(高清版)GB∕T 16886.3-2019 醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 第3部分：遺傳毒性、致癌性和生殖毒性試驗(yàn)

代替GB/T16886.3—2008醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)生殖毒性試驗(yàn)Part3:Testsforgenotoxicity,carcinogenicityandreproductivetoxicity國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014——第4部分：與血液相互作用試驗(yàn)選擇；——第6部分：植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)；——第7部分：環(huán)氧乙烷滅菌殘留量；——第10部分：刺激與皮膚致敏試驗(yàn)；——第11部分：全身毒性試驗(yàn)；——第12部分：樣品制備與參照材料；本部分為GB/T16886的第3部分。本部分代替GB/T16886.3—2008《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第3部分：遺傳毒性、致癌性和生殖毒——GB/T16886.1—2011醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第1部分：風(fēng)險(xiǎn)管理過(guò)程中的評(píng)價(jià)與試驗(yàn) 2007,IDT)—GB/T16886.12—2017醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第12部分：樣品制備與參照材料(ISIⅡGB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014——GB/T16886.18—2011醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第18部分：材料化學(xué)表征(ISO10993-18:2005)請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專(zhuān)利的責(zé)任。本部分由全國(guó)醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC248)歸口?！狦B/T16886.3—1997、GB/T16886.3GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)通常以經(jīng)驗(yàn)為基礎(chǔ)，對(duì)人體安全性方面的關(guān)注是推動(dòng)其發(fā)展的動(dòng)力。諸如癌癥或第二代畸形之類(lèi)的嚴(yán)重和不可逆作用的風(fēng)險(xiǎn)尤其為公眾所矚目。在提供安全醫(yī)療器械的過(guò)程中，此類(lèi)風(fēng)險(xiǎn)被最大程度地降至最低。有關(guān)誘變、致癌和生殖危險(xiǎn)(源)的評(píng)定是此類(lèi)風(fēng)險(xiǎn)控制的基本組成械測(cè)試中的有效性也未能得到充分確認(rèn)。將會(huì)改變對(duì)這些重要的毒理學(xué)作用的認(rèn)識(shí)和理解。在制定本文件時(shí)，所推薦的試驗(yàn)方法是諸多方法中最可被接受的。其他替代試驗(yàn)只要在科學(xué)上能進(jìn)行相關(guān)安全性評(píng)定也是可接受的。當(dāng)需要評(píng)價(jià)某一具體醫(yī)療器械而選擇試驗(yàn)時(shí)，只能對(duì)預(yù)期的人體應(yīng)用和器械與各種生物系統(tǒng)之間GB/T16886的本部分給出了用于檢測(cè)特殊生物學(xué)危險(xiǎn)(源)的試驗(yàn)方法以及試驗(yàn)的選擇策略，在有些情況下有助于危險(xiǎn)(源)的識(shí)別。試驗(yàn)對(duì)于接觸醫(yī)療器械材料的毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn)的管理并非總是必要的Ⅲ1GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)生殖毒性試驗(yàn) 注：ISO10993-1中給出了試驗(yàn)選擇指南。ISO10993-1醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第1部分：風(fēng)險(xiǎn)管理過(guò)程中的評(píng)價(jià)與試驗(yàn)(Biologicalevalua-tionofmedicaldevices—Part1:Evaluationandtestingwithinariskmanagementprocess)ISO10993-2醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第2部分：動(dòng)物福利要求(Biologicalevaluationofmedicaldevices—Part2:Animalwelfarerequirements)ISO10993-6醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第6部分：植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)(Biologicalevaluationofmedicaldevices—Part6:Testsforlocaleffectsafterimplantation)ISO10993-12醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第12部分：樣品制備與參照材料(Biologicalevaluationofmedicaldevices—Part12:Samplepreparationandreferencematerials)ISO10993-18醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第18部分：材料化學(xué)表征(Biologicalevaluationofmedicaldevices—Part18:Chemicalcharacterizationofmaterials)OECD414胚胎發(fā)育毒性研究(PrenatalDevelopmentToxicityStudy)OECD415一代生殖毒性研究(One-GenerationReproductionToxicityStudy)OECD416二代生殖毒性研究(Two-GenerationReproductionToxicity)OECD451致癌性研究(CarcinogenicityStudies)OECD471細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)(BacterialReverseMutationTest)OECD476用Hprt和Xprt基因進(jìn)行的體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)(InVitroMammalianCellGeneMutationTestsusingtheHprtandXprtgenes)OECD487體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)(InVitroMammalianCellMicronucleusTest)2GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014ISO10993-1中給出了在整個(gè)生物學(xué)安全性評(píng)價(jià)過(guò)程中需要考慮的可能引起遺傳毒性、致癌性和前的論證);3GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014當(dāng)器械材料的成分分析提示有關(guān)注的化學(xué)組分存在但卻缺少足夠毒理學(xué)數(shù)據(jù)時(shí)，應(yīng)考慮對(duì)各化學(xué)物進(jìn)行試驗(yàn)。