ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可中臨床微生物檢驗(yàn)技術(shù)要求

ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可中臨床微生物檢驗(yàn)技術(shù)要求ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可中臨床微生物檢驗(yàn)技術(shù)要求ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可中臨床微生物檢驗(yàn)技術(shù)要求微生物專業(yè)認(rèn)可特色

(與其他檢驗(yàn)專業(yè)的區(qū)別)定性試驗(yàn)多，統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)難晚于其他專業(yè)認(rèn)可，評(píng)審專家角色重要、甚至出現(xiàn)爭(zhēng)議（CNAS率先）對(duì)策：專家團(tuán)隊(duì)專業(yè)知識(shí)全面、制定統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)

出現(xiàn)的問(wèn)題種類繁多從項(xiàng)目申報(bào)的問(wèn)題到指導(dǎo)臨床，遍及全過(guò)程對(duì)策：系統(tǒng)學(xué)習(xí)認(rèn)可知識(shí)，參加培訓(xùn)宣貫專業(yè)知識(shí)獨(dú)特，進(jìn)展多，變化快新老知識(shí)交叉出現(xiàn)對(duì)策：對(duì)于評(píng)審專家來(lái)講—-學(xué)習(xí)對(duì)于被評(píng)審單位—-我今講最新CLSI進(jìn)展微生物專業(yè)認(rèn)可特色

(與其他檢驗(yàn)專業(yè)的區(qū)別)定性試驗(yàn)多，統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)難晚于其他專業(yè)認(rèn)可，評(píng)審專家角色重要、甚至出現(xiàn)爭(zhēng)議（CNAS率先）對(duì)策：專家團(tuán)隊(duì)專業(yè)知識(shí)全面、制定統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)

出現(xiàn)的問(wèn)題種類繁多從項(xiàng)目申報(bào)的問(wèn)題到指導(dǎo)臨床，遍及全過(guò)程對(duì)策：系統(tǒng)學(xué)習(xí)認(rèn)可知識(shí)，參加培訓(xùn)宣貫專業(yè)知識(shí)獨(dú)特，進(jìn)展多，變化快新老知識(shí)交叉出現(xiàn)對(duì)策：對(duì)于評(píng)審專家來(lái)講—-學(xué)習(xí)對(duì)于被評(píng)審單位—-我今講最新CLSI進(jìn)展主要講課內(nèi)容新版“應(yīng)用說(shuō)明”技術(shù)要素內(nèi)容及理解：（醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明）CLSIM100-S22，即2012版生物安全內(nèi)容在ISO15189中的體現(xiàn)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明CNAS-GLxx：2012醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的指南CNAS-GL23：2008

認(rèn)可申請(qǐng)中常見(jiàn)問(wèn)題—申報(bào)項(xiàng)目培養(yǎng)和鑒定（普通細(xì)菌6B010）：上呼吸道標(biāo)本：與A組鏈球菌(分析物編碼即領(lǐng)域代碼前四位:6B070)、流感嗜血桿菌組合認(rèn)可。下呼吸道標(biāo)本:與肺炎鏈球菌(6B075)、流感嗜血桿菌組合認(rèn)可。糞便：與沙門(mén)菌鑒定(6B085)+血清學(xué)分類(6B820)、志賀菌鑒定+血清學(xué)分類、霍亂弧菌鑒定+血清學(xué)分類組合認(rèn)可腦脊液：與肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌組合認(rèn)可藥物敏感性試驗(yàn)（普通細(xì)菌6C010）：自動(dòng)化儀器檢測(cè)法應(yīng)與紙片擴(kuò)散法和/或藥敏試驗(yàn)（最低抑菌濃度）組合認(rèn)可紙片擴(kuò)散法應(yīng)與藥敏試驗(yàn)（最低抑菌濃度）組合認(rèn)可解讀“應(yīng)用說(shuō)明”

4管理要求4.1組織和管理4.1.1實(shí)驗(yàn)室為獨(dú)立法人單位的，應(yīng)有醫(yī)療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)許可；

實(shí)驗(yàn)室為非獨(dú)立法人單位的，其所屬醫(yī)療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)證書(shū)的診療科目中應(yīng)有醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，自獲準(zhǔn)執(zhí)業(yè)之日起，開(kāi)展醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作至少2年。new!

解讀“應(yīng)用說(shuō)明”

5技術(shù)要求5.1人員5.1.2微生物實(shí)驗(yàn)室（以下簡(jiǎn)稱“實(shí)驗(yàn)室”）工作人員上崗前應(yīng)接受辨色力檢查。5.1人員5.1.2微生物實(shí)驗(yàn)室的工作人員在上崗前需接受辨色力檢查。需具備相關(guān)教育背景，并至少每年接受微生物專業(yè)技術(shù)及知識(shí)培訓(xùn)，熟悉微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程、消毒滅菌及生物安全知識(shí)。人員數(shù)量需滿足所提供的服務(wù)的要求。

(已刪除）5.1.4實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人至少應(yīng)具有以下資格：中級(jí)技術(shù)職稱，醫(yī)學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)背景，或相關(guān)專業(yè)背景經(jīng)過(guò)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)培訓(xùn)，3年臨床微生物工作經(jīng)驗(yàn)。5.1.3實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人至少具有以下資格：a)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作經(jīng)歷或培訓(xùn)2年以上；或b)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室相關(guān)專業(yè)高級(jí)技術(shù)職稱；或c)檢驗(yàn)、生物化學(xué)、化學(xué)、生物科學(xué)等主修專業(yè)博士，醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作經(jīng)歷或培訓(xùn)2年以上；或d)檢驗(yàn)、生物化學(xué)、化學(xué)、生物科學(xué)等主修專業(yè)碩士，醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作經(jīng)歷或培訓(xùn)4年以上；或檢驗(yàn)、生物化學(xué)、化學(xué)、生物科學(xué)等主修專業(yè)學(xué)士，醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作經(jīng)歷或培訓(xùn)8年以上。new!認(rèn)可的授權(quán)簽字人應(yīng)至少具有中級(jí)以上專業(yè)技術(shù)職稱，從事申請(qǐng)認(rèn)可授權(quán)簽字領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)工作至少3年。當(dāng)微生物實(shí)驗(yàn)室作為醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的一部分申請(qǐng)認(rèn)可時(shí)，其負(fù)責(zé)人需有大學(xué)本科以上學(xué)歷或中級(jí)以上技術(shù)職稱，五年以上本專業(yè)工作經(jīng)歷。new!5.1.6應(yīng)每年對(duì)各級(jí)工作人員制定培訓(xùn)計(jì)劃并進(jìn)行微生物專業(yè)技術(shù)及知識(shí)培訓(xùn)、質(zhì)量保證/質(zhì)量管理培訓(xùn)、客戶服務(wù)培訓(xùn)、安全培訓(xùn)、繼續(xù)教育培訓(xùn)。5.1.6實(shí)驗(yàn)室需每年對(duì)各級(jí)工作人員制定培訓(xùn)計(jì)劃并進(jìn)行質(zhì)量保證/質(zhì)量管理訓(xùn)、客戶服務(wù)培訓(xùn)、安全培訓(xùn)、繼續(xù)教育培訓(xùn)。至少每6個(gè)月對(duì)人員進(jìn)行勝任該崗位的考核，沒(méi)有通過(guò)崗位職責(zé)考核人員需再培訓(xùn)和再考核，并記錄。

