(高清版)GB∕T 38517-2020 顆粒 生物氣溶膠采樣和分析 通則

A28中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)顆粒生物氣溶膠采樣和分析通則pBG2020-03-06發(fā)布2020-06-01實(shí)施國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)GB／T38517—2020 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 4生物氣溶膠采樣 4.2生物氣溶膠采樣方法 4.3生物氣溶膠采樣方法的選擇 4.4生物氣溶膠采樣器的選擇 4.5采樣輔助器材 4.6采樣程序 5生物氣溶膠分析 5.1生物氣溶膠的定性分析 5.2生物氣溶膠的定量分析 附錄A（資料性附錄）生物氣溶膠采樣器的性能和選擇原則 附錄B（資料性附錄）生物氣溶膠采樣和定量分析（培養(yǎng)分析法）記錄 參考文獻(xiàn) ⅠGB／T38517—2020本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)顆粒表征與分檢及篩網(wǎng)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC168)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院微生物流行病研究所、青島眾瑞智能儀器有限公司、中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所、中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境與健康相關(guān)產(chǎn)品安全所、中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、安徽賓肯電氣股份有限公司、北京拓普天成科技發(fā)展有限公司、天津市春信凈化制冷設(shè)備有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李勁松、李娜、何春雷、李兆軍、周蘭、胡凌飛、楊文慧、劉凡、胡孔星、柴同杰、隋國(guó)棟、張柯、靳愛(ài)軍、葉佳、王洋、李秋實(shí)。GB／T38517—2020本標(biāo)準(zhǔn)為環(huán)境空氣中細(xì)菌、病毒、真菌和毒素等不同特性的生物氣溶膠（也稱(chēng)之為空氣微生物）的采樣提供了采樣方法和生物氣溶膠的分析，其中，采樣方法包括采樣原理、采樣器的選擇和采樣過(guò)程中應(yīng)關(guān)注的問(wèn)題；分析方法包括分析方法的類(lèi)型、方法的適用性、分析結(jié)果的表達(dá)方式。在附錄A中提供采樣器性能和選擇的原則；在附錄B中提供生物氣溶膠采樣全過(guò)程的記錄表格。Ⅱ1GB／T38517—2020顆粒生物氣溶膠采樣和分析通則警示—在使用本標(biāo)準(zhǔn)過(guò)程中可能涉及有危害性的生物成分、操作和設(shè)備。本標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)有包含使用本標(biāo)準(zhǔn)時(shí)應(yīng)注意的生物安全問(wèn)題，使用者在使用本標(biāo)準(zhǔn)前應(yīng)當(dāng)根據(jù)采樣目的和采樣環(huán)境的生物危害風(fēng)險(xiǎn)，采取適當(dāng)?shù)纳锇踩雷o(hù)措施。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了環(huán)境空氣中細(xì)菌、病毒、真菌和毒素等不同特性的生物氣溶膠的采樣和分析方法的通用原則。本標(biāo)準(zhǔn)適用于環(huán)境空氣中的生物氣溶膠的采樣和分析。