對(duì)各化學(xué)物試驗(yàn)應(yīng)優(yōu)先于復(fù)合材料或浸提液試驗(yàn)，這將有助于提高風(fēng)險(xiǎn)估計(jì)。當(dāng)一個(gè)器試驗(yàn)可能還要在器械的其他狀態(tài)下進(jìn)行，諸如從器械上產(chǎn)生的摩擦碎片或原位固化的材料(接累積接觸周期。開(kāi)展全面的生殖毒性試驗(yàn)還宜基于從器械材料對(duì)雄性/雌性生殖器官作用的已發(fā)表文獻(xiàn)或從亞急性/慢性研究對(duì)生殖系統(tǒng)的組織病理學(xué)研究中獲取的任何信息。在決定進(jìn)行某項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)之前，應(yīng)考慮ISO10993-1的要求。在考慮了4.1～4.3中給出的所遺傳毒性試驗(yàn)用于檢測(cè)兩類(lèi)主要的遺傳損傷：——基因突變(點(diǎn)突變);進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)。細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)可檢測(cè)出嚙齒動(dòng)物試驗(yàn)所檢測(cè)到的大部分遺傳毒性致癌原所產(chǎn)生的相關(guān)遺傳毒在細(xì)菌系統(tǒng)中產(chǎn)生潛在DNA損傷的試驗(yàn)材料與它們?cè)谡婧思?xì)胞中的作用可能不具有相關(guān)性，因測(cè)定總的染色體損傷的系統(tǒng)(用于染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)量異常的體外試驗(yàn)),主要測(cè)定基因突變的系統(tǒng)(HPRT突變?cè)囼?yàn)),以及測(cè)定基因突變和誘裂效應(yīng)的系統(tǒng)[小鼠淋巴瘤胸苷激酶(tk)試驗(yàn)，包含集落數(shù)和大小測(cè)定]。體外染色體損傷和體外小鼠淋巴瘤tk試驗(yàn)得到一致的結(jié)果。兩個(gè)試驗(yàn)結(jié)果中一致被認(rèn)為具有遺傳毒性的化合物在細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)中卻產(chǎn)生陰性結(jié)果。因此，在標(biāo)準(zhǔn)的遺傳毒性試驗(yàn)組合4GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014ISO/TR10993-33:2015中第6章，和以下任何一項(xiàng)；b)OECD473給出的體外哺乳動(dòng)物染色體損傷的細(xì)胞遺傳評(píng)估試驗(yàn)，經(jīng)修改適用于醫(yī)療器械，按ISO/TR10993-33:2015中第7章；或c)OECD490給出的體外小鼠淋巴瘤tk試驗(yàn)，包括檢測(cè)小克隆(增殖緩慢)和大克隆，經(jīng)修改適d)OECD487給出的體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)，用于檢測(cè)染色體損傷和非整倍性，于醫(yī)療器械，按ISO/TR10993-33:2015中第8章。證后需要考慮進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)。在嚙齒類(lèi)動(dòng)物造血細(xì)胞進(jìn)行的體內(nèi)染色體損傷試驗(yàn)可包括用OECD475給出的骨髓細(xì)胞分析染色體突變或OECD474中給出的用骨髓細(xì)胞或外周血紅細(xì)胞分析微核(按ISO/TR10993-33:2015中第10章或第11章)。適用時(shí)，應(yīng)按ISO10993-12的要求或參見(jiàn)附錄A,使用兩種浸提液在嚙齒類(lèi)動(dòng)物造血細(xì)胞中進(jìn)行如果使用者能證實(shí)從試驗(yàn)樣品中獲取的可浸提物的量小于經(jīng)充分表征在體內(nèi)微核試驗(yàn)中能引起陽(yáng)參考文獻(xiàn)[35]中給出了順鉑(cispl性的陽(yáng)性反應(yīng)劑量為0.3mg/kg。如果按5.2.2進(jìn)行遺傳毒性試驗(yàn)且兩個(gè)體外試驗(yàn)的結(jié)果為陰性，則無(wú)需進(jìn)行進(jìn)一步的動(dòng)物體內(nèi)遺傳毒性試驗(yàn)。c)通過(guò)化學(xué)表征對(duì)雜質(zhì)的識(shí)別(即材料組分研究或分析試驗(yàn))。步驟2:從機(jī)理方面對(duì)各識(shí)別出的因子進(jìn)行證據(jù)權(quán)重(WOE)評(píng)定和要考慮的作用方式(MOA)。a)是直接DNA還是間接DNA反應(yīng)作用方式。b)非整倍體和多倍體問(wèn)題。是否涉及異倍性機(jī)制。步驟3:判定點(diǎn)。a)毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)定框架內(nèi)結(jié)果的解釋和WOE/MOA分析認(rèn)為對(duì)預(yù)期使用器械患者存在低/可b)毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)定框架內(nèi)結(jié)果的解釋和WOE/MOA分析認(rèn)為對(duì)預(yù)期使用器械的患者可能有潛如果確定結(jié)果是a),無(wú)需再進(jìn)行附加試驗(yàn)或評(píng)價(jià)。如果確定結(jié)果是b),繼續(xù)進(jìn)行步驟4。步驟4:進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)管理。按遺傳毒性危險(xiǎn)(源)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)管理或選擇適宜的體外和/或體內(nèi)后續(xù)試驗(yàn)。步驟5:選擇和進(jìn)行附加的體外和/或體內(nèi)試驗(yàn)。應(yīng)在體外試驗(yàn)所識(shí)別的最適宜終點(diǎn)的基礎(chǔ)上選擇相應(yīng)的體內(nèi)試驗(yàn)。通常使用的體內(nèi)試驗(yàn)包括：5GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014——OECD488給出的轉(zhuǎn)基因基因突變?cè)囼?yàn)。應(yīng)對(duì)最適宜試驗(yàn)系統(tǒng)的選擇決定進(jìn)行論證并形成文件。注：最近，OECD489指南草案已開(kāi)發(fā)一種遺傳毒性試驗(yàn)，用于檢驗(yàn)化學(xué)物對(duì)嚙齒類(lèi)動(dòng)物作用的堿性單細(xì)胞凝膠電泳(彗星)試驗(yàn)。