（已刪除）5.2設(shè)施和環(huán)境條件5.2.1實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有足夠的辦公、文字處理、培養(yǎng)基制備、實(shí)驗(yàn)工作空間。宜有適當(dāng)?shù)乃亍⑴潘艿?、電源插座、通風(fēng)設(shè)施、通訊設(shè)備。5.2.1.1微生物實(shí)驗(yàn)室建筑、設(shè)施需與實(shí)驗(yàn)室從事的相應(yīng)生物安全等級(jí)相符合。(此頁(yè)為新增內(nèi)容）5.2.2應(yīng)定期根據(jù)工作流程及性質(zhì)實(shí)施安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，根據(jù)生物安全理論和技術(shù)的新進(jìn)展制定、修訂相應(yīng)的生物安全操作和防護(hù)規(guī)程并進(jìn)行培訓(xùn)，以減小職業(yè)暴露的危險(xiǎn)。當(dāng)工作流程及性質(zhì)發(fā)生變動(dòng)時(shí)，應(yīng)及時(shí)實(shí)施再評(píng)估。new!評(píng)估考慮內(nèi)容：微生物危險(xiǎn)度≠風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估：

微生物危險(xiǎn)度×合理的預(yù)防措施恒定不變×

0≈0

續(xù)5.2.2至少應(yīng)規(guī)定如下安全要求：(a)不同控制區(qū)域的防護(hù)措施及合適的警告；(b)已知或有潛在經(jīng)空氣、氣溶膠傳播危險(xiǎn)的標(biāo)本或病原體在生物安全柜內(nèi)操作；(c)標(biāo)本安全運(yùn)送及處理，如工作人員接種疫苗，戴手套和進(jìn)行呼吸道防護(hù)（適用時(shí)），確保容器密封性，嗅平板時(shí)的潛在危害及其防護(hù)等；(d)滲漏標(biāo)本的處理措施；(e)工作環(huán)境及設(shè)備的消毒措施new!5.2.4實(shí)驗(yàn)室內(nèi)照明宜充足，避免陽(yáng)光直射及反射，如果可能，可在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同區(qū)域設(shè)置照明控制，以滿足不同實(shí)驗(yàn)的需要。應(yīng)有可靠的電力供應(yīng)和應(yīng)急照明。5.2.4實(shí)驗(yàn)室內(nèi)照明宜充足，避免陽(yáng)光直射及反射，如果可能，可在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同區(qū)域設(shè)置照明控制，以滿足不同實(shí)驗(yàn)的需要。宜有可靠的（不一定需要不間斷電源或雙路供電）電力供應(yīng)和應(yīng)急照明。必要時(shí)，重要設(shè)備如培養(yǎng)箱、生物安全柜、冰箱等宜設(shè)專用電源。宜有適當(dāng)?shù)臍怏w供應(yīng)，以滿足工作類型及工作量的需要。5.2.10應(yīng)制定生物安全事故和危險(xiǎn)品、危險(xiǎn)設(shè)施等意外事故的預(yù)防措施和應(yīng)急預(yù)案，并對(duì)全體人員進(jìn)行培訓(xùn)。（新增內(nèi)容）(生物安全認(rèn)可ISO15489，實(shí)驗(yàn)室安全認(rèn)可15490)new!5.3實(shí)驗(yàn)室設(shè)備5.3.1設(shè)備配置應(yīng)與實(shí)驗(yàn)室服務(wù)相適應(yīng)，生物安全柜的類型和安裝應(yīng)滿足工作要求；孵育箱的數(shù)量和種類應(yīng)滿足診斷需要（如特殊溫度范圍和氣體要求）；應(yīng)貯存與診斷相配套的質(zhì)控物，以便在染色、試劑、試驗(yàn)、鑒定系統(tǒng)和敏感性試驗(yàn)中使用；無(wú)菌體液的顯微鏡檢查應(yīng)配備細(xì)胞離心機(jī)。5.3.1設(shè)備配置需與實(shí)驗(yàn)室服務(wù)相適應(yīng)，如：有一定數(shù)量和類型的孵育箱，以滿足診斷需要（如特殊溫度范圍）；貯存與診斷相配套的質(zhì)控物，以便在染色、試劑、試驗(yàn)、鑒定系統(tǒng)和敏感性試驗(yàn)中使用；腦脊液檢查配備細(xì)胞離心機(jī)。new!DiagramCleanbenchClassIBSCClassIIBSCClassIIIBSC生物安全柜與潔凈臺(tái)：風(fēng)向+與外界相連