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T16293醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測(cè)試方法GB/T16294醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測(cè)試方法GB/T18203室內(nèi)空氣中溶血性鏈球菌衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T18204.3公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法第3部分：空氣微生物GB50591潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1個(gè)體難以用肉眼觀察的一切微小生物的統(tǒng)稱(chēng)。注1：引自全國(guó)科學(xué)技術(shù)名詞審定委員會(huì)公布的《微生物學(xué)名詞》（第二版）。注2：本標(biāo)準(zhǔn)所指微生物僅包括細(xì)菌、真菌、病毒。3.2注：引自全國(guó)科學(xué)技術(shù)名詞審定委員會(huì)公布的《微生物學(xué)名詞》（第二版）。3.3由RNA或DNA及蛋白質(zhì)等組成的，專(zhuān)營(yíng)細(xì)胞內(nèi)感染和復(fù)制的一大類(lèi)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的微生物。注：引自全國(guó)科學(xué)技術(shù)名詞審定委員會(huì)公布的《微生物學(xué)名詞》（第二版）。3.4無(wú)葉綠素、有細(xì)胞壁、營(yíng)吸收營(yíng)養(yǎng)的真核生物。普遍以有性和無(wú)性?xún)煞N方式產(chǎn)生孢子進(jìn)行繁殖，通2GB／T38517—2020常為絲狀且有分枝的體細(xì)胞結(jié)構(gòu)，一般都有細(xì)胞壁。注：引自全國(guó)科學(xué)技術(shù)名詞審定委員會(huì)公布的《微生物學(xué)名詞》（第二版）。3.5真菌或細(xì)菌中能直接發(fā)育成新個(gè)體的微小繁殖單元。注：引自全國(guó)科學(xué)技術(shù)名詞審定委員會(huì)公布的《微生物學(xué)名詞》（第二版）。3.6xin生物產(chǎn)生的、對(duì)他種生物體有毒性的產(chǎn)物。注1：改寫(xiě)自全國(guó)科學(xué)技術(shù)名詞審定委員會(huì)公布的《微生物學(xué)名詞》（第二版）。3.7含有生物性成分的固體或液體微粒懸浮于氣體介質(zhì)中形成的穩(wěn)定分散系。3.8子的沉降速度一致時(shí)的該粒子的直徑。3.9用來(lái)捕獲、承載生物氣溶膠粒子的物質(zhì)。注：采樣介質(zhì)一般具有穩(wěn)定性、粘附性、無(wú)毒性、抗蒸發(fā)、水溶性等基本性能。在固體基質(zhì)表面或內(nèi)部形成的緊密生活在一起肉眼可見(jiàn)的同一微生物物種的群體，或來(lái)源于同一細(xì)胞的一群細(xì)胞。注：引自全國(guó)科學(xué)技術(shù)名詞審定委員會(huì)公布的《微生物學(xué)名詞》（第二版）。根據(jù)固體培養(yǎng)基上形成的菌落數(shù)，測(cè)定樣品中活菌濃度的單位。注1：引自全國(guó)科學(xué)技術(shù)名詞審定委員會(huì)公布的《微生物學(xué)名詞》（第二版）。注2：一個(gè)菌落形成單位能從單個(gè)微生物形成，也可以是多個(gè)微生物的聚集體或者是一個(gè)或者多個(gè)微生物黏附在一個(gè)粒子上。注3：生長(zhǎng)出的菌落數(shù)量跟培養(yǎng)條件有關(guān)。菌落生長(zhǎng)總數(shù)來(lái)的、能被肉眼識(shí)別的微生物生長(zhǎng)物數(shù)量。