及基本2）試驗(yàn)用水，水源和水質(zhì)特性（例如硬度、溶解氧、pH值等，必要時(shí)附水質(zhì)檢測(cè)報(bào)）；93）預(yù)試驗(yàn)結(jié)果（如有），試驗(yàn)濃度設(shè)置及其依據(jù)，每個(gè)濃度組重復(fù)數(shù)，每個(gè)重復(fù)受試4）儲(chǔ)備液及試驗(yàn)藥液配制方法，溶劑及其濃度，試驗(yàn)藥液外觀，染毒方法，曝氣情況——對(duì)照組和處理組每次檢測(cè)結(jié)果；——每個(gè)處理組初始測(cè)定濃度與設(shè)定濃度的百分比，試驗(yàn)結(jié)束與試驗(yàn)開始（或一個(gè)試驗(yàn)藥液更換周期前后）的測(cè)定濃度百分比，實(shí)測(cè)濃度幾——被試物為農(nóng)藥混配制劑時(shí)，應(yīng)分別給出單個(gè)有效成分檢測(cè)結(jié)果和總檢測(cè)結(jié)果；——靜態(tài)試驗(yàn)和流水式試驗(yàn)，各個(gè)容器的每日溫度、pH值和溶解氧含量等，某個(gè)容器中——半靜態(tài)試驗(yàn)，每次更換試驗(yàn)藥液前后的溫度、pH值、溶解氧含量，某個(gè)容器中的溫6）如可能，試驗(yàn)開始后24h、48h的EC50值及95%置信區(qū)間，并給出所采用的計(jì)算與統(tǒng)計(jì)8）試驗(yàn)質(zhì)量控制條件描述，包括參比物試驗(yàn)日期、結(jié)果、是否9）試驗(yàn)過程中發(fā)生的可能影響結(jié)果的事件，偏離試驗(yàn)準(zhǔn)則的情況、后果及相關(guān)解釋與注：配制用水為純水，如去離子水、蒸餾水，其電導(dǎo)率<10液。用貯備液I制備貯備液II，在使用前加入/2000倍////表A.3ElendtM4培養(yǎng)液和度關(guān)系/2000倍1000倍5000倍/鋁砷鉻鈷銅鐵鉛鎳鋅鎘汞銀b：TOC和COD可以二者測(cè)定其一；c：如使用脫氯自來水，每次用于配制試驗(yàn)藥