BSL-3百萬(wàn)級(jí)Lab分子生物學(xué)Lab

3.生物安全柜與潔凈臺(tái)的區(qū)別實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)（負(fù)壓）與生物安全柜？5.3.2設(shè)備校準(zhǔn)、維護(hù)及性能等應(yīng)符合如下要求：（a）自動(dòng)化鑒定儀、血培養(yǎng)儀的校準(zhǔn)應(yīng)滿足制造商建議；（b)每半年進(jìn)行檢定或校準(zhǔn)的設(shè)備至少應(yīng)包括濁度儀；(c)每年進(jìn)行檢定或校準(zhǔn)的設(shè)備至少應(yīng)包括：生物安全柜（高效過(guò)濾器、氣流、負(fù)壓等參數(shù)）、CO2濃度檢測(cè)儀、細(xì)胞離心機(jī)、壓力滅菌器、游標(biāo)卡尺、培養(yǎng)箱、溫度計(jì)、移液器、微量滴定管或自動(dòng)分配器。(d)應(yīng)保存儀器功能監(jiān)測(cè)記錄的設(shè)備至少應(yīng)包括：溫度依賴設(shè)施（冰箱、孵育箱、水浴箱、加熱塊等每日記錄溫度）、CO2培養(yǎng)箱（每日記錄CO2濃度）、超凈工作臺(tái)（定期做無(wú)菌試驗(yàn)）、壓力滅菌器（至少每個(gè)滅菌包外貼化學(xué)指示膠帶、內(nèi)置化學(xué)指示卡，定期進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)）；(e)應(yīng)制定預(yù)防性維護(hù)計(jì)劃并記錄的設(shè)備至少應(yīng)包括：生物安全柜；CO2培養(yǎng)箱、自動(dòng)化鑒定儀、血培養(yǎng)儀、壓力滅菌器、超凈工作臺(tái)、顯微鏡和離心機(jī)。new!(此頁(yè)為新增內(nèi)容)5.3.4所有試劑應(yīng)標(biāo)注或能追溯的信息包括：名稱、濃度或滴度，存放條件，失效期。若試劑啟封，改變了有效期和儲(chǔ)存條件，宜記錄新的有效期。試劑的儲(chǔ)存條件應(yīng)遵循生產(chǎn)商的建議，并在標(biāo)明的有效期內(nèi)使用。培養(yǎng)基標(biāo)簽應(yīng)包含生產(chǎn)日期（批號(hào)）、保質(zhì)期（或失效期），適用時(shí)包括配方、質(zhì)量控制、貯存條件等信息。藥敏用標(biāo)準(zhǔn)菌株種類和數(shù)量應(yīng)滿足實(shí)驗(yàn)室工作要求，并保存其來(lái)源、傳代等記錄，并有證據(jù)表明標(biāo)準(zhǔn)菌株性能滿足要求。5.3.7如果設(shè)備故障影響了方法學(xué)性能，在設(shè)備修復(fù)、校準(zhǔn)后，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)設(shè)備性能進(jìn)行驗(yàn)證，例如檢測(cè)質(zhì)控菌株或已知結(jié)果的標(biāo)本。new!5.4檢驗(yàn)前程序5.4.1檢驗(yàn)申請(qǐng)單應(yīng)包括標(biāo)本來(lái)源和臨床診斷，必要時(shí)說(shuō)明感染類型和/或目標(biāo)微生物，宜提供抗菌藥物使用信息。5.4.1檢驗(yàn)申請(qǐng)單需包括標(biāo)本來(lái)源，必要時(shí)說(shuō)明感染類型和/或目標(biāo)微生物。new!5.4.3除通用要求外，微生物標(biāo)本的采集及運(yùn)送指南，還應(yīng)包括以下內(nèi)容：不同部位標(biāo)本的采集方法。如：明確說(shuō)明并執(zhí)行血培養(yǎng)標(biāo)本采集的消毒技術(shù)、合適的標(biāo)本量。診斷成人不明原因發(fā)熱、血流細(xì)菌感染時(shí)宜在不同部位抽血2套，每套2瓶（需氧、厭氧各一瓶）。合格的標(biāo)本類型、送檢次數(shù)、標(biāo)本量。如：痰標(biāo)本直接顯微鏡檢查找結(jié)核桿菌或結(jié)核桿菌培養(yǎng)，應(yīng)送檢三份痰標(biāo)本。最好至少連續(xù)3日，采集每日清晨第一口痰。明確規(guī)定需要盡快運(yùn)送的標(biāo)本；5.4.3除一般要求外，微生物標(biāo)本的采集及運(yùn)送指南，需特別注意以下內(nèi)容：a)不同部位標(biāo)本的采集方法。如：明確說(shuō)明并執(zhí)行血培養(yǎng)標(biāo)本采集的消毒技術(shù)、合適的標(biāo)本量；b)合格的標(biāo)本類型、送檢次數(shù)、標(biāo)本量。如：糞便常規(guī)培養(yǎng)在未向?qū)I(yè)人員咨詢前，每位患者采集標(biāo)本不多于2份；c)需明確規(guī)定需要盡快運(yùn)送的標(biāo)本，以最大程度地減少延誤并盡快處理；new!5.5檢驗(yàn)程序

5.5.1細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定程序應(yīng)滿足如下要求：所選擇的涂片、染色技術(shù)、培養(yǎng)基應(yīng)能從標(biāo)本中分離、識(shí)別相應(yīng)的病原菌；鑒定方法應(yīng)符合要求（如：通過(guò)血清學(xué)、革蘭染色、菌落形態(tài)、生長(zhǎng)條件、代謝反應(yīng)、生化和酶活性、抗菌藥物耐藥性譜等特性鑒定）；應(yīng)有處理組織標(biāo)本的能力。應(yīng)明確傷口標(biāo)本培養(yǎng)程序，深部傷口感染應(yīng)至少包括標(biāo)本采集、需氧菌及厭氧菌的培養(yǎng)及鑒定。如果不具備厭氧培養(yǎng)條件，則應(yīng)有程序表明，標(biāo)本置合格的運(yùn)送系統(tǒng)迅速送有條件的實(shí)驗(yàn)室。應(yīng)有適當(dāng)?shù)姆椒z測(cè)苛養(yǎng)菌（如放線菌，快速生長(zhǎng)的分枝桿菌等）。(少了一句：最好進(jìn)行直接涂片革蘭染色檢查并報(bào)告結(jié)果。）厭氧菌培養(yǎng)時(shí)間與標(biāo)本類型、診斷有關(guān)，在第一次培養(yǎng)評(píng)估之前應(yīng)有足夠的培養(yǎng)時(shí)間（至少48小時(shí)）。應(yīng)有合適的液體培養(yǎng)基，有合適的鑒定方法（適用時(shí)）。細(xì)菌抗菌藥物敏感性試驗(yàn)程序應(yīng)滿足如下要求：(a)應(yīng)制定常規(guī)藥敏試驗(yàn)方法（紙片擴(kuò)散法、瓊脂稀釋法、微量肉湯稀釋法、E試驗(yàn)或其他）的操作程序（含各類病原體和/或標(biāo)本的檢測(cè)藥物、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、結(jié)果解釋等）；(b)抗菌藥物敏感性試驗(yàn)方法包括紙片擴(kuò)散法、稀釋法（瓊脂稀釋法、肉湯稀釋法）、濃度梯度擴(kuò)散法（E試驗(yàn)）或自動(dòng)化儀器檢測(cè)；實(shí)驗(yàn)室應(yīng)提供與服務(wù)相適應(yīng)的抗菌藥物敏感性試驗(yàn)；(c)抗菌藥物敏感性試驗(yàn)方法及結(jié)果判斷至少應(yīng)遵循上一年的標(biāo)準(zhǔn)。抗菌藥物敏感性試驗(yàn)方法包括紙片擴(kuò)散法、稀釋法（瓊脂稀釋法、肉湯稀釋法）、濃度梯度擴(kuò)散法（E試驗(yàn)）或自動(dòng)化儀器檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)室需遵循一定的準(zhǔn)則，提供與服務(wù)相適應(yīng)的抗菌藥物敏感性試驗(yàn)，并能檢測(cè)苯唑西林耐藥葡萄球菌、萬(wàn)古霉素耐藥腸球菌、碳青霉烯類耐藥腸桿菌科細(xì)菌等。new!2012年新增指標(biāo)新增指標(biāo)名稱要求8急診患者抗菌藥物處方比例＜40%9住院患者特殊使用抗菌藥物使用率10限制使用抗菌藥物治療住院患者微生物樣本送檢率＞50%11特殊使用抗菌藥物治療住院患者微生物樣本送檢率＞80%12特殊使用抗菌藥物使用強(qiáng)度2012年衛(wèi)生部明確要求7種I類切口手術(shù)：①腹股溝疝修補(bǔ)術(shù)（包括補(bǔ)片修補(bǔ)術(shù)）②