病毒感染人工培養(yǎng)的單層細(xì)胞后由單個(gè)病毒粒子所產(chǎn)生的細(xì)胞裂解區(qū)。注：引自全國(guó)科學(xué)技術(shù)名詞審定委員會(huì)公布的《微生物學(xué)名詞》（第二版）。3GB／T38517—2020每單位體積或重量的病毒懸液所能形成的噬斑數(shù)。注：引自全國(guó)科學(xué)技術(shù)名詞審定委員會(huì)公布的《微生物學(xué)名詞》（第二版）。4生物氣溶膠采樣生物氣溶膠的濃度、粒徑、活性等具有不確定性和不穩(wěn)定性，不同的生物成分對(duì)采樣過(guò)程的耐受力差異很大，生物成分的分析方法也不相同。因此，在充分考慮生物氣溶膠上述特點(diǎn)外，結(jié)合采樣環(huán)境和采樣目的，決定采樣方法和選用采樣器種類(lèi)。生物氣溶膠采樣器的性能和選擇原則參見(jiàn)附錄A。4.2生物氣溶膠采樣方法采集方式。能夠使具有足夠大慣性的生物氣溶膠粒子撞擊液體并進(jìn)入液體介質(zhì)中的氣溶膠采集方式。生物氣溶膠粒子通過(guò)各種濾材時(shí)，濾材小孔對(duì)粒子的阻留或／和濾材對(duì)粒子的靜電吸引阻留作用，將粒子捕獲在濾材上的采集方式。一種讓氣體以高速旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的離心力將生物氣溶膠粒子與氣流分開(kāi)并撞擊到固體介質(zhì)表面上或富集到液體介質(zhì)里的采集方式。注：液體介質(zhì)的離心采樣也稱(chēng)之為氣旋式采樣。4.2.6靜電吸附采樣用多種方法使生物氣溶膠粒子帶上電荷，在電場(chǎng)的作用下通過(guò)靜電吸附收集生物氣溶膠粒子的采集方法。生物氣溶膠粒子在重力作用下自然下沉降落到采樣面（即微生物營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿表面）的采集方式。4GB／T38517—20204.3生物氣溶膠采樣方法的選擇4.3.1細(xì)菌氣溶膠采樣方法4.3.1.1細(xì)菌氣溶膠定性分析采樣方法細(xì)菌氣溶膠的定性分析，即細(xì)菌生物學(xué)特性分析?？蛇x擇撞擊式采樣、沖擊式采樣、濾膜采樣、離心式采樣、靜電吸附采樣等方法。4.3.1.2細(xì)菌氣溶膠定量分析采樣方法采樣、靜電吸附采樣、自然沉降采樣等方法。其中，自然沉降采樣法僅限于潔凈環(huán)境或外界干擾小的環(huán)境采樣。4.3.2真菌氣溶膠采樣方法4.3.2.1真菌氣溶膠定性分析采樣方法真菌氣溶膠的定性分析，即真菌生物學(xué)特性分析。可選擇撞擊式采樣、沖擊式采樣、濾膜采樣、離心式采樣等方法。4.3.2.2真菌氣溶膠定量分析采樣方法真菌氣溶膠的定量分析，即真菌總數(shù)分析?？蛇x擇撞擊式采樣、沖擊式采樣、濾膜采樣、離心式采樣、自然沉降采樣等方法。4.3.3病毒氣溶膠采樣方法4.3.3.1病毒氣溶膠定性分析采樣方法病毒氣溶膠的定性分析，即病毒生物學(xué)特性分析。可選擇沖擊式采樣、濾膜采樣、離心式采樣（液體介質(zhì)）、靜電吸附采樣、撞擊式采樣等方法。選擇撞擊式采樣時(shí)，應(yīng)在瓊脂表面涂抹一層薄的水溶性粘質(zhì)層。4.3.3.2病毒氣溶膠定量分析采樣方法病毒氣溶膠的定量分析，即病毒總數(shù)分析?？蛇x擇沖擊式采樣、濾膜采樣、離心式采樣（液體介質(zhì)）、靜電吸附采樣、撞擊式采樣等方法。選擇撞擊式采樣時(shí)，應(yīng)在瓊脂表面涂抹一層薄的水溶性粘質(zhì)層。4.3.4毒素氣溶膠采樣方法4.3.4.1毒素氣溶膠定性分析采樣方法毒素氣溶膠的定性分析，即毒素生物學(xué)特性分析?？蛇x擇沖擊式采樣、離心式采樣（液體介質(zhì)）、濾膜采樣等方法。選擇撞擊式采樣時(shí)，應(yīng)在瓊脂表面涂抹一層薄的水溶性粘質(zhì)層。4.3.4.2毒素氣溶膠定量分析采樣方法毒素氣溶膠的定量分析，即毒素質(zhì)量分析。可選擇沖擊式采樣、離心式采樣（液體介質(zhì)）、濾膜采樣、撞擊式采樣等方法。選擇撞擊式采樣時(shí)，應(yīng)在瓊脂表面涂抹一層薄的水溶性粘質(zhì)層。