該試驗(yàn)可能為醫(yī)療器械試驗(yàn)提供有用信息。應(yīng)嘗試證實(shí)試驗(yàn)樣品已經(jīng)到達(dá)靶器官。對(duì)于嚙齒動(dòng)物體內(nèi)微核試驗(yàn)或嚙齒動(dòng)物骨髓中期分析試——血液或血清中特定浸提化合物的定量分析；步驟6:所有積累數(shù)據(jù)的再解釋并確定該試驗(yàn)樣品是否具有遺傳毒性。在某些情況下，體外試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果可能不具有相關(guān)性。宜考慮下列情況以確定所有體外試驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)性。所列各項(xiàng)并不全面但有助于對(duì)過(guò)程判定：a)最初的兩個(gè)體外試驗(yàn)中只有一個(gè)為陽(yáng)性結(jié)果；b)在相似機(jī)理的終點(diǎn)的進(jìn)一步體外研究不能確定陽(yáng)性結(jié)果；c)作用機(jī)理信息表明體外試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果與體內(nèi)情況不相關(guān)(如高細(xì)胞毒性、滲透壓等);d)具有該試驗(yàn)樣品到達(dá)靶器官證據(jù)的體內(nèi)試驗(yàn)表明無(wú)遺傳毒性作用。所有證據(jù)權(quán)重(WOE)分析和所有數(shù)據(jù)組的解釋?xiě)?yīng)連同其結(jié)論形成文件。在某些情況下，可能需要除非該樣品能溶于與試驗(yàn)系統(tǒng)相容的溶劑，否則應(yīng)在材料或醫(yī)療器械中遺傳毒性殘留物濃度足以在試驗(yàn)系統(tǒng)中產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)的最大浸提能力水平的基礎(chǔ)上選擇適宜浸提溶劑，但不能有器械或試驗(yàn)樣品的降解。應(yīng)在與遺傳毒性試驗(yàn)相容的基礎(chǔ)上選擇試驗(yàn)系統(tǒng)的浸提介質(zhì)。中的方法C)或加嚴(yán)浸提液(如附錄A中的方法B)進(jìn)行試驗(yàn)。除非經(jīng)過(guò)論證，否則器械材料宜包括所有最終配方和加工過(guò)程。通常用原材料進(jìn)行試驗(yàn)是不合適如適用，試驗(yàn)材料宜采用兩種溶劑按照ISO10993-12或附錄A的規(guī)定浸提。6致癌性試驗(yàn)在確定進(jìn)行致癌性試驗(yàn)之前，應(yīng)考慮ISO10993-1的要求。應(yīng)在評(píng)價(jià)醫(yī)療器械使用中引發(fā)癌癥風(fēng)可將致癌性試驗(yàn)設(shè)計(jì)成在單項(xiàng)研究中同時(shí)能檢測(cè)慢性毒性和致癌性。當(dāng)在單項(xiàng)研究中同時(shí)評(píng)價(jià)慢性毒性和致癌性時(shí)，在研究設(shè)計(jì)階段特別要注意確保劑量組是適宜的。這有助于身毒性導(dǎo)致的未到期死亡或?qū)⑺劳雎式抵磷畹?，從而確保到研究終點(diǎn)(即正常壽命期)時(shí)存活動(dòng)物得到數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)水平。注：可采用適宜的體外細(xì)胞轉(zhuǎn)化系統(tǒng)進(jìn)行致癌性預(yù)篩，如OECD214給出的敘利亞倉(cāng)鼠胚胎(SHE)細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)以及Balb3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)。附錄C給出了試驗(yàn)系統(tǒng)的說(shuō)明，附錄D中給出了細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)系統(tǒng)的附加信息。6GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014應(yīng)對(duì)遺傳毒性材料的致癌性試驗(yàn)進(jìn)行科學(xué)論證。對(duì)于遺傳毒性材料，多數(shù)情況可推定為是一個(gè)致癌危險(xiǎn)(源)并對(duì)其進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)管理。在缺乏證據(jù)來(lái)排除非遺傳毒性材料致癌性風(fēng)險(xiǎn)的情況下，應(yīng)考慮進(jìn)行致癌性試驗(yàn)的情況可能包括——降解時(shí)間超過(guò)30d的材料；——進(jìn)入人體和(或)體腔累計(jì)接觸時(shí)間超過(guò)30d的材料。論證后不需進(jìn)行試驗(yàn)的情況包括：——預(yù)期引起固態(tài)致癌性的材料(按附錄E的規(guī)定);——受方法學(xué)所限或試驗(yàn)的預(yù)示價(jià)值不高的其他情況。于相似的患者群體、用于相似的作用部位和較短或相似的累積作用時(shí)間的評(píng)價(jià)說(shuō)明。人類(lèi)使用史宜形要性和研究設(shè)計(jì)進(jìn)行論證。該論證應(yīng)考慮植入致癌性研究在生物學(xué)安全性評(píng)價(jià)中所具有的不確定性，如果按ISO10993-1認(rèn)為慢性毒性和致癌性都需要考慮，并確定有必要做試驗(yàn)時(shí)，如可行，應(yīng)按OECD453進(jìn)行試驗(yàn)。如果按ISO10993-1只需要考慮開(kāi)展致癌性研究，并確定需要做該試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)按OECD451進(jìn)行試驗(yàn)。一種動(dòng)物種屬足以檢驗(yàn)醫(yī)療器械致癌性。應(yīng)按ISO10993-2選擇和論證動(dòng)物種屬并形成文件。療器械浸提物進(jìn)行致癌性研究。器械產(chǎn)生的摩擦碎片或原位固化的材料(如骨水泥、黏合劑和聚合前混合物)。原位固化器械指南應(yīng)符動(dòng)物實(shí)驗(yàn)使用的最高劑量是最大耐受量或動(dòng)物模型的生理限量。該劑量以所估計(jì)的人體最大接觸劑量(重量和/或表面積每千克體重)的整數(shù)倍表示。被評(píng)價(jià)的組織應(yīng)包括OECD451或OECD453中列出的相關(guān)組織和植入部位組織及其鄰近組織。對(duì)器械材料浸提液或特定化學(xué)物進(jìn)行研究時(shí)，應(yīng)說(shuō)明不考慮該材料的表面特性會(huì)致癌的理由。按劑量會(huì)受動(dòng)物模型的生理限量的限制。該劑量以估計(jì)的人體最大接觸劑量(單位為重量和/或表面積每取所估計(jì)的人體最大接觸劑量(單位為重量和/或表面積每千克體重)的100倍安全因子，前提是該劑量宜與該模型的生理承受能力相適宜。陰性對(duì)照組通常是臨床可接受的相似形狀和狀態(tài)的材料或已7GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014有文獻(xiàn)證明無(wú)致癌潛能的參照對(duì)照材料(如聚乙烯)。接觸情況：一個(gè)典型患者將接受最大為11g聚合物。考慮用100倍的安全因子，小鼠的劑量等于19g/kg。這樣，一只體重25g的小鼠將接受0.475g。