甲狀腺疾病手術(shù)③

乳腺疾病手術(shù)④

關(guān)節(jié)鏡檢查手術(shù)

⑤

頸動(dòng)脈內(nèi)膜剝脫術(shù)

⑥

顱骨腫物切除術(shù)⑦

經(jīng)血管途徑介入診斷手術(shù)

原則不使用抗菌藥物！2011年上級(jí)要求：7項(xiàng)指標(biāo)指標(biāo)名稱要求1住院患者抗菌藥物使用率＜60%2門(mén)診患者抗菌藥物處方比例＜20%3I類切口手術(shù)患者預(yù)防使用抗菌藥物比例＜30%4預(yù)防用抗菌藥物術(shù)前0.5-2h內(nèi)給藥百分率100%5I類切口預(yù)防用抗菌藥物時(shí)間≤24h的比例100%6抗菌藥物患者微生物檢驗(yàn)樣本送檢率＞30%7抗菌藥物使用強(qiáng)度（DDD）＜40重癥醫(yī)學(xué)科41株金葡藥敏情況（92.7％MRSA）急診病房+急診ICU40株金葡藥敏情況(100%MRSA)兒科病房50株金葡藥敏情況（8%MRSA）醫(yī)院前10位：口服劑型（按頻度）2012.42012.32012.2莫西沙星（拜復(fù)樂(lè)）莫西沙星（拜復(fù)樂(lè)）莫西沙星（拜復(fù)樂(lè)）頭孢唑肟頭孢唑肟頭孢唑肟依替米星（創(chuàng)成）依替米星（創(chuàng)成）左氧氟沙星（利復(fù)星）左氧氟沙星（利復(fù)星）左氧氟沙星（利復(fù)星）依替米星（創(chuàng)成）阿莫西林/克拉維酸頭孢他啶（復(fù)達(dá)欣）頭孢哌酮/舒巴坦頭孢哌酮/舒巴坦阿莫西林/克拉維酸阿莫西林/克拉維酸乳糖酸阿奇霉素乳糖酸阿奇霉素磷霉素左氧氟沙星（可樂(lè)必妥）左氧氟沙星（可樂(lè)必妥）左氧氟沙星（可樂(lè)必妥）氨曲南頭孢哌酮/舒巴坦乳糖酸阿奇霉素頭孢呋辛鈉750mg磷霉素氨曲南33

CLSI2012年藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的更新點(diǎn)

34

CLSI藥敏標(biāo)準(zhǔn)–

2012年1月M100-S22表格(2012)*M02-A11紙片擴(kuò)散法(2012)^M07-A9MIC法(2012)^*M100每年更新一次#M02,M07每三年更新一次

M1002012改變腸桿菌科菌銅綠假單胞菌葡萄球菌屬35腸桿菌科菌-20121.澄清了何時(shí)進(jìn)行ESBL檢測(cè)-簡(jiǎn)短地2.澄清了何時(shí)進(jìn)行MHT試驗(yàn)3.重新修訂了厄他培南折點(diǎn)--針對(duì)2011年公布折點(diǎn)進(jìn)行修訂4.增加了環(huán)丙沙星對(duì)于傷寒沙門(mén)菌和腸道外沙門(mén)菌的折點(diǎn)36MHT:碳青霉烯酶分類類碳青霉烯酶發(fā)現(xiàn)于注釋AKPC腸桿菌科菌水解所有beta內(nèi)酰胺類。被克拉維酸抑制。SME粘質(zhì)沙雷菌B金屬酶(IMP,VIM,GIM,SPM,NDM)銅綠假單胞菌腸桿菌科菌

不動(dòng)桿菌嗜麥芽窄食單胞菌水解除氨曲南的所有beta內(nèi)酰胺類。被克拉維酸輕度抑制。發(fā)揮酶活性需要鋅離子;被EDTA抑制.37Reference:Queenan&Bush.2007.ClinMicrobiolRev.20:4402.澄清了何時(shí)進(jìn)行MHT38

如果實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有使用最新的碳青霉烯折點(diǎn)，仍然需要進(jìn)行MHT試驗(yàn)….

如果實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)使用最新的折點(diǎn)，那MHT只需要根據(jù)流行病學(xué)或感控目的進(jìn)行。并不是所有碳青霉烯酶腸桿菌科菌均為MHT陽(yáng)性，并且非碳青霉烯酶導(dǎo)致的碳青霉烯耐藥菌株也可能MHT陽(yáng)性。澄清了何時(shí)進(jìn)行MHT：“修訂的碳青霉烯酶評(píng)論”Reference:M100-S22;Table2A,pages45,53&57為什么CLSI再次更改厄他培南對(duì)腸桿菌科菌的折點(diǎn)？2011折點(diǎn)主要基于:當(dāng)時(shí)已知的對(duì)腸桿菌科菌的MIC分布PK/PD數(shù)據(jù)綜述(保守地定為S≤0.25μg/ml)非常有限的臨床數(shù)據(jù)(沒(méi)有病人的厄他培南MIC=0.5μg/ml)2012折點(diǎn)主要基于:進(jìn)一步的數(shù)據(jù)表明厄他培南MIC為0.5μg/ml的菌株不產(chǎn)碳青霉烯酶進(jìn)一步的PK/PD數(shù)據(jù)綜述進(jìn)一步的臨床數(shù)據(jù)ESBL+大腸埃希菌厄他培南敏感(MIC=0.5)的臨床反應(yīng)3940CLSI

文件MIC(μg/ml)紙片擴(kuò)散(mm)敏感中介耐藥敏感中介耐藥M100-S20(Jan.2010)≤24≥8≥1916-18≤15M100-S20U(June2010)≤0.250.5≥1≥2320-22≤19M100-S22(Jan2012)**≤0.51.0≥2≥2219-21≤183.重新修訂厄他培南折點(diǎn)

