電泳鑒定及應(yīng)用

科學(xué)探究系列6電泳鑒定及應(yīng)用新人教高考生物學(xué)一輪復(fù)習(xí)1．核酸凝膠電泳一般用瓊脂糖凝膠電泳分離、鑒定和純化DNA或RNA片段。電場強度越大、電泳分子所攜帶的凈電荷數(shù)量越多，其遷移速率也就越快，反之則較慢。在一定的電場強度下，電泳分子的遷移速率取決于核酸分子的大小和構(gòu)象以及凝膠的濃度等。理論方法在生理條件下，核酸分子的糖—磷酸骨架呈離子狀態(tài)，即DNA和RNA多核苷酸鏈稱為多聚陰離子。因此，當核酸分子被放置在電場中時，它們就會向正電極的方向遷移。由于糖—磷酸骨架結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì)，相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因而它們能以同樣的速度向正電極方向遷移，從而分離出相應(yīng)的DNA片段。2．蛋白質(zhì)凝膠電泳一般用十二烷基硫酸鈉(SDS)—聚丙烯酰胺凝膠電泳對蛋白質(zhì)進行分離、純度鑒定等。SDS是一種陰離子去污劑，可與蛋白質(zhì)結(jié)合，使蛋白質(zhì)變性并帶上負電荷。待分離蛋白質(zhì)樣品在電泳中的遷移速率與蛋白質(zhì)本身性質(zhì)、凝膠孔徑和電泳條件(如電流、電壓)等密切相關(guān)，蛋白質(zhì)結(jié)合大量的SDS后，各組分子間的形狀和電荷差異被抵消，此時蛋白質(zhì)在電場中遷移速率的快慢，僅與各自分子量的大小有關(guān)，從而分離出相應(yīng)的蛋白質(zhì)。1．(2022·山東濟南高三一模)DNA瓊脂糖凝膠電泳是指利用在溶液中帶負電荷的DNA分子在電場中向正極移動的原理，分離、純化或分析PCR擴增后的待檢DNA片段的生物化學(xué)技術(shù)。下列說法錯誤的是(

)A．DNA片段相對分子質(zhì)量越大，遷移就越慢B．凝膠制備中加入的核酸染料能與DNA分子結(jié)合，用于分離后DNA片段的檢測C．擬回收的DNA區(qū)帶融化后可先用DNA抽取劑抽提，再用70%的冷乙醇沉淀抽提DNA片段，從而提高回收率D．新冠病毒核酸檢測出現(xiàn)假陽性的原因可能是陽性對照中模板核酸與樣品交叉污染針對訓(xùn)練C

[DNA片段相對分子質(zhì)量越大，遷移就越慢，分子量越小，遷移速度越快，A正確；為了便于對分離后的DNA片段進行檢測，在凝膠制備中加入核酸染料，能夠與DNA分子結(jié)合，B正確；擬回收的DNA區(qū)帶融化后可先用DNA抽取劑抽提，再用95%的冷乙醇沉淀抽提DNA片段，從而提高回收率，C錯誤；新冠病毒核酸檢測出現(xiàn)假陽性的原因可能是陽性對照中模板核酸與樣品交叉污染，使得樣品中含有病毒，出現(xiàn)假陽性結(jié)果，D正確。]2．(2022·湖北武漢二模)用A和B兩種限制酶同時和分別處理同一DNA片段，限制酶對應(yīng)切點一定能切開。兩種酶切位點及酶切產(chǎn)物電泳分離結(jié)果如圖1和圖2所示。下列敘述錯誤的是(

)A．圖1中限制酶A、B識別的核苷酸序列不相同B．圖1中X代表的堿基對數(shù)為4500C．推測圖1中Y是限制酶B的酶切位點D．推測圖2中①是限制酶A處理得到的酶切產(chǎn)物C

[酶具有專一性，不同的限制酶識別并切割不同的核苷酸序列，A正確；從圖2的A＋B酶一組結(jié)果可知，限制酶A和B切完后總共有4個片段，長度分別為500、1500、3500、4500，而圖1表示酶A和酶B切割時只會得到3個片段，長度應(yīng)該是3500、X、2000，再結(jié)合圖2可知，Y是限制酶A的酶切位點，X代表的堿基對數(shù)為4500，圖2中①是限制酶A處理得到的酶切產(chǎn)物，B、D正確，C錯誤。](教師用書獨具))1．(2022·山東德州二模)科研人員提取轉(zhuǎn)基因抗蟲棉甲、乙以及非轉(zhuǎn)基因棉丙的基因組DNA，分別用限制酶EcoRⅠ完全酶切，得到的產(chǎn)物和抗蟲基因一起進行電泳，并將電泳結(jié)果轉(zhuǎn)印到尼龍膜上，再利用帶放射性標記的DNA探針與尼龍膜上變性的DNA分子進行雜交，洗去未結(jié)合的探針后，進行放射性自顯影，結(jié)果如圖所示。下列說法錯誤的是(

)A．DNA探針應(yīng)為帶放射性標記的抗蟲基因B．甲、乙植株的基因組中均插入了抗蟲基因C．乙植株的細胞內(nèi)有可能插入了兩個抗蟲基因D．相同位置上的雜交帶對應(yīng)的DNA片段的核苷酸序列相同D

[據(jù)題圖分析可知，抗蟲基因是已知的基因，且有條帶，說明DNA探針應(yīng)為帶放射性標記的抗蟲基因，A正確；DNA探針應(yīng)為帶放射性標記的抗蟲基因，而甲和乙都有條帶，說明甲、乙植株的基因組中均插入了抗蟲基因，B正確；DNA探針應(yīng)為帶放射性標記的抗蟲基因，而乙有兩個條帶，說明乙的基因組中插入了兩個抗蟲基因，C正確；據(jù)題圖分析可知，甲和乙有位置相同的條帶，相同位置上雜交帶對應(yīng)DNA片段長度相同，但脫氧核苷酸序列不一定相同，D錯誤。]2．(2022·山東濟南高三質(zhì)檢)蛋白質(zhì)印跡法是將待測蛋白質(zhì)混合樣品經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳后，分離為不同的蛋白條帶，將凝膠上的蛋白條帶轉(zhuǎn)移到PVDF膜(該膜可以吸收蛋白質(zhì)，并保持電泳分離后的條帶類型及生物活性不變)上，其中目標蛋白能與特異性抗體(第一抗體)結(jié)合，再用酶標記的第二抗體與第一抗體結(jié)合，最后用酶的顯色底物或發(fā)光底物顯示目標蛋白條帶的位置。下面敘述錯誤的是(

)A．蛋白質(zhì)印跡法的作用原理為抗原抗體的特異性結(jié)合B．在該實驗方法中，以目標蛋白為抗原，設(shè)計合成與目標蛋白結(jié)合的第一抗體和第二抗體C．目標蛋白的分離可能與不同蛋白質(zhì)分子所帶電荷的差異及分子大小有關(guān)D．利用酶的顯色底物或發(fā)光底物顯示目標蛋白條帶是利用了酶的催化作用B

[目標蛋白能與特異性抗體(第一抗體)結(jié)合，再用酶標記的第二抗體與第一抗體結(jié)合，說明蛋白質(zhì)印跡法的作用原理為抗原抗體的特異性結(jié)合，A正確；目標蛋白能與特異性抗體(第一抗體)