GB∕T 8313-2018 茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法

(ISO14502-1:2005,Determinationofblacktea—Part1:ContentoftotalusingFolin-Ciocalteureagent;ISO14502-2:2005,Determinationcharacteristicofgreenandblacktea—Ptea—Methodusinghigh-performanceliquidchromatography,NEQ)國家市場監(jiān)督管理總局中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會I本標(biāo)準(zhǔn)代替GB/T8313—2008《茶葉中茶多酚和兒茶素含量的檢測方法》。與GB/T8313—2008 化學(xué)試劑(見3.3.6,2008年版的5.5) 本標(biāo)準(zhǔn)使用重新起草法參考ISO14502-1:2005《綠茶和紅茶中特征物質(zhì)的測定第1部分：福林酚 1GB/T8303茶磨碎試樣的制備及其干物質(zhì)含量測定(GB/T8303—2013,ISO1572:1980,3.3.570%甲醇水溶液。2素(EGC)2.00mg/mL,表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)2.00mg/mL,表兒茶素沒食子酸酯ECG50μg/按GB/T8302的規(guī)定按GB/T8303的規(guī)定3.4.3.2.1母液：稱取0.2g(精確到0.0001g)均勻磨碎的試樣(3.4.2)于10mL離心管中，加入在70℃浸提10min(隔5min攪拌一次),浸提后冷卻至室溫，轉(zhuǎn)入離心機(jī)在3500r/min轉(zhuǎn)速下離心10min,將上清液轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶。殘?jiān)儆?mL的70%甲醇水溶液提取一次，重復(fù)以上操作。合并提3梯度條件：100%A相保持10min;V15min內(nèi)由100%A相→68%A相、32%B相；68%A相、32%B相保持10min;待流速和柱溫穩(wěn)定后，進(jìn)行空白運(yùn)行。準(zhǔn)確吸取10μL混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液注射入HPLC。在相色譜圖參見附錄A。 (2)A——所測樣品中被測成分的峰面積；fsa——所測成分的校正因子(濃度/峰面積，濃度單位為微克每毫升pg/mL);W——樣品的干物質(zhì)含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù)),%;d——稀釋因子(通常為2mL稀釋成10mL,則其稀釋因子為5)。兒茶素類相對咖啡堿的校正因子見表1。4c(%)=CEcc(%)+cc(%)+cec(%)+CEcc(%)+cEcc(4.3.370%甲醇水溶液。4.3.4福林酚(Folin-Cio4.3.510%福林酚試劑(現(xiàn)配):將20mL福林酚試劑(4.3.4)轉(zhuǎn)移到200mL容量瓶中，用水定容并5刻度試管內(nèi)，在每個試管內(nèi)分別加入5.0mL的福林酚試劑(4.3.5),搖勻。反應(yīng)3min～8min內(nèi)，加入4.0mL7.5%碳酸鈉(Na?CO?)溶液(4.3.6),加水定容至刻度、搖勻。室溫下放置60min。用10mm比色皿、在765nm波長條件下用分光光度計測定吸光度(A、A。)。4.4.2.2根據(jù)沒食子酸工作液(4.3.8)的吸光度(A)與各工作溶液的沒食子酸濃度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。4.5結(jié)果計算4.5.1計算方法比較試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作液的吸光度，按式(4)計算：A——樣品測試液吸光度；A?——試劑空白液吸光度；SLOPEsa——沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率；m——樣品質(zhì)量，單位為克(g);d——稀釋因子(通常為1mL稀釋成100mL,則其稀釋因子為100);W——樣品干物質(zhì)含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù)),%。4.5.2重復(fù)性同一樣品茶多酚含量的兩次測定值相對誤差應(yīng)≤5%,若測定值相對誤差在此范圍，則取兩次測定值算術(shù)平均值為結(jié)果，保留小數(shù)點(diǎn)