(在2011年折點(diǎn)上進(jìn)行修訂)4.增加環(huán)丙沙星對(duì)傷寒沙門(mén)菌和腸道外沙門(mén)菌的折點(diǎn)故事….對(duì)于傷寒沙門(mén)菌和腸道外沙門(mén)菌感染，當(dāng)菌株為“環(huán)丙沙星敏感性降低的菌株”時(shí)，環(huán)丙沙星的臨床療效較差。MICs為0.12–1.0μg/ml以往的版本提示這可以通過(guò)萘啶酸紙片擴(kuò)散法試驗(yàn)檢測(cè)。然而，目前有菌株通過(guò)攜帶新的耐藥機(jī)制導(dǎo)致環(huán)丙沙星敏感性下降=無(wú)法用萘啶酸紙片擴(kuò)散法試驗(yàn)簡(jiǎn)便地檢測(cè)出。2012新的環(huán)丙沙星折點(diǎn)對(duì)于“中介”菌株的新注釋修訂對(duì)萘啶酸紙片擴(kuò)散法試驗(yàn)的推薦

41References:Crumpetal.2008.AntimicrobAgentsChemother.52:1278 Parryetal.2010.AntimicrobAgentsChemother.54:5201假如氟喹諾酮類敏感，那么進(jìn)行萘啶酸藥敏試驗(yàn)以檢測(cè)氟喹諾酮類降低的敏感性如果萘啶酸耐藥…….通知臨床醫(yī)生…“該菌株可能無(wú)法通過(guò)氟喹諾酮類藥物清除；建議咨詢感染病專家.”42腸道外沙門(mén)菌:萘啶酸-舊的推薦Reference:M100-S21.Table2A.Page46.沙門(mén)菌屬.

氟喹諾酮耐藥基因型表型萘啶酸環(huán)丙沙星MIC(μg/ml)沒(méi)有耐藥基因常敏感≤0.06gyrA(單突變)1染色體常耐藥0.12-1.0gyrA,gyrB(多突變)染色體耐藥≥4qnr+/-;aac(6’)-lb-cr2

質(zhì)粒

(新機(jī)制)常敏感0.12-1.0431低水平耐藥(敏感性降低);用“標(biāo)準(zhǔn)”的腸桿菌科環(huán)丙沙星折點(diǎn)檢測(cè)不出2qnr基因編碼DNA解旋酶保護(hù)蛋白；aac(6’)1b-cr修飾喹諾酮使之不太有效。有報(bào)道傷寒沙門(mén)菌和腸外沙門(mén)菌可通過(guò)此類機(jī)制導(dǎo)致治療反應(yīng)性延遲。腸桿菌科菌:

2012環(huán)丙沙星折點(diǎn)

菌株DD(mm)MIC(μg/ml)敏感中介耐藥敏感中介耐藥腸桿菌科菌（除外傷寒沙門(mén)菌和腸外沙門(mén)菌）(與其他腸道菌一致)≥2116-20≤15≤12≥4傷寒沙門(mén)菌和腸外沙門(mén)菌≥3121-30≤20≤0.060.12-0.5≥144Reference:M100-S22.Table2A.Page482012新不必再用萘啶酸試驗(yàn)進(jìn)行篩查傷寒沙門(mén)菌和腸外沙門(mén)菌:

環(huán)丙沙星檢測(cè)最好測(cè)定環(huán)丙沙星MIC在2012年新折點(diǎn)要求的低MIC范圍可能無(wú)法在某些自動(dòng)化系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)考慮Etest?如果進(jìn)行紙片擴(kuò)散法試驗(yàn)，需同時(shí)進(jìn)行萘啶酸和環(huán)丙沙星試驗(yàn)：萘啶酸適用于解旋酶突變菌株(gyrA)環(huán)丙沙星適用于質(zhì)粒介導(dǎo)的基因突變對(duì)其他氟喹諾酮類藥物（如左氧氟沙星）的折點(diǎn)正在評(píng)估中45銅綠假單胞菌1.Beta內(nèi)酰胺類抗生素:以下藥物折點(diǎn)降低:哌拉西林哌拉西林-他唑巴坦替卡西林替卡西林-克拉維酸2.碳青霉烯:以下藥物折點(diǎn)降低:亞胺培南1美羅培南2增加多利培南3折點(diǎn)4647銅綠假單胞菌:

折點(diǎn)修改Agent舊M100-S21新M100-S22敏感中介耐藥敏感中介耐藥哌拉西林≤64-≥128≤1632-64≥128哌拉西林-他唑巴坦≤64/4-≥128/4≤16/432/4-64/4≥128/4替卡西林≤64-≥128≤1632-64≥128替卡西林-克拉維酸≤64/2-≥128/2≤16/232/2-64/2≥128/2Reference:M100-S22.Table2B-1.Page63對(duì)應(yīng)的紙片擴(kuò)散法折點(diǎn)也已修改.1.Beta內(nèi)酰胺類藥物折點(diǎn)降低:

銅綠假單胞菌MIC折點(diǎn)目前已與腸桿菌科菌一致(在紙片擴(kuò)散法折點(diǎn)上有細(xì)微差別).當(dāng)使用新的降低折點(diǎn)，菌株若敏感，則不需再聯(lián)合治療。.刪除:表2B-1注釋-“Rx:

對(duì)與bata內(nèi)酰胺類敏感的菌株，需要用高劑量治療銅綠假單胞菌引起的嚴(yán)重感染。對(duì)于此類感染，單藥治療可能導(dǎo)致臨床失敗。.”4849銅綠假單胞菌:

折點(diǎn)更新藥物舊(M100-S21)新M100-S22敏感中介耐藥敏感中介耐藥多利培南None≤24≥8亞胺培南≤48≥16≤24≥8美羅培南≤48≥16≤24≥8Reference:M100-S22.Table2B-1.Page63相應(yīng)的DD折點(diǎn)也已更改.葡萄球菌屬青霉素試驗(yàn)50葡萄球菌屬.–青霉素故事…..>90%的葡萄球菌對(duì)青霉素“耐藥”青霉素極少考慮用于葡萄球菌感染的治療…然而—，當(dāng)青霉素“敏感”時(shí)，青霉素可考慮用于需長(zhǎng)期治療的感染類型（比如心內(nèi)膜炎和骨髓炎）某些葡萄球菌通過(guò)MIC或紙片擴(kuò)散法檢測(cè)為敏感，但可能攜帶beta內(nèi)酰胺酶并導(dǎo)致青霉素治療失敗。51葡萄球菌.–青霉素CLSI以往推薦:當(dāng)下列情況時(shí)，報(bào)告青霉素“敏感”前需進(jìn)行誘導(dǎo)beta內(nèi)酰胺酶試驗(yàn):