聚合物可用圓盤(pán)形狀的試樣試驗(yàn)。推薦圓盤(pán)試樣的直徑不超過(guò)15mm,厚度不超過(guò)2mm~被評(píng)價(jià)組織應(yīng)包括OECD451或OECD453中列出的相關(guān)組織和植入部位組織及其鄰近組織。動(dòng)物的兩年致癌性試驗(yàn)相比，在轉(zhuǎn)基因模型中進(jìn)行的致癌性試驗(yàn)周期較短(通常6個(gè)月),需要?jiǎng)游锪枯^少。除了周期較短之外，該研究還具有不會(huì)被固態(tài)成瘤現(xiàn)象干擾的優(yōu)點(diǎn)。因該轉(zhuǎn)基因模型研究?jī)H持續(xù)6個(gè)月，而固態(tài)成瘤的發(fā)展需要8個(gè)月～9個(gè)月時(shí)間，所以不會(huì)形成干擾因素。RasH2轉(zhuǎn)基因小鼠模型是已被用于評(píng)定醫(yī)療器械致癌性風(fēng)險(xiǎn)的主要轉(zhuǎn)基因模型。的研究設(shè)計(jì)中通常包括一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。在確定進(jìn)行生殖和發(fā)育毒性試驗(yàn)之前，應(yīng)考慮ISO10993-1的要求。應(yīng)在評(píng)價(jià)受試群體的生殖組對(duì)醫(yī)療器械進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)定認(rèn)為實(shí)際使用中生殖和發(fā)育毒性的風(fēng)險(xiǎn)已充分降低到可接受的毒理學(xué)水注：附錄F還給出了發(fā)育毒性的替代試驗(yàn)(體外胚胎毒性試驗(yàn))的相關(guān)信息。 物或可瀝濾物；——儲(chǔ)能醫(yī)療器械；——可瀝濾化合物的全身接觸程度(如果器械不直接接觸生殖組織);——該器械材料的代謝產(chǎn)物；——遺傳毒性結(jié)果。當(dāng)上述一個(gè)或多個(gè)因素信息不充分，且通過(guò)其他風(fēng)險(xiǎn)控制措施不能降低該風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，需要進(jìn)行試驗(yàn)8GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014試驗(yàn)應(yīng)在器械終產(chǎn)品或試驗(yàn)材料上進(jìn)行。如需進(jìn)行試驗(yàn)，可先進(jìn)行OECD421,以提供可能影響生殖和(或)發(fā)育的初步信息。此類(lèi)試驗(yàn)的陽(yáng)按OECD414、OECD415或OECD416啟動(dòng)一個(gè)適宜的明確證實(shí)是否有生殖毒性的試驗(yàn)體系是可能的。樣品制備應(yīng)按ISO10993-12進(jìn)行。只要可能，醫(yī)療器械都應(yīng)在最終狀態(tài)下進(jìn)行試驗(yàn)。對(duì)于有其他對(duì)于儲(chǔ)能醫(yī)療器械，應(yīng)以動(dòng)物全身接觸為宜。使用劑量應(yīng)為人體與生殖器官接觸所預(yù)期劑量的整數(shù)倍。以最大耐受量或動(dòng)物模型的生理限量作為動(dòng)物接觸的最大劑量，該劑量應(yīng)為估計(jì)的人體最大接觸劑量(單位為重量和/或表面積每千克體重)的整數(shù)倍表示。體內(nèi)試驗(yàn)應(yīng)按ISO10993-2進(jìn)行。——?jiǎng)┝?對(duì)儲(chǔ)能醫(yī)療器械的情況);——浸提介質(zhì)；如果其他試驗(yàn)表明對(duì)雄性生殖系統(tǒng)有潛在影響時(shí)，則應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的雄性生殖毒性試驗(yàn)。最近，已經(jīng)開(kāi)發(fā)出體外生殖試驗(yàn)系統(tǒng)，這些試驗(yàn)系統(tǒng)可用于生殖和發(fā)育毒性的預(yù)篩試驗(yàn)。a)材料和(或)醫(yī)療器械的描述(如：化學(xué)成分、加工過(guò)程、狀態(tài)調(diào)節(jié)和表面處理),包括其預(yù)期c)分析方法，包括定量限值的描述；d)符合適宜的現(xiàn)行/經(jīng)確認(rèn)的良好實(shí)驗(yàn)室/質(zhì)量規(guī)范的聲明，如實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范(GLP)或f)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法；g)結(jié)果解釋和討論；h)試驗(yàn)報(bào)告中應(yīng)包括相關(guān)OECD導(dǎo)則或附錄C和附錄D以及ISO/TR10993-33:2015中規(guī)定i)實(shí)驗(yàn)室的名稱(chēng)和認(rèn)證；j)試驗(yàn)日期；k)負(fù)責(zé)人的姓名和簽字。9GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014A.1總則本附錄為醫(yī)療器械遺傳毒性試驗(yàn)選擇某一適宜的樣品制備程序給出指南。在方法選擇中，使用者或滅菌這類(lèi)加工過(guò)程，也可能產(chǎn)生新的化學(xué)物。所有這些物質(zhì)可能從器械遷移至人體并宜對(duì)其進(jìn)行風(fēng)可從文獻(xiàn)資料和/或制造商或供應(yīng)商處獲得生物學(xué)風(fēng)險(xiǎn)分析相關(guān)的信息。如果可以獲得最終器械或經(jīng)過(guò)相同生產(chǎn)過(guò)程的樣品(fascimile)的定性和定量的充分的表征信息，——危險(xiǎn)(源)識(shí)別；——風(fēng)險(xiǎn)估計(jì)。適合于識(shí)別生物學(xué)危險(xiǎn)(源)和估計(jì)它們的風(fēng)險(xiǎn)。選擇適宜的樣品制備方法對(duì)從遺傳毒性試驗(yàn)中獲取相應(yīng)的結(jié)果至關(guān)重要。不適宜的樣品制備方法可能會(huì)導(dǎo)致低估遺傳毒性的風(fēng)險(xiǎn)。例如，用水對(duì)聚合物的浸提曾被認(rèn)為可以模擬聚合物向血液中原位管路中的鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)。他們證實(shí)了可從人血漿中浸提出大量的DEHP,并且用人血漿浸提出的DEHP溶出物的百分比與用40%乙醇浸提的結(jié)果相似?；谠撗芯浚琌ba等77用40%乙醇浸提得到的浸提液進(jìn)行家兔輸注試驗(yàn)，成功再現(xiàn)了在使用某一品牌的醋酸鹽型透析器進(jìn)行A.2器械材料A.2.2聚合物(包括天然聚合物)聚合物是由含一連串的一種或多種單體單元為特征的分子組成的一個(gè)至少含有3個(gè)單體的單分子量大分子化學(xué)物。這些單體以共價(jià)方式結(jié)合至少一個(gè)其他單體或其他反應(yīng)物并且組成少于一個(gè)相同分子量的單分子量大分子。這些分子必須分布在一定分子量范圍內(nèi)，而分子量的不同主要是由單體數(shù)量GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014A.2.2.1聚合物中含有的LMWC聚合材料中通常含有少量的LMWC,如添加劑、催化劑、加工助劑和放射性產(chǎn)品。這些LMWC可能具有潛在的遺傳毒性。