5GB／T38517—20204.4生物氣溶膠采樣器的選擇采樣器應(yīng)有明確的物理采樣效率、生物采樣效率，以及采集生物氣溶膠的粒子空氣動(dòng)力學(xué)粒徑范圍，應(yīng)說(shuō)明采樣介質(zhì)類(lèi)型及其對(duì)微生物存活的影響。通過(guò)噴嘴、噴口或裂隙的加速作用把生物氣溶膠粒子采集到固體或半固體介質(zhì)表面的采樣器。通常分為篩孔式、狹縫式的撞擊式采樣器。測(cè)量生物氣溶膠粒徑分布宜選擇六級(jí)撞擊式采樣器等?；谟脷饬鲗?duì)液體的沖擊、清洗或霧化等原理，經(jīng)空氣中的生物氣溶膠粒子捕獲在液體介質(zhì)中的采樣器。通?？梢赃x擇全玻璃液體沖擊式采樣器、氣旋沖擊式采樣器等。這類(lèi)采樣器采樣流量小，適用于高濃度的生物氣溶膠采樣；對(duì)濃度特別低的生物氣溶膠還可以選擇大流量采樣器。把生物氣溶膠粒子捕獲在濾膜上的采樣器。根據(jù)后續(xù)樣本分析方法的需要選擇濾膜。通過(guò)氣體高速旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的離心力將生物氣溶膠粒子與氣流分開(kāi)并撞擊到固體介質(zhì)表面上或富集到液體介質(zhì)里的采集裝置。用較大采樣流量將目標(biāo)粒子分離、濃縮到采樣介質(zhì)中的采樣裝置。這種采樣器適用于環(huán)境空氣中低濃度目標(biāo)生物氣溶膠的采集。用多種方法使生物氣溶膠粒子帶上電荷，利用靜電吸附原理，在電場(chǎng)的作用下收集生物氣溶膠粒子的采樣裝置。這類(lèi)采樣器適用于病毒氣溶膠的采集，對(duì)病毒氣溶膠存活力無(wú)明顯降低；大流量靜電吸附采樣器適用于低濃度病毒氣溶膠的采集。粗略測(cè)量空氣微生物粒子沉降量的方法，測(cè)量細(xì)菌總數(shù)一般用營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿采集，測(cè)量真菌總數(shù)一般用沙氏培養(yǎng)基平皿采集。4.5采樣輔助器材采樣輔助器材包括采樣過(guò)程中所需的無(wú)菌采樣介質(zhì)、容器、器材等。4.5.2.1在生物氣溶膠采樣過(guò)程中使用無(wú)菌采樣介質(zhì)。6GB／T38517—20204.5.2.2固體采樣介質(zhì)包括各種固體營(yíng)養(yǎng)瓊脂、半固體營(yíng)養(yǎng)瓊脂和各種濾膜。4.5.2.3液體采樣介質(zhì)包括生理鹽水、磷酸緩沖液、營(yíng)養(yǎng)液等各種液體。4.5.2.4采樣時(shí)，考慮生物氣溶膠粒子中生物成分的活性，采用介質(zhì)應(yīng)選固體或半固體培養(yǎng)基、含有營(yíng)養(yǎng)成分的液體、中性液體等。采樣時(shí)，不考慮生物氣溶膠粒子中生物成分的活性，僅考慮生物氣溶膠粒子采樣效率，可選擇多種采樣介質(zhì)，如固體或半固體培養(yǎng)基、含有營(yíng)養(yǎng)成分的液體、中性液體、濾膜等。4.5.3樣品包裝器材4.5.3.1普通生物氣溶膠采集樣品包裝器材應(yīng)滿(mǎn)足防污染、防破碎、防溢灑的要求。4.5.3.2生物氣溶膠樣品含有病原微生物，采集樣品包裝（器材）應(yīng)符合國(guó)家或部委有關(guān)病原微生物樣品的包裝要求。4.5.4人員防護(hù)裝備4.5.4.1采集含有病原微生物的生物氣溶膠時(shí)，采樣人員應(yīng)按照國(guó)家或部委的病原微生物危害等級(jí)的防護(hù)要求穿戴相應(yīng)防護(hù)等級(jí)的個(gè)人防護(hù)裝備。4.5.4.2普通環(huán)境的生物氣溶膠采樣時(shí)，采樣人員應(yīng)穿戴一般個(gè)人防護(hù)用品。4.5.4.3特定環(huán)境（如潔凈環(huán)境）的生物氣溶膠采樣，采樣人員應(yīng)按照GB/T16293、GB/T16294等國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或采樣環(huán)境要求穿戴個(gè)人防護(hù)裝備。