抑菌圈直徑≥29mmMIC≤0.12μg/ml也可考慮進(jìn)行blaZbeta內(nèi)酰胺酶基因的PCR青霉素折點(diǎn)MIC(μg/ml)抑菌圈(mm)SIRSIR≤0.12-≥0.25≥29-≤2852Reference:M100-S21.Table2C.Page70誘導(dǎo)beta內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)53血平板傳種菌株誘導(dǎo):貼紙片以誘導(dǎo)beta內(nèi)酰胺酶產(chǎn)生(e.g苯唑西林或頭孢西丁)過(guò)夜孵育檢測(cè)抑菌圈邊緣的菌落假如BL陽(yáng)性，報(bào)告青霉素耐藥PosNeg金黃色葡萄球菌

β-內(nèi)酰胺酶(BL)誘導(dǎo)頭孢硝噻吩beta內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)常?？梢裕豢偰軝z測(cè)出葡萄球菌的beta內(nèi)酰胺酶。其他beta內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)更加敏感:Cloverleaf試驗(yàn)青霉素抑菌圈邊緣試驗(yàn)blaZ基因檢測(cè)并非最佳blaZ編碼beta內(nèi)酰胺酶有多種blaZ基因型

54金黃色葡萄球菌

β-內(nèi)酰胺酶(BL)研究348MSSA(低的青霉素MICs)由blaZ-PCR檢測(cè):303PCR陰性45PCR陽(yáng)性方法:青霉素MICsBeta內(nèi)酰胺酶表型試驗(yàn)頭孢硝噻吩-Cefinase頭孢硝噻吩-DryslideCloverleaf試驗(yàn)青霉素抑菌圈邊緣試驗(yàn)55*StatensSerumInstitut(Denmark),CDC(Atlanta),MGH(Boston)金黃色葡萄球菌

β-內(nèi)酰胺酶(BL)研究青霉素MIC(μg/ml)blaZ功能陰性陽(yáng)性0.00820.016150.03218010.069050.1215170.251140.5

41.0

2.024.01303451blaZ

陰性

而青霉素“耐藥”23blaZ

陽(yáng)性而青霉素“敏感”Reference:CLSIAgendaBookJanuary2011.SR57Cloverleaf試驗(yàn)檢測(cè)beta內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性金葡菌5%羊血平板S.aureus

ATCC25923作為指示菌株1單位青霉素紙片陰性(青霉素敏感)菌株某些結(jié)果難以判讀Reference:CLSIAgendaBookJanuary2011.

菌株A-D均為BL陽(yáng)性ABCDBL陰性58金黃色葡萄球菌

紙片抑菌圈邊緣試驗(yàn)(10U

青霉素紙片和標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法試驗(yàn))模糊/“沙灘樣”=Β內(nèi)酰胺酶陰性,青霉素敏感銳利/“懸崖樣”=Β內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性,青霉素耐藥S.aureusQC:

陰性-ATCC25923陽(yáng)性-ATCC29213(補(bǔ)充QC)Reference:M100-S22.Table2CSupplementalTable1.Page83金黃色葡萄球菌

3實(shí)驗(yàn)室beta內(nèi)酰胺酶研究結(jié)果(N=348)試驗(yàn)敏感性特異性Cefinase77%100%Dryslide88%100%Cloverleaf100%100%Penicillin抑菌圈邊緣試驗(yàn)96%100%59Reference:CLSIAgendaBookJanuary,201160青霉素MIC≤0.12μg/ml頭孢硝噻吩beta內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性報(bào)告青霉素“耐藥”頭孢硝噻吩beta內(nèi)酰胺酶陰性進(jìn)行青霉素抑菌圈邊緣試驗(yàn)?zāi)：吘増?bào)告青霉素“敏感”銳利邊緣報(bào)告青霉素“耐藥”金黃色葡萄球菌

青霉素(MIC≤0.12μg/ml)報(bào)告注釋:若常規(guī)進(jìn)行紙片擴(kuò)散法試驗(yàn)，則僅檢測(cè)抑菌圈edge!M100-S22.Table2CSupplementalTable1.Page80葡萄球菌.–青霉素

選擇策略假如青霉素“耐藥”，報(bào)告結(jié)果假如青霉素“敏感”，隱藏結(jié)果并添加注釋：“若需青霉素結(jié)果請(qǐng)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室”若青霉素“敏感”且臨床要求報(bào)告，則:金葡菌頭孢硝噻吩試驗(yàn)，若陰性

青霉素抑菌圈邊緣試驗(yàn)?zāi)堂戈幮云咸亚蚓?包括路登葡萄球菌)誘導(dǎo)性頭孢硝噻吩試驗(yàn)61(此頁(yè)已刪除）痰培養(yǎng)需包括肺炎鏈球菌、、流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、腸桿菌科細(xì)菌的分離，若標(biāo)本被唾液嚴(yán)重污染，可以不鑒定全部細(xì)菌或不做藥敏試驗(yàn)；呼吸道和耳鼻喉標(biāo)本需能分離β溶血鏈球菌和嗜血桿菌屬；支氣管肺泡灌洗液和支氣管鏡檢查標(biāo)本需能定量培養(yǎng)。尿液常規(guī)進(jìn)行定量培養(yǎng)（菌落計(jì)數(shù)），需能分離、鑒定革蘭陽(yáng)性和/或革蘭陰性細(xì)菌。泌尿生殖道標(biāo)本需有合適條件培養(yǎng)淋病奈瑟菌；陰道炎患者標(biāo)本需進(jìn)行革蘭染色；如開(kāi)展孕婦（懷孕35-37周）B群鏈球菌的篩查，藥敏試驗(yàn)需包括林可霉素和紅霉素。糞便標(biāo)本需能分離、鑒定腹瀉相關(guān)病原菌（如沙門(mén)菌屬、志賀菌屬、耶爾森桿菌屬、彎曲菌屬、腸出血性大腸桿菌、嗜水氣單胞菌），結(jié)果報(bào)告需標(biāo)明具體的細(xì)菌名稱，如未檢出沙門(mén)菌屬、志賀菌屬等；無(wú)癥狀攜帶者，常規(guī)使用增菌培養(yǎng)基或選擇培養(yǎng)基；需能檢測(cè)霍亂弧菌、艱難梭菌；粘性較低的培養(yǎng)標(biāo)本，宜進(jìn)行直接顯微鏡檢查。年齡大于6個(gè)月，有抗菌藥物治療史的嚴(yán)重腹瀉患者，糞便常規(guī)培養(yǎng)無(wú)異常發(fā)現(xiàn)時(shí)，可檢測(cè)艱難梭菌毒素。腦脊液培養(yǎng)標(biāo)本需立即處理，常規(guī)進(jìn)行革蘭染色，培養(yǎng)基和孵育條件確保能培養(yǎng)常見(jiàn)苛養(yǎng)菌（腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌、產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌、諾卡菌等）；需根據(jù)實(shí)驗(yàn)室制定的危急值處理規(guī)程報(bào)告陽(yáng)性結(jié)果（包括顯微鏡檢查結(jié)果）；抗原試驗(yàn)，無(wú)論結(jié)果為陽(yáng)性還是陰性，需再進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)；最好有其他方法檢測(cè)不能培養(yǎng)或難培養(yǎng)的細(xì)菌。分枝桿菌：標(biāo)本應(yīng)置密閉的防滲漏容器內(nèi)；某些標(biāo)本（如：尿液、腦脊液）抗酸染色應(yīng)濃縮，所有標(biāo)本培養(yǎng)前應(yīng)濃縮。應(yīng)以密閉試管置密封的離心架內(nèi)離心。分枝桿菌：標(biāo)本需置密閉的防滲漏容器內(nèi)；某些標(biāo)本（如：尿液、痰液）抗酸染色及培養(yǎng)前應(yīng)濃縮。需以密閉的螺旋蓋試管置密封的離心架內(nèi)離心，以最大程度減少氣溶膠危害。需進(jìn)行原始標(biāo)本涂片分枝桿菌熒光染色；常規(guī)培養(yǎng)在35-37℃，當(dāng)臨床有特殊說(shuō)明（某些特殊菌屬）時(shí)，可置30-32℃或42℃。標(biāo)本量大時(shí)，至少接種2類培養(yǎng)基。需在收到標(biāo)本24小時(shí)內(nèi)報(bào)告抗酸染色結(jié)果。