在侵入性接觸的情況下，LMWC可從聚合物中遷移出并進(jìn)入患者體內(nèi)。因聚合物器械向體液中釋放LMWC被認(rèn)為是一種與LMWC從食品包裝向食品中遷移相似的現(xiàn)象。——聚合物與食品間LMWC的分配平衡常數(shù)(partitionequilibriumconstant),參見(jiàn)參考文獻(xiàn)[82]。因此，食品包裝中的假設(shè)和方程式可用于醫(yī)療器械中LMWCs的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)。中并從聚合物中遷移出來(lái)。由于潛在的遺傳毒性，宜考慮其結(jié)構(gòu)中含有功能性化學(xué)反應(yīng)基團(tuán)的低聚物參數(shù)對(duì)患者健康的作用：——數(shù)均分子量；——低分子量含量；——作為聚合物結(jié)構(gòu)中一部分的生物可利用金屬的存在。A.2.2.3生物可降解聚合物后發(fā)生顯著分解的聚合物，即使這個(gè)過(guò)程實(shí)際上并不是使用該材料的主要意圖。對(duì)于生物可降解聚合物，聚合物中的LMWC會(huì)全部釋放到患者體內(nèi)。多數(shù)生物可降解聚合物與聚酯相似，通常不具有OECD報(bào)告中所定義的反應(yīng)性功能性基團(tuán)。宜評(píng)價(jià)生物可降解聚合物中含有的或加入的LMWC的遺量和遺傳毒性帶來(lái)的健康問(wèn)題。例如，已經(jīng)在植入金屬髖關(guān)節(jié)植入物的患者的周?chē)馨图?xì)胞中發(fā)現(xiàn)體內(nèi)遺傳毒性反應(yīng)。很多金屬離子在人體中發(fā)揮其重要的調(diào)節(jié)作用并且這些作用依賴(lài)于它們的化學(xué)特性和價(jià)態(tài)。金屬離子與體液(如血液、淋巴液和尿液)中的蛋白結(jié)合并分配于不同的生物分布區(qū)域。金屬依據(jù)文獻(xiàn)資料對(duì)金屬離子的遺傳毒性概況進(jìn)行評(píng)價(jià)和評(píng)定。GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014A.3樣品制備方法A.3.1總則理想的樣品制備設(shè)計(jì)方案是將從整個(gè)器械制得的可浸提物的總量應(yīng)用于試驗(yàn)系統(tǒng)中來(lái)估計(jì)某一器驗(yàn)樣品的一部分進(jìn)行浸提并將其應(yīng)用于試驗(yàn)系統(tǒng)。對(duì)預(yù)期用于人體的任何材料或器械的樣品制備程序的選擇，需要一個(gè)考慮到材料或器械的化學(xué)成分和理化特性的結(jié)構(gòu)化方法。樣品制備宜參照?qǐng)DA.1中的決定樹(shù)。該圖表述了對(duì)某一器械材料選擇浸提方法的決定過(guò)程(方法A、方法B或方法C),除非該醫(yī)療器械或材料應(yīng)按A.4中所描述的特殊樣品所使用的溶劑或浸提溶劑不宜與該試驗(yàn)樣品有可疑的化學(xué)反應(yīng)。方法A需要將試驗(yàn)樣品直接應(yīng)用于試驗(yàn)系統(tǒng)。當(dāng)試驗(yàn)樣品能溶解于或懸浮于與試驗(yàn)系統(tǒng)相容的是物的百分比(方法B預(yù)分比是否≥0.5%或質(zhì)量<0.5g器分比是否≥1%否是圖A.1選擇某一樣品制備步驟的結(jié)構(gòu)化方法當(dāng)試驗(yàn)樣品既不溶于也不能懸浮于極性或非極性溶劑時(shí)，依據(jù)組成該器械的材料的物理特征從方法B和方法C選取浸提方法。方法B或方法C的選擇依據(jù)該試驗(yàn)樣品中可溶出物的百分比。甲醇更適宜于浸提水溶性物質(zhì)而丙酮?jiǎng)t更適宜于浸提脂溶性物質(zhì)。分別蒸發(fā)甲醇和丙酮浸提液至干燥來(lái)測(cè)定試驗(yàn)系統(tǒng)每一溶劑中獲取的可浸提物的百分比。宜報(bào)告每一溶劑中可浸提物的百分比。GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014降解或不能有效浸提出試驗(yàn)材料中的殘留物。表A.1有助于選擇適宜的醫(yī)療器械浸提溶劑。該表列出了常用的浸提溶劑和它們的辛醇-水分配溶劑二甲基甲酰胺—1.01甲醇—0.74乙醇—0.30丙酮/2-丙酮—0.24二氯甲烷+1.25氯仿+1.97正己烷+3.90”這些化學(xué)物可作為對(duì)照來(lái)說(shuō)明安全性。A.3.2方法A將試驗(yàn)樣品溶解于或懸浮(或部分溶解)于溶劑中。如果供試品溶于水或鹽水這類(lèi)的水性溶劑中，則體外哺乳動(dòng)物試驗(yàn)系統(tǒng)中，試驗(yàn)樣品制備液的終體積不宜超過(guò)試驗(yàn)系統(tǒng)相容溶液的10%。體外哺乳試驗(yàn)樣品制備液。細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)適用的最大濃度為5mg/板。宜根據(jù)遺傳毒性試驗(yàn)的內(nèi)容選擇試驗(yàn)劑量。有些情況下對(duì)劑量范圍進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)可能有助于選擇適宜的劑量。如果預(yù)期是非毒性的，選擇單次最大劑量水平也是合適的。各分析中的劑量評(píng)價(jià)指導(dǎo)應(yīng)符對(duì)于體內(nèi)試驗(yàn)，通?？梢砸淮巫⑸浣o予的試驗(yàn)樣品制備液的最大體積是，小鼠為20mL/kg體重，大鼠為10mL/kg體重。對(duì)于非毒性試驗(yàn)樣品制備液，最大劑量水平為2000mg/kg體重。對(duì)于毒性使用者可參考ISO/TR10993-33:2015中的詳細(xì)信息?？墒褂脜⒖嘉墨I(xiàn)[107]中提供的設(shè)定最高劑量溶液的原則。A.3.3方法B為了選擇方法B或方法C,宜參見(jiàn)A.3.3.2試驗(yàn)樣品制備和參見(jiàn)A.3.3.3浸提程序進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。a)對(duì)于質(zhì)量<0.5g的器械，如接觸鏡或人工晶狀體，如果試驗(yàn)樣品中可浸提物的百分比≥1%,則宜使用方法B。b)對(duì)于質(zhì)量≥0.5g的器械，如果試驗(yàn)樣品中可浸提物的百分比≥0.5%,則應(yīng)使用方法B。GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014A.3.3.2試驗(yàn)樣品制備溶劑中。染色體畸變?cè)囼?yàn)或小鼠淋巴瘤試驗(yàn)中培養(yǎng)液中有機(jī)或水性溶劑的最終體積不宜超過(guò)1%(有染色體畸變?cè)囼?yàn)或體外小鼠淋巴瘤試驗(yàn)中最大的試驗(yàn)濃度為5mg/mL。A.3.3.3步驟——將浸提液倒入一個(gè)已知恒重質(zhì)量(m?)的梨形燒瓶中，用減壓濃縮儀在≤30℃的條件下使浸 Wr=m?m1…………(A.1)m?——梨形燒瓶的質(zhì)量；m?——可浸提液蒸發(fā)后梨形燒瓶的質(zhì)量。GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014按式(A.2)用可浸提殘留物的質(zhì)量比試驗(yàn)樣品的質(zhì)量乘以100計(jì)算可浸提物的百分比。式中：%e——可浸提物的百分比；m?——浸提前試驗(yàn)樣品的質(zhì)量?！涗洸?bào)告每一溶劑中可浸提物的百分比。該研究報(bào)告宜包含浸提溶劑的選擇原則以及每種受試溶劑的殘留物百分比。