4.5.5消毒與滅菌器材4.5.5.1消毒劑應(yīng)選用符合衛(wèi)生消毒技術(shù)規(guī)范要求的方法與技術(shù)，應(yīng)有時(shí)效性。4.5.5.2采樣前，采樣器的采樣頭、相關(guān)器材等應(yīng)進(jìn)行滅菌處理，操作人員手應(yīng)進(jìn)行消毒。4.5.5.3采樣后，采樣器的采樣頭、樣品包裝容器等應(yīng)進(jìn)行滅菌處理，操作人員手等應(yīng)進(jìn)行消毒。4.6.1.1根據(jù)采樣任務(wù)和采樣計(jì)劃確定采樣器類(lèi)型、配件、輔助器材及其相應(yīng)的數(shù)量。4.6.1.2生物氣溶膠采樣使用器材應(yīng)是無(wú)菌狀態(tài)。4.6.1.3采樣前應(yīng)考慮環(huán)境濕度、環(huán)境溫度，以及所采菌落類(lèi)型等影響因素，確定采樣時(shí)間。注：影響生物采樣效率的主要因素是環(huán)境因素。4.6.2.1應(yīng)根據(jù)使用說(shuō)明書(shū)對(duì)采樣器進(jìn)行檢查與維護(hù)。4.6.2.2使用前應(yīng)檢查采樣器運(yùn)行正常，保證采樣流量在允許的誤差范圍內(nèi)。4.6.3.1室外環(huán)境普通生物氣溶膠采樣，應(yīng)根據(jù)生物氣溶膠的來(lái)源位置、風(fēng)向、風(fēng)速和周邊環(huán)境特點(diǎn)設(shè)置相應(yīng)的采樣點(diǎn)和采樣點(diǎn)數(shù)量。4.6.3.2特定環(huán)境（如潔凈環(huán)境）應(yīng)按照GB/T16293、GB/T16294、GB/T18203、GB/T18204.3、GB50591等國(guó)家或其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行設(shè)置采樣點(diǎn)。4.6.3.3采集病原微生物的生物氣溶膠時(shí)，應(yīng)根據(jù)采樣的目的和現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境特點(diǎn)，設(shè)置采樣點(diǎn)位置和數(shù)量。7GB／T38517—2020。注：疑似出現(xiàn)人為故意施放生物危害或意外泄露現(xiàn)場(chǎng)，可直接選擇疑似生物氣溶膠危害源最靠近的位置安裝采樣器。4.6.4.1采樣時(shí)間設(shè)定一般要求設(shè)定采樣時(shí)間時(shí)應(yīng)充分考慮采集的生物氣溶膠類(lèi)型、采樣方法、采樣器類(lèi)型、采樣介質(zhì)類(lèi)型、采樣環(huán)境因素、后續(xù)分析方法等，設(shè)定合理的采樣時(shí)間。4.6.4.6按生物氣溶膠類(lèi)型設(shè)定采樣時(shí)間。設(shè)置相應(yīng)分析空白對(duì)照樣本和現(xiàn)場(chǎng)空白對(duì)照樣本。為在全部分析過(guò)程中不會(huì)有顯著的污染出現(xiàn)，應(yīng)設(shè)置一個(gè)覆蓋分析全過(guò)程的陰性對(duì)照樣品，陰性樣品包含分析步驟，包括高壓、平板制備、懸浮和提取、稀釋、培養(yǎng)、計(jì)數(shù)等過(guò)程。為在全部測(cè)試步驟中不會(huì)出現(xiàn)顯著污染，應(yīng)以核查操作者能夠承擔(dān)任務(wù)的量化水準(zhǔn)，由一個(gè)空白樣品決定，空白樣品包含全部測(cè)試步驟，包括準(zhǔn)備、采樣、運(yùn)輸和分析。注：現(xiàn)場(chǎng)空白樣品是在采樣過(guò)程中同時(shí)采樣，但不通過(guò)采樣器吸取空氣?，F(xiàn)場(chǎng)空白對(duì)照結(jié)果代表在采樣過(guò)程中通過(guò)操作采樣介質(zhì)進(jìn)入樣本中微生物的數(shù)量。