真菌培養(yǎng)宜使用含和不含抗菌藥物的兩類培養(yǎng)基。如果在室溫下培養(yǎng)，應(yīng)每天監(jiān)測(cè)并記錄室溫（22℃-26℃）。經(jīng)空氣傳播有高度感染性的真菌標(biāo)本、含菌絲體的真菌應(yīng)在生物安全柜內(nèi)處理。若采用平皿培養(yǎng)，應(yīng)封蓋。真菌：需選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基和環(huán)境，以保證分離重要的致病菌，并盡量減少污染；分離和鑒定程序需包括直接鏡檢或染色鏡檢（如10％KOH，墨汁染色或吉姆薩染色）、合適的選擇性培養(yǎng)基、孵育溫度以及藥敏試驗(yàn)。需準(zhǔn)備兩種培養(yǎng)基（含或不含抗菌藥物）。如果在室溫下培養(yǎng)，需每天監(jiān)測(cè)并記錄室溫（22-26℃）以確定室溫持續(xù)滿足真菌的生長(zhǎng)。

提供鑒定服務(wù)的實(shí)驗(yàn)室，需建立完善的真菌鑒定程序，包括玻片培養(yǎng)（必要時(shí)），生化反應(yīng)，營(yíng)養(yǎng)試驗(yàn)（必要時(shí)）。否則需送有條件的實(shí)驗(yàn)室鑒定。經(jīng)空氣傳播有高度傳染性的微生物標(biāo)本、含菌絲體的真菌需在生物安全柜或安全罩內(nèi)處理。若采用平板培養(yǎng)，需有適當(dāng)?shù)陌踩胧ㄈ绶馍w），以防止平板意外打開(kāi)。只有具備嚴(yán)格的、適當(dāng)?shù)陌踩胧┎拍苓M(jìn)行玻片培養(yǎng)。病毒：培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)詳細(xì)記錄細(xì)胞類型、傳代數(shù)、細(xì)胞來(lái)源、培養(yǎng)基及生長(zhǎng)狀況；應(yīng)檢測(cè)并記錄培養(yǎng)基和稀釋劑的無(wú)菌試驗(yàn)和pH；應(yīng)監(jiān)測(cè)細(xì)胞病變效應(yīng)，以優(yōu)化培養(yǎng)的最佳時(shí)間。應(yīng)比較未經(jīng)接種或接種無(wú)菌物質(zhì)的單層細(xì)胞與接種臨床標(biāo)本的培養(yǎng)物。病毒：?jiǎn)螌蛹?xì)胞應(yīng)孵育一定時(shí)間，以滿足相應(yīng)病毒的生長(zhǎng)要求；需詳細(xì)記錄細(xì)胞類型、傳代數(shù)、細(xì)胞來(lái)源、培養(yǎng)基及生長(zhǎng)狀況；需檢測(cè)并記錄培養(yǎng)基和稀釋劑的無(wú)菌試驗(yàn)和pH；需監(jiān)測(cè)細(xì)胞病變效應(yīng)，以優(yōu)化培養(yǎng)的最佳時(shí)間。宜比較未經(jīng)接種或接種無(wú)菌物質(zhì)的單層細(xì)胞與接種臨床標(biāo)本的培養(yǎng)物。需建立程序，對(duì)定量血清試驗(yàn)的紅細(xì)胞懸液進(jìn)行檢測(cè)并標(biāo)準(zhǔn)化。工作表和/或記錄需顯示試劑或參比血清的滴度（如果可能），以及檢測(cè)結(jié)果的實(shí)際滴度。所有血清學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)抗原或抗體，需設(shè)立陽(yáng)性和陰性對(duì)照。（此頁(yè)已刪除）寄生蟲(chóng)：實(shí)驗(yàn)室需與臨床醫(yī)師協(xié)商制定寄生蟲(chóng)常規(guī)檢驗(yàn)操作規(guī)程并遵循，其中包括常規(guī)寄生蟲(chóng)學(xué)試驗(yàn)糞便標(biāo)本的采集時(shí)間、次數(shù)、標(biāo)本量。糞便顯微鏡檢查蟲(chóng)卵和寄生蟲(chóng)，需包括濃縮過(guò)程和固定染色試驗(yàn)；新鮮稀便顯微鏡檢查需包括直接濕片檢查，以觀察寄生蟲(chóng)的動(dòng)力。血液寄生蟲(chóng)（瘧原蟲(chóng)或其他血源性寄生蟲(chóng)）顯微鏡檢查應(yīng)制備厚血涂片和薄血涂片，陽(yáng)性結(jié)果按《傳染病法》中疫情報(bào)告程序上報(bào)。血涂片檢驗(yàn)瘧原蟲(chóng)陽(yáng)性時(shí)，需同時(shí)報(bào)告鑒定結(jié)果。分子微生物學(xué)：每次患者標(biāo)本核酸提取、準(zhǔn)備過(guò)程（手工或自動(dòng)化），需平行設(shè)立陰陽(yáng)性質(zhì)控。需規(guī)定并記錄所有孵育（反應(yīng)）溫度。如果孵育溫度超出規(guī)定范圍，需在發(fā)報(bào)告前采取糾正措施。試驗(yàn)操作和結(jié)果報(bào)告需遵循制造商的建議，而不用其他試劑、探針取代。對(duì)我國(guó)法定傳染病病原微生物的檢驗(yàn)程序應(yīng)滿足如下要求：（a）檢驗(yàn)程序應(yīng)至少符合中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)；（b）當(dāng)培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)人間傳染的高致病性病原微生物（依據(jù)?人間傳染的病原微生物名錄?）時(shí)，應(yīng)按相關(guān)法規(guī)要求進(jìn)行處理，或送至相應(yīng)級(jí)別的生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)。（此頁(yè)為新增）new!5.5.2應(yīng)按優(yōu)先順序依次選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株、質(zhì)控菌株或其它已知菌株對(duì)商業(yè)鑒定系統(tǒng)（包括自動(dòng)、半自動(dòng)、手工）每種板（條/卡/管）的鑒定/藥敏結(jié)果符合性進(jìn)行驗(yàn)證。（新增內(nèi)容）5.5.3除通用內(nèi)容外，檢驗(yàn)程序還應(yīng)包括適宜的培養(yǎng)環(huán)境和足夠的培養(yǎng)時(shí)間；初次分離用非選擇性培養(yǎng)基的平板直徑應(yīng)不小于9cm，應(yīng)只接種一份標(biāo)本。5.5.2需制定程序驗(yàn)證所有環(huán)節(jié)，包括染色、試劑、培養(yǎng)基、抗血清和分析軟件等符合預(yù)期性能。需規(guī)定特殊病原體的識(shí)別、隔離、報(bào)告，以及特殊處理程序。5.5.3除一般內(nèi)容外，程序還需包括適宜的培養(yǎng)環(huán)境和足夠的培養(yǎng)時(shí)間；非選擇性培養(yǎng)基（平板直徑大于9cm）宜只接種一份標(biāo)本。需能夠盡快完成白喉?xiàng)U菌、氣性壞疽菌群、炭疽桿菌、肉毒梭菌和破傷風(fēng)桿菌檢測(cè)；痰標(biāo)本需進(jìn)行常規(guī)涂片、革蘭染色，以確定標(biāo)本的可接受性或培養(yǎng)范圍。new!5.5檢驗(yàn)程序（續(xù)前）5.5.3.3微生物SOP特殊書(shū)寫(xiě)內(nèi)容：氣性壞疽（例：外科特色醫(yī)院：產(chǎn)氣莢膜）