A.3.4方法C方法C與ISO10993-12中所述的模擬使用浸提法相似。用與該試驗(yàn)系統(tǒng)相容的溶劑/介質(zhì)對(duì)試驗(yàn)樣品進(jìn)行浸提。將試驗(yàn)樣品制備液應(yīng)用于該試驗(yàn)系統(tǒng)。浸提液在24h內(nèi)使用。A.對(duì)于細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)，將試驗(yàn)樣品切成小塊，如可能，按ISO10993-12進(jìn)行浸提。A.對(duì)于體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞試驗(yàn)，將試驗(yàn)樣品切成小片，如可能，按ISO10993-12進(jìn)行浸提。A.如使用不含血清的培養(yǎng)基作為極性溶劑浸提，則在浸提原液中加入血清后再將其接觸細(xì)胞。含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液中的試驗(yàn)浸提液(作為非極性溶劑)被作為浸提原液試驗(yàn)。如果用鹽水作為極性溶劑浸提，宜使用含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液將其稀釋成至10%再接觸細(xì)胞。如果用二甲基亞砜(DMSO)或乙醇浸提液宜使用含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基將其稀釋成至1%。對(duì)于有細(xì)胞毒性的浸提液，選擇適宜試驗(yàn)浸提液劑量時(shí)宜考慮試驗(yàn)中可接受的細(xì)胞毒性限值。注：如果使用含或不含血清細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行浸提時(shí)，(37±1)℃條件下浸提(48±2)h也是可以接受的。A.對(duì)于體內(nèi)試驗(yàn)，將試驗(yàn)樣品切成小片，如可能，按本部分規(guī)定進(jìn)行浸提。A.按所使用的溶劑，將試驗(yàn)浸提液通過(guò)靜脈(鹽水)或腹腔(疏水性)注射給試驗(yàn)動(dòng)物。小鼠注射體積不宜超過(guò)20mL/kg體重，大鼠不宜超過(guò)10mL/kg體重。A.4特殊樣品制備程序的附加指南A.4.1生物可降解聚合物對(duì)于用生物可降解聚合物制造的器械，出于釋放給患者的LMWC的總量的考慮，可使用改進(jìn)后的方法B來(lái)制備試驗(yàn)材料。用適合于溶解和再沉淀的溶劑過(guò)濾該溶液來(lái)去除沉淀物。報(bào)告過(guò)濾后濾紙上的任何沉淀物。將濾過(guò)液中的溶劑蒸發(fā)(如，可使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器)。記錄所產(chǎn)生的殘留物的量。用與試驗(yàn)系統(tǒng)相容的溶劑/介質(zhì)來(lái)溶解或懸浮殘留物并應(yīng)用于該試驗(yàn)系統(tǒng)。A.4.2無(wú)機(jī)材料：金屬、合金和陶瓷中的摩擦碎片在評(píng)定像髖關(guān)節(jié)假體這樣的無(wú)機(jī)材料制成的器械的遺傳毒性時(shí)，主要考慮從摩擦碎片和/或在臨床接觸過(guò)程中因腐蝕而釋放的金屬離子以及它們的釋放量的遺傳毒性潛能。因?yàn)楸静糠种械脑囼?yàn)被設(shè)計(jì)成測(cè)試最終器械的浸提物(溶液中)的遺傳毒性，而不是微粒的遺傳毒性，因此還需要用其他方法來(lái)評(píng)定摩擦碎片或微粒的遺傳毒性潛能。A.4.3低分子量化學(xué)物(LMWC)當(dāng)試驗(yàn)樣品由單個(gè)或多個(gè)LMWC組成時(shí)，可用它和一種與試驗(yàn)系統(tǒng)相容的介質(zhì)的溶解液/懸浮液來(lái)評(píng)價(jià)其遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)。方法A適用。GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014(資料性附錄)后續(xù)評(píng)價(jià)流程圖5.2.2中得到陽(yáng)性結(jié)果步驟1:識(shí)別初步遺傳毒性結(jié)果中的影響因素步驟2:評(píng)價(jià)機(jī)理權(quán)重(WOE)和作用步驟3:浸提液或化學(xué)物是否是遺傳毒性物質(zhì)?否是步驟4:遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)是否能得到否是否將浸提液或化學(xué)物劃分為有遺傳毒性否步驟5:選擇和進(jìn)行附加的是是圖B.1后續(xù)評(píng)價(jià)流程圖GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014(資料性附錄)試驗(yàn)系統(tǒng)的說(shuō)明C.1遺傳毒性試驗(yàn)遺傳毒性試驗(yàn)的主要作用是采用試驗(yàn)細(xì)胞或生物體來(lái)研究生殖細(xì)胞和體細(xì)胞基因改變的風(fēng)險(xiǎn)?？茖W(xué)數(shù)據(jù)通常支持體細(xì)胞內(nèi)DNA損傷是引發(fā)癌癥的關(guān)鍵事件的假說(shuō)。因此，有些DNA損傷試驗(yàn)有助于推斷(受試物的)致癌活性的調(diào)查。在試驗(yàn)導(dǎo)則中列出了大約15種不同的試驗(yàn)，從中選擇最適合、滿(mǎn)足特定要求的試驗(yàn)取決于諸多因佳試驗(yàn)組合的國(guó)際協(xié)議。值得注意的是，目前正在使用或發(fā)展中的其他一些致突變性試驗(yàn)盡管沒(méi)有采用OECD導(dǎo)則，但可能也還是有用的。宜關(guān)注藥品ICH/S2B協(xié)議。在經(jīng)過(guò)各種修復(fù)過(guò)程的影響后，與DNA相互作用的化學(xué)物產(chǎn)生的損傷可導(dǎo)致基因水平上的遺傳變異(如基因或點(diǎn)突變、小缺失、有絲分裂重組或顯微鏡下可見(jiàn)的各種染色體改變),目前已有針對(duì)每種變異類(lèi)型的試驗(yàn)方法。由于沒(méi)有單個(gè)試驗(yàn)?zāi)芤钥山邮艿臏?zhǔn)確和重現(xiàn)性的水平檢測(cè)出哺乳動(dòng)物的誘變劑和致癌原，所以通常科學(xué)的做法是采用一組試驗(yàn)。通過(guò)測(cè)定基因突變和染色體損傷的試驗(yàn)可得出某種物質(zhì)的致突變性的慮體內(nèi)遺傳毒性試驗(yàn)。選擇進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)將受到可瀝濾物累積位點(diǎn)的影響。很多情況下，嚙齒類(lèi)動(dòng)物血細(xì)胞染色體損傷的體內(nèi)試驗(yàn)是合適的。有些情況下，位點(diǎn)特異性或遺傳終點(diǎn)特異性試驗(yàn)是可以說(shuō)明的。多數(shù)情況下，這些試驗(yàn)沒(méi)有國(guó)際認(rèn)可的方案。對(duì)于大多數(shù)考慮需要進(jìn)行遺傳毒性試驗(yàn)的醫(yī)療器械C.2致癌試驗(yàn)長(zhǎng)期致癌性研究的目的是在試驗(yàn)動(dòng)物壽命周期的主要階段內(nèi)，通過(guò)一適當(dāng)途徑接觸不同劑量試驗(yàn)物質(zhì)，在接觸期間或接觸之后觀察試驗(yàn)動(dòng)物腫瘤病變的發(fā)展。