現(xiàn)場(chǎng)空白對(duì)照值不用來(lái)校正測(cè)試結(jié)果，但用于檢查采樣誤差。4.6.6.1將采用介質(zhì)裝入采樣器，操作應(yīng)避免污染。4.6.6.2啟動(dòng)采樣器，避免采樣器周?chē)腥藶橐蛩氐臍饬鞲蓴_。8GB／T38517—20204.6.6.3采樣完畢后，取回采樣介質(zhì)時(shí)，應(yīng)檢查其完整狀態(tài)，之后將其密封，以避免二次污染。4.6.7樣本包裝和運(yùn)輸4.6.7.2應(yīng)當(dāng)保護(hù)采集樣本免受各種干擾（如光照、潮濕、干燥、受熱、沾塵等）。一次性平皿采集樣本在運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)保持采樣面朝下，液體采集樣本在運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)保持容器口朝上，濾膜采集樣本在運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)保持采樣面朝上。注：不同的采集樣本在密封容器內(nèi)的放置狀態(tài)也不相同。4.6.8.1在采樣之前和采樣過(guò)程中，應(yīng)填寫(xiě)采樣記錄，記錄應(yīng)對(duì)測(cè)試地點(diǎn)的環(huán)境應(yīng)有相應(yīng)的描述（采樣報(bào)告的范例參見(jiàn)附錄B)。4.6.8.2采用記錄包括但不限于以下內(nèi)容：ac5生物氣溶膠分析5.1生物氣溶膠的定性分析注：生物氣溶膠的定性分析是指通過(guò)微生物的形態(tài)學(xué)、生化反應(yīng)、血清學(xué)、PCR和基因序列測(cè)序等分析方法對(duì)采集的生物氣溶膠樣本中的微生物種類(lèi)進(jìn)行分析。通過(guò)染色和顯微鏡觀察，確定細(xì)菌和真菌的形態(tài)特征，對(duì)其進(jìn)行歸類(lèi)。形態(tài)學(xué)分析適用于生物氣溶膠顆粒中培養(yǎng)出來(lái)的細(xì)菌和真菌的定性分析。參照國(guó)家或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。生化反應(yīng)分析適用于生物氣溶膠顆粒中培養(yǎng)出來(lái)的各種細(xì)菌鑒定分析。參照國(guó)家、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或現(xiàn)行有效的成熟方法執(zhí)行。血清學(xué)分析適用于生物氣溶膠顆粒中培養(yǎng)出來(lái)的各種細(xì)菌和病毒的定性分析。參照國(guó)家、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或現(xiàn)行有效的成熟方法執(zhí)行。9GB／T38517—2020PCR分析適用于生物氣溶膠顆粒中細(xì)菌、病毒和真菌的定性分析。參照國(guó)家、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或現(xiàn)行有效的成熟方法執(zhí)行。5.1.5基因序列測(cè)序分析基因序列測(cè)序分析適用于生物氣溶膠顆粒中細(xì)菌、病毒和真菌的定性分析。參照國(guó)家、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或現(xiàn)行有效的成熟方法執(zhí)行。5.2生物氣溶膠的定量分析注：生物氣溶膠的定量分析是通過(guò)活微生物培養(yǎng)和增殖對(duì)樣本中微生物進(jìn)行分析。5.2.1不同采樣介質(zhì)的樣本定量分析要求5.2.1.1用固體或半固體培養(yǎng)基作為采樣介質(zhì)用固體或半固體培養(yǎng)基作為采樣介質(zhì)，主要適用于可培養(yǎng)的細(xì)菌、真菌直接計(jì)數(shù)或鑒定?？