：操作時(shí)防止氣體膨脹

炭疽肉毒梭菌破傷風(fēng)5.6檢驗(yàn)程序的質(zhì)量保證5.6.1實(shí)驗(yàn)室制定的內(nèi)部質(zhì)量控制程序應(yīng)包括整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程，如實(shí)驗(yàn)分析前、中、后（報(bào)告）。質(zhì)量控制應(yīng)滿足如下要求：（a）使用中的染色劑（革蘭染色、特殊染色和熒光染色），至少每周用已知陽(yáng)性和陰性（適用時(shí)）的質(zhì)控菌株檢測(cè)染色程序。（b）凝固酶、過(guò)氧化氫酶、氧化酶、β內(nèi)酰胺酶，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日應(yīng)做陰性和陽(yáng)性質(zhì)控，商業(yè)頭孢菌素試劑的β內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)可遵循制造商的建議。診斷性抗血清試劑，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日至少應(yīng)做多價(jià)血清陰性和陽(yáng)性質(zhì)控。定性試驗(yàn)試劑每次檢測(cè)時(shí)應(yīng)至少包括陽(yáng)性和陰性質(zhì)控菌株或樣本。不含內(nèi)質(zhì)控的直接抗原檢測(cè)試劑，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日應(yīng)檢測(cè)陽(yáng)性和陰性質(zhì)控。（c）實(shí)驗(yàn)室常規(guī)采用的藥敏試驗(yàn)方法應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)菌株連續(xù)檢測(cè)20－30天，每一組藥物/微生物超出參考范圍（抑菌圈直徑或MIC）的頻率應(yīng)小于1/20或2/30。此后，應(yīng)每周使用標(biāo)準(zhǔn)菌株對(duì)藥敏試驗(yàn)進(jìn)行質(zhì)控。應(yīng)保存抗菌藥物敏感性試驗(yàn)資料，并至少每年向臨床醫(yī)師報(bào)告。5.6質(zhì)控（續(xù)前）藥物敏感試驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控每周一次（首次連做20-30天，不合格1/20或3/30）注意事項(xiàng)：注意質(zhì)控用菌種性狀保持厭氧菌應(yīng)以有效的方法檢測(cè)厭氧培養(yǎng)環(huán)境（如以亞甲蘭試條、厭氧菌或適當(dāng)?shù)某绦驒z測(cè)厭氧系統(tǒng)的厭氧條件）。分枝桿菌抗酸染色應(yīng)在實(shí)驗(yàn)當(dāng)日用適當(dāng)?shù)年幮院完?yáng)性質(zhì)控驗(yàn)證；熒光染色應(yīng)每次實(shí)驗(yàn)以陰性和陽(yáng)性質(zhì)控驗(yàn)證。厭氧菌：需以有效的方法檢測(cè)厭氧培養(yǎng)環(huán)境（如以亞甲蘭試條、厭氧菌或適當(dāng)?shù)某绦驒z測(cè)厭氧系統(tǒng)的厭氧條件）。當(dāng)厭氧培養(yǎng)系統(tǒng)出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)，需及時(shí)處理，必要時(shí)通知送檢者。分枝桿菌：抗酸染色需在實(shí)驗(yàn)的每天用適當(dāng)?shù)年?yáng)性和陰性質(zhì)控驗(yàn)證；熒光染色需每次以陰性和陽(yáng)性對(duì)照驗(yàn)證。真菌直接染色（如：抗酸染色，PAS，吉姆薩染色，墨汁染色）檢查患者標(biāo)本時(shí)，應(yīng)每天做陰性和陽(yáng)性質(zhì)控（某些染色如吉姆薩染色，玻片本身作為陰性質(zhì)控。KOH制備的玻片不需要質(zhì)控）。病毒連續(xù)細(xì)胞傳代時(shí)應(yīng)定期監(jiān)測(cè)支原體污染（宜監(jiān)測(cè)陰性未傳代的質(zhì)控株，而不是培養(yǎng)支原體）；應(yīng)監(jiān)測(cè)用于細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)液的動(dòng)物血清的細(xì)胞毒性；應(yīng)具備相應(yīng)的細(xì)胞株用于病毒培養(yǎng)。真菌：直接染色（如：抗酸染色，PAS，吉姆薩染色，墨汁染色）檢查患者標(biāo)本的，需每