按附錄E的要求，這種試驗(yàn)需要有精心生殖毒性試驗(yàn)包括生殖、生育力和胚胎-胎兒發(fā)育幾個(gè)方面。男性和女性的生育能力可能受到影響，其影響范圍可從生殖能力輕微降低至不育致畸性是由于物質(zhì)對(duì)胚胎和胎兒發(fā)育產(chǎn)生不良作用引起的。生殖毒性對(duì)人類(lèi)健康有十分重要的影響。試驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展使包括生殖毒理學(xué)所有方面在內(nèi)的組合試驗(yàn)的概念逐步形成。GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014(資料性附錄)嚙齒類(lèi)動(dòng)物體內(nèi)模型被用于化學(xué)對(duì)人類(lèi)致癌性風(fēng)險(xiǎn)的實(shí)驗(yàn)性研究。然而，嚙齒類(lèi)致癌試驗(yàn)是昂貴并且耗時(shí)的。已開(kāi)發(fā)出一些基于動(dòng)物試驗(yàn)方法的體外替代方法。這些方法中，能夠模擬體內(nèi)多階段致癌性的細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)已被推薦用于預(yù)測(cè)化學(xué)物質(zhì)的致癌潛能。被定義為誘導(dǎo)有致癌特性的培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生特定的表型變異。通過(guò)和哺乳細(xì)胞的接觸，致癌物可以誘導(dǎo)細(xì)胞表型的改變。已經(jīng)獲得惡變細(xì)胞特性的轉(zhuǎn)化后細(xì)胞有能力在易感動(dòng)物中誘發(fā)腫瘤。體外轉(zhuǎn)化細(xì)胞表現(xiàn)出與腫瘤相關(guān)的形態(tài)變化。這種細(xì)胞形態(tài)學(xué)的轉(zhuǎn)化包括了所培養(yǎng)的細(xì)胞在細(xì)胞行為和生長(zhǎng)控制方敘利亞鼠胚胎(SHE)轉(zhuǎn)化試驗(yàn)已被描述成對(duì)嚙齒類(lèi)致癌原最具預(yù)測(cè)性的短期試驗(yàn)。Schectman[34描述了隨著時(shí)間的推移，嚙齒類(lèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)方法學(xué)已變得使SHE細(xì)胞試驗(yàn)的結(jié)果比以前的方法更還有，Balb/c3T3細(xì)胞或SHE細(xì)胞中的兩階段細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)好像無(wú)論對(duì)誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的化合物檢組織特異性的，所以不太可能將這一試驗(yàn)和一項(xiàng)用于檢測(cè)非整倍體劑的試驗(yàn)組合成能充分檢測(cè)所有類(lèi)倍體劑的主要作用終點(diǎn)檢測(cè)方法在內(nèi)的試驗(yàn)。參考文獻(xiàn)[13]和參考文獻(xiàn)[14]中給出了體外細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)指南和評(píng)審。GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014(規(guī)范性附錄)E.1異物致癌性——植入物的大小(大的植入物通常會(huì)比小的植入物產(chǎn)生更大的肉瘤);——植入物的形狀；——植入物的光滑度(表面粗糙的植入物致癌性低于表面光滑的植入物); 植入后8個(gè)月～9個(gè)月開(kāi)始檢測(cè)到這種成瘤現(xiàn)象。這段潛伏期后，成瘤概率持續(xù)增加。E.2動(dòng)物福利考慮植入致癌性研究需要在大量試驗(yàn)動(dòng)物和對(duì)照(假手術(shù))的動(dòng)物上進(jìn)行侵入性外科手術(shù)。GB/T16886.3—2019/ISO10993-3:2014(資料性附錄)體外胚胎毒性試驗(yàn)在發(fā)育毒性研究領(lǐng)域，有許多動(dòng)物試驗(yàn)的替代試驗(yàn)。30年來(lái)，已經(jīng)開(kāi)發(fā)出涵蓋細(xì)胞、組織和器官培養(yǎng)到整個(gè)胚胎培養(yǎng)的一整套體外試驗(yàn)。根據(jù)ECVAM工作組對(duì)生殖毒性的推薦[87],ECVAM發(fā)起和資助了三種體外胚胎毒性試驗(yàn)的確認(rèn)研究。其中兩項(xiàng)試驗(yàn)是從妊娠的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中獲取胚胎組織，即在小鼠微基質(zhì)(MM)試驗(yàn)中使用獲取的初始胚胎細(xì)胞，參見(jiàn)參考文獻(xiàn)[88],或在大鼠的全胚胎培養(yǎng)(WEC)試驗(yàn)中使用胚胎，參見(jiàn)參考文獻(xiàn)[89],[90],[91],[92]。相反，在胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)中，參見(jiàn)參考文獻(xiàn)[92][93][94][95],則使用了永生化的小鼠胚胎干細(xì)胞(EST)。該確認(rèn)研究的主要目的是評(píng)定這三種體外試驗(yàn)在區(qū)分非胚胎毒性、弱胚胎毒性和強(qiáng)胚胎毒性化學(xué)物中的能力。這三種體外胚胎試驗(yàn)都證明了適用于檢測(cè)多種不同毒性潛能的化學(xué)物[96J。ECVAM確認(rèn)研究中特定階段(definitivephase)的設(shè)盲試驗(yàn)中獲得的結(jié)果在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)和實(shí)驗(yàn)室間都為可重復(fù)的。根據(jù)管理團(tuán)隊(duì)在正式開(kāi)展確認(rèn)研究前所確定的性能準(zhǔn)則(表F.1),EST試驗(yàn)和WEC試驗(yàn)(使用一種預(yù)測(cè)模型[Predictionmodel(PM)])的胚胎毒性潛能的體外數(shù)據(jù)和體內(nèi)數(shù)據(jù)間的一致性為良好(Good)。MM試驗(yàn)和另一個(gè)WEC試驗(yàn)(使用另一種PM)的體外數(shù)據(jù)和體內(nèi)數(shù)據(jù)間的一致性為滿(mǎn)意(sufficient),參見(jiàn)參考文獻(xiàn)[96]。表F.2中給出了該確認(rèn)研究中基于使用的14種化學(xué)物體外分類(lèi)和體內(nèi)分類(lèi)的對(duì)比匯總。ECVAM確認(rèn)性研究結(jié)果的總結(jié)報(bào)告和另外一份針對(duì)該確認(rèn)研ECVAM科學(xué)咨詢(xún)委員會(huì)(ESAC)根據(jù)研究結(jié)果得出結(jié)論，該三種體外胚胎毒性試驗(yàn)已經(jīng)充分確認(rèn)并可用于藥物和其他化學(xué)物胚胎毒性潛能的評(píng)定[1011。另外，ESAC建議成立一個(gè)工作組，工作目標(biāo)是為這三個(gè)科學(xué)有效的試驗(yàn)方法用于生殖毒性試驗(yàn)時(shí)制定一個(gè)指南性文件。