醫(yī)學免疫學實驗 Djp2 免疫細胞檢測

1醫(yī)學免疫學實驗-2-細胞免疫體外檢測2E-花環(huán)試驗、淋巴細胞轉化試驗（示教）大、小吞噬細胞的吞噬現(xiàn)象（示教）白細胞的吞噬作用（操作）本次實驗內(nèi)容3Developmentanddifferentiationofhematopoieticstemcell場所:骨髓造血干細胞的發(fā)育與分化造血干紅胞髓樣干細胞淋巴樣干細胞場所：胸腺4細胞免疫的測定（一）T細胞總數(shù)及亞群數(shù)量的測定（二）T細胞功能的測定1.淋巴細胞增殖試驗

形態(tài)學方法、MTT比色法、3H-TdR摻入法等。2.細胞毒試驗3.細胞因子測定流式細胞儀：不同類型細胞的計數(shù)；亞群：HIV，CD4+；

Th1/Th2：腫瘤/結核，類風/潰結，（絲裂原）CD8+T，雞紅細胞ELISA：Th1/Th2細胞因子5原理：T細胞表面有綿羊紅細胞受體(E受體，CD2/LFA-2)，形

成花環(huán)。計數(shù)200個淋巴細胞，結合3個或以上SRBC者

為一個E花環(huán)（陽性）。T+TTT1）T細胞E花環(huán)形成試驗(E-rosettetest)目的：檢測T細胞數(shù)量，判斷機體的細胞免疫狀況?？偦ōh(huán)（Et）：T細胞與SRBC，37℃水浴，5min；4℃，1-2小時；[50-80%]活性花環(huán)(Ea)：不經(jīng)4℃處理，低速離心，沉淀的花環(huán)；（大）[20-40%]E受體E抗原T細胞的異質(zhì)性：不同類型T細胞與SRBC結合能力、結合后的穩(wěn)定性不同。6正常范圍：50%-80%玫瑰花環(huán)試驗E-rosettetest72）T細胞增殖試驗（淋巴細胞轉化試驗）

原理：T細胞在體外受到刺激物（PHA，ConA）作用下，

細胞代謝和形態(tài)相繼發(fā)生變化，細胞變大，漿擴

大，出現(xiàn)空泡、核仁明顯，染色質(zhì)疏松→轉化為

具有分裂能力的淋巴母細胞。目的：檢測T細胞活性。8計數(shù)200個淋巴細胞，算轉化率。淋巴母細胞（體積增大，形態(tài)不整齊，核大，松散，有核仁，胞漿變寬，出現(xiàn)空泡）93）大、小吞噬細胞吞噬試驗大吞噬細胞－單核巨噬細胞小吞噬細胞－中性粒細胞單核巨噬細胞吞噬試驗：核呈腎形，1.實驗前3天，小鼠腹腔，注射可溶性淀粉肉湯，

6%/1mL.2.再腹腔注射1%/0.5mL雞紅C，30min,輕揉3.處死、取腹腔液，瑞氏染色。瑞氏染色：藍色A.大吞噬細胞吞噬實驗（示教）10B.中性粒細胞的吞噬作用標記加肝素采血加等量菌液，37oC反應30min加沉淀細胞(10ul)*，30-45o快速推片自然干燥加瑞氏染液反應30‘’-1min(馬上)，后加入等量蒸餾水反應3-5min（1-2）細水流沖洗吸水紙印干后油鏡檢查混勻操作：分葉核細菌將推玻片向1的方向稍抽回，當血液充滿推玻片的寬度后，以一定均勻的速度向2的方向推動。11瑞氏染液:由酸性染料伊紅和堿性染料美藍組成的復

合染料.嗜酸性粒細胞：？嗜堿性粒細胞：？中性粒細胞：？淋巴細胞：圓單核細胞：腎形結果：12中性粒細胞：分裂/分葉嗜堿性粒細胞：藍色嗜堿性粒細胞：藍色嗜酸性