砂巡杉臉颖局苯臃湃牒銣嘏囵B(yǎng)箱中，按細(xì)菌和真菌的培養(yǎng)的溫度、濕度、培養(yǎng)時(shí)間等進(jìn)行培養(yǎng)、觀察、計(jì)數(shù)。用濾膜作為采樣介質(zhì)，可直接將濾膜采樣面朝下貼在固體培養(yǎng)基或半固體培養(yǎng)基上，放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，按細(xì)菌和真菌的培養(yǎng)溫度、濕度、培養(yǎng)時(shí)間等進(jìn)行培養(yǎng)、觀察、計(jì)數(shù)。也可先把濾膜上附著的微生物洗脫下來(lái)，進(jìn)行預(yù)處理，除去雜質(zhì)，然后將懸液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)恳粋€(gè)稀釋度接種到固體或半固體培養(yǎng)基上，放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，按細(xì)菌和真菌的培養(yǎng)溫度、濕度、培養(yǎng)時(shí)間等進(jìn)行培養(yǎng)、觀察、計(jì)數(shù)。5.2.1.3用液體作為采樣介質(zhì)的樣本用液體作為采樣介質(zhì)的樣本，開(kāi)展細(xì)菌真菌培養(yǎng)檢測(cè)時(shí)，在涂布平皿培養(yǎng)前，應(yīng)對(duì)采集的樣本進(jìn)行預(yù)處理，除去雜質(zhì)，再對(duì)菌懸液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)恳粋€(gè)稀釋接種到固體或半固體培養(yǎng)基上，放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，按細(xì)菌和真菌的培養(yǎng)溫度、濕度、培養(yǎng)時(shí)間等進(jìn)行培養(yǎng)、觀察、計(jì)數(shù)；其他檢測(cè)按照具體采用的檢測(cè)方法需要開(kāi)展樣本處理。開(kāi)展病毒培養(yǎng)檢測(cè)時(shí)，將采集的液體樣本進(jìn)行預(yù)處理，除去干擾培養(yǎng)的雜質(zhì)，再接種到敏感細(xì)胞或敏感實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行病毒分離、培養(yǎng)，進(jìn)行定量分析。病毒培養(yǎng)以外的其他檢測(cè)或分析，則按照具體采用的檢測(cè)方法需要開(kāi)展樣本處理。營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基適合于細(xì)菌的培養(yǎng)、菌落計(jì)數(shù)和定性鑒定，也能培養(yǎng)某些放線(xiàn)菌、酵母菌等真菌。實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，能從菌落形態(tài)來(lái)直接區(qū)分細(xì)菌與真菌，細(xì)菌可以鑒定到屬或者種。沙氏培養(yǎng)基適合于真菌的培養(yǎng)、菌落計(jì)數(shù)和定性鑒定，也能培養(yǎng)某些放線(xiàn)菌、酵母菌和其他細(xì)菌。實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，能從菌落形態(tài)來(lái)直接區(qū)分真菌與細(xì)菌，真菌可以鑒定到屬或者種。在顯微鏡下觀察到有細(xì)胞特異性死亡，且沒(méi)有污染，應(yīng)按照病毒分離鑒定的程序繼續(xù)培養(yǎng)、分離和GB／T38517—2020鑒定。實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，能識(shí)別病毒的生長(zhǎng)、分析、鑒定。