ECVAM和ZEBET(動(dòng)物試驗(yàn)的替代評(píng)價(jià)和文件化中心)因此成立了第二個(gè)胚胎毒性工作組，以進(jìn)一步評(píng)價(jià)這三種體外胚胎毒性表F.1研究管理團(tuán)隊(duì)確定的評(píng)價(jià)試驗(yàn)性能的準(zhǔn)則準(zhǔn)則性能偶發(fā)滿(mǎn)意良好優(yōu)秀表F.2分類(lèi)結(jié)果的匯總(所有數(shù)據(jù)[88])分類(lèi)ESTMM預(yù)測(cè)性(非胚胎毒性)預(yù)測(cè)性(弱胚胎毒性)預(yù)測(cè)性(強(qiáng)胚胎毒性)精密度(非胚胎毒性)精密度(弱胚胎毒性)45%精密度(強(qiáng)胚胎毒性)準(zhǔn)確度[1]OECD474MammalianErythrocyteMicronucleusTest[2]OECD475MammalianBoneMarrowChromosomeAberrationTest[3]OECD478GeneticToxicology—RodentDominantLethalTest[4]OECD479GeneticToxicology—InvitroSisterChromatidExchangeAssayinMammalian[5]OECD480GeneticToxicology—Saccharomycescerevisiae—GeneMutationAssay[6]OECD481GeneticToxicology—Saccharomycescerevisiae—MioticRecombinationAssay[7]OECD482GeneticToxicology—DNADamageandRepair,UnscheduledDNASynthesis[8]OECD483MammalianSpermatogonialChromosomeAberrationTest[9]OECD484GeneticTo[10]OECD485GeneticToxicology—MouseHeritableTranslocationAssay[11]OECD486UnscheduledDNASynthesis(UDS)TestwithMammalianLiverCellsInvivo[12]OECD488TransgenicRodentSomaticandGermCellGeneMutationAssays[13]OfficialJournaloftheEuropeanCommunities,L133/73,May1988,concerninginvitrocelltransformationtests.Bibliographyfortransgenicanimals[14]GorelickN.J.Overviewofmutationassaysintransgenicmiceforroutinetesting.Environ.Mol.Mutagen.1995,25pp.218-230.[15]ProvostG.S.,RogersB.J.,DycaicoM.J.,CarrG.EvaluationofthetransgenicLambda/LacImousemodelasashort-termpredictorofheritablerisk.Mutat.Res.1997,388pp.129-136.[16]KrishnaG.,UrdaG.,TheissJ.Principlesandpracticeofintegratinggenotoxicityevalua-tionintoroutinetoxicologystudies:apharmaceuticalindustryperspective.Environ.Mol.Mutagen.1998,32pp.115-120.[17]MacGregorJ.T.Transgenicanimalmodelsformutagenesisstudies:roleinmutagenesisresearchandregulatorytesting.Environ.Mol.Mutagen.1998,32pp.106-109.mentofashort-terminvitromutagenesisassay:Theeffectofmethylationontherecoveryofalamb-daphageshuttlevectorfromtransgenicmice.NucleicAcidsRes.1990,18pp.3007-3013.[19]Short,JM.,Kohler,SW.andprovost,GS.Theuseoflambdaphageshuttlevectorsintransgenicmicefordevelopmentofashorttermmutagenicityassay.In:Mutationandtheenviron-ment.Wiley-Liss,NewYork,1990,pp.355-67.Bibliographyforcelltransformationassays[20]LeboeufR.A.,KerckaertK.A.,AademaM.J.,IsfortR.J.UseoftheSyrianhamsterem-bryoandBALB/c3T3celltransformationforassessingthecarcinogenicpotentialofchemicals.IARCSci.Publ.1999,146pp.409-425.Availableat:/bookorders/anglais/detart1.jsp?sesslan=1&.codlan=1&codcol=73&codcch=146.[21]LeboeufR.A.,KerckaertK.A.,AademaM.J.,GibsonD.P.,BrauningerR.,IsfortR.J.ThepH6.7hamsterembryocelltransformationassayforasessingthecarcinogenicpotentialofchemi-cals.Mutat.Res.1996,356pp.65-84.[22]AardemaM.J.,IsfortR.J.,ThompsonE.D.,LeboeufR.A.ThelowpHSyrianham-sterembryo(SHE)celltransformationassay:arevitalizedroleincarcinogenicprediction.Mutat.Res.1996,356pp.5-9.[23]IsfortR.J.,&.LeboeufR.A.TheSyrianhamsterembryo(SHE)celltransformationsys-tem:abiologicallyrelevantinvitromodel-withcarcinogenpredictingcapabilities-ofinvivomulti-stageneoplastictransformation.Crit.Rev.Oncog.1995,6pp.251-260.[24]AdvancesinModernEnvironmentToxicology,Vol.1.MammalianCellTransformationbyChemicalCarcinogens.N.Mishra,V.Dunkel,andM.Mehlman(eds).SenatePress:PrincetonJunc-tion(NewJersey,08550),1981.[25]TransformationAssaysofEstablishedCellLines.MechanismsandApplication.T.Kaku-nagaandH.Yamasaki(eds).ProceedingsofaWorkshopOrganizedbyIARCinCollaborationwiththeUSNationalCancerInstituteandthe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