GB∕ T 40173-2021 水溶性殼聚糖中還原性端基糖的測定 分光光度法（正式版）

ICS07.080CCSA40GB/T40173—2021水溶性殼聚糖中還原性端基糖的測定國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會IGB/T40173—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由全國生化檢測標準化技術(shù)委員會(SAC/TC387)提出并歸口。1GB/T40173—2021水溶性殼聚糖中還原性端基糖的測定分光光度法本文件規(guī)定了水溶性殼聚糖中還原性端基糖的分光光度測定方法。本文件適用于水溶性殼聚糖(含量≥90%,脫乙酰度≥90%)中還原性端基糖的檢測。本方法檢出限為0.006mmol/g,定量限為0.023mmol/g。下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。3.1葡聚糖。3.2脫乙酰度degreeofdeacetylation殼聚糖分子中脫除乙?；奶菤埢鶖?shù)占殼聚糖分子中總的糖殘基數(shù)的百分數(shù)。3.3可溶于酸性、中性和堿性溶液的低聚合度殼聚糖。殼聚糖分子末端的還原性端基糖在堿性條件下與3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)反應(yīng)生成吖嗪，酸性條件下過量的MBTH被Fe3+氧化成陽離子，再與吖嗪反應(yīng)生成青藍色化合物，還原端基糖的濃度在一定范圍內(nèi)與其在590nm處的吸光度呈正比例線性關(guān)系。通過測定在590nm處的吸光度值，外標法定量。除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純。水為符合GB/T6682規(guī)定的三級水。2GB/T40173—2021純度≥98%。5.2DL-二硫蘇糖醇[DTT,HSCH?CH(OH)CH(OH)CH?SH]:CAS號：3483-12-3,純度≥98%。5.3鹽酸氨基葡萄糖標準品(C?H?NO?·HCl):CAS號：66-84-2,純度≥99%,或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書的標準物質(zhì)。5.4濃鹽酸。效期10天。期10天。5.9硫酸鐵銨試劑：稱取5g硫酸鐵銨[NH?Fe(SO?)?·12H?O]和5g氨基磺酸，加入41.8mL濃鹽5.10鹽酸氨基葡萄糖標準溶液(0.1mg/mL):稱取0.1g鹽酸氨基葡萄糖(精確至0.0001g),加水溶解，用水稀釋并定容至100mL,混勻，(濃度為1mg/mL);準確吸取上述溶液10mL,用水稀釋定容至6儀器設(shè)備7.1試樣制備準確稱取試樣約0.1g(精確至0.0001g),加水約507.2標準工作溶液的配制標準工作溶液。8測定步驟分別移取鹽酸氨基葡萄糖標準工作溶液500μL,各加入500pL0.5mol/L氫氧化鈉溶液和500μL顯色1h。以水調(diào)節(jié)零點，于波長590nm處測定吸光度值。以鹽酸氨基葡萄糖的質(zhì)量濃度為橫坐標，標準工作溶液吸光度值與質(zhì)量濃度為零的空白管的吸光度的差值為縱坐標繪制標準曲線。8.2試樣溶液的測定移取試樣溶液500μL,加入500μL0.5mol/L氫氧化鈉溶液和500μLMBTH試劑于試管中，混勻，于80℃水浴13min,趁熱迅速加入1000μL硫酸鐵銨試劑，混勻，放置顯色1h。以水調(diào)節(jié)零點，于波長590nm處測定吸光度值。將待測樣吸光度值與質(zhì)量濃度為零的空白管的吸光度值差值代入標準曲線，計算試樣中還原端基糖的含量。9結(jié)果計算與表示9.1結(jié)果計算試樣中還原端基糖含量按式(1)計算?！?1)式中：X——試樣中還原端基糖的含量，單位為毫摩爾每克(mmol/g);Ae——待測樣的吸光度值；Ap——空白管的吸光度值；k——標準曲線的斜率，單位為毫升每毫克(mL/mg);m-—水溶性殼聚糖的質(zhì)量濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL);M——鹽酸氨基葡萄糖的分子質(zhì)量，215.63