在病毒接種敏感動(dòng)物后，應(yīng)每天觀察動(dòng)物的狀態(tài)和行為，如觀察到有舞動(dòng)異常行為（如反應(yīng)遲鈍、行動(dòng)緩慢等）或異常特征（如聳毛、萎靡等）時(shí)，可以初步判斷為病毒感染發(fā)病，應(yīng)及時(shí)收取發(fā)病動(dòng)物，解剖處死，并進(jìn)行無(wú)害化處理。10CFU,100CFU也同樣需要記錄。菌落計(jì)數(shù)的操作應(yīng)在二級(jí)生物安全柜中進(jìn)行，避免污染。的計(jì)數(shù)結(jié)果，每皿應(yīng)大于10CFU,小于約100CFU。在培養(yǎng)后的第2天開(kāi)始首次檢查平皿，之后定期長(zhǎng)也同樣需要記錄。菌落計(jì)數(shù)應(yīng)在二級(jí)生物安全柜中進(jìn)行，盡可能輕，避免導(dǎo)致真菌孢子播散，引起子代菌落定殖。在培養(yǎng)后的第1天開(kāi)始首次檢查平皿，之后定期檢查（最好每天檢查不同的病毒形成空斑的時(shí)間不一錄。操作培養(yǎng)瓶應(yīng)在二級(jí)生物安全柜中進(jìn)行，盡可能輕，避免污染影響細(xì)胞生長(zhǎng)。5.2.4結(jié)果計(jì)算和表達(dá)5.2.4.1應(yīng)選用菌落分散良好、分辨型好且菌落大小清晰可數(shù)的培養(yǎng)平皿進(jìn)行結(jié)果計(jì)算。5.2.4.2對(duì)于用固體介質(zhì)撞擊式采樣的空氣樣本中微生物濃度的計(jì)算?？諝庵械奈⑸餄舛劝词?1)計(jì)算。式中：V—min)。5.2.4.3對(duì)于用液體介質(zhì)沖擊式采樣、濾膜采樣采集的空氣樣本中的微生物濃度的計(jì)算。通常只有某GB／T38517—2020空氣微生物濃度計(jì)算，即原菌液濃度的計(jì)算根據(jù)式(2),從平皿菌落數(shù)換算而來(lái)。式中：f式中：fffGB／T38517—2020附錄A（資料性附錄）生物氣溶膠采樣器的性能和選擇原則要了解生物氣溶膠的特性和潛在危害，需要充分了解氣溶膠采樣、微生物活性、微生物培養(yǎng)與分析等原理。在采集生物氣溶膠樣本時(shí)，采樣設(shè)備能夠最大量地捕獲空氣中的生物粒子，同時(shí)盡量減少對(duì)所采集粒子生物活性的影響。有時(shí)這兩個(gè)目的不能同時(shí)達(dá)到，尤其是捕獲具有生物活性的微生物顆粒。在評(píng)價(jià)生物氣溶膠危害時(shí)，最理想的采樣狀態(tài)是能知道空氣中的總粒子濃度、粒子分布情況以及空氣中具有活性的微生物粒子濃度。A.2生物氣溶膠采樣器的采樣效率和空氣動(dòng)力學(xué)性能不同采樣原理的生物氣溶膠采樣器其采樣效率是不同的，基于采樣后的分析方法和采集的生物氣溶膠類(lèi)型（細(xì)菌、病毒、真菌、毒素等）的考慮，在選擇生物氣溶膠采樣器時(shí)，應(yīng)考慮充分了解生物氣溶膠采樣器的采樣效率等性能參數(shù)，包括總采樣效率、生物采樣效率、采樣流量、采樣介質(zhì)。A.3微生物經(jīng)采樣后的生物活性用于采集空氣中液體或者固體顆粒物的采樣器通常并不適用于生物氣溶膠的采樣。剪切力，靜電力，以及脫水作用可以造成生物氣溶膠的損失，使用剪切力低的采樣器可以降低微生物活性的損傷，但是這種采樣器通常其物理采樣效率也較低。GB／T38517—2020附錄B（資料性附錄）生物氣溶膠采樣和定量分析（培養(yǎng)分析法）記錄表B.1生物氣溶膠采樣記錄表委托人：任務(wù)號(hào)：目標(biāo)：采樣器類(lèi)型和序列號(hào)：采樣地點(diǎn)：日期：樣本號(hào)采樣開(kāi)始時(shí)間采樣量采樣時(shí)間min源距離m溫度℃相對(duì)濕度%氣壓Pa風(fēng)向風(fēng)速m/s氣象條件123456789地理概況應(yīng)記錄在草圖中。觀察情況：實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人：采樣人簽字：GB／T3