XPA基因多態(tài)性與食管癌、賁門(mén)癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)

1/1XPA基因多態(tài)性與食管癌、賁門(mén)癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)XPA基因多態(tài)性與食管癌、賁門(mén)癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)XPA基因多態(tài)性與食管癌、賁門(mén)癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)【摘要】目的探討XPA基因5非編碼區(qū)轉(zhuǎn)錄啟始密碼子ATG上游第4位A23G和228密碼子G709A單核苷酸多態(tài)性與河北省食管癌、賁門(mén)癌高發(fā)區(qū)磁縣和涉縣人群食管鱗狀細(xì)胞癌(Esophagealsquamouscellcarcinoma,ESCC)和賁門(mén)腺癌(Gastriccardiacadenocarcinoma,GCA)遺傳易感性的關(guān)系。

方法采用聚合酶鏈反應(yīng)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCRRFLP)分析方法檢途測(cè)327名ESCC患者、253名GC謇A患者和612名健康對(duì)照的XPAA2嫻3G和G709ASNP的基因型。

結(jié)果鑌XPA基因A23G的等位基因和基因型效頻率在ESCC和健康對(duì)照之間,總體分奚布有顯著性差異。

與A/A基因型相比,A/G+G/G基因型可顯著降低ESC挨C的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

分層分析顯示，此保護(hù)作序用在非吸煙組和吸煙組人群中尤為明顯。

釔此保護(hù)作用在UGIC家族史陰性人群中茵也很明顯。

在GCA和健康對(duì)照之間,A氧23G等位基因頻率和基因型頻率總體分諺布無(wú)顯著性差異。

與A/A基因型相比,デA/G+G/G基因型可顯著降低GCA隍的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

分層分析顯示,在非吸煙組鑭中,GCA患者組和健康對(duì)照之間，基因糗型頻率分布有顯著性差異。

與A/A基因包型相比，A/G+G/G基因型可顯著降漱低非吸煙人群GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

結(jié)論X糊PA基因A23G含突變等位基因的基因蕪型可能是影響河北省食管癌、賁門(mén)癌的高餉發(fā)區(qū)磁縣和涉縣人群ESCC發(fā)病風(fēng)怡險(xiǎn)的因素之一。

【關(guān)鍵詞】食管鱗狀誆細(xì)胞癌賁門(mén)腺癌XPA基因多態(tài)性機(jī)體銀的DNA修復(fù)系統(tǒng)在維持基因組功能的整款體性以及修復(fù)致癌因素所致的損傷中起重湎要作用[1]。

DNA修復(fù)能力低下與癌歟癥風(fēng)險(xiǎn)增高相關(guān)[2]。

核苷酸切除修復(fù)蒽是人類(lèi)最主要和最靈活的的DNA損傷修郅復(fù)途徑。

XPA是一種進(jìn)化保守的DN卷A修復(fù)酶，在核苷酸切除修復(fù)通路中，它與RPA[3]、XPC、TFIIH、豳XPG、ERCC1XPF復(fù)合體及D屢NA聚合酶一起共同作用,完成DNA的躐修復(fù)[4]。

XPA多態(tài)性的改變可能會(huì)┑影響其蛋白質(zhì)的功能進(jìn)而改變個(gè)體DNA耘的損傷修復(fù)能力。

XPA多態(tài)性與肺癌相關(guān)研究已有報(bào)道[5,6]。

但有關(guān)XP抱A多態(tài)性與食管癌和賁門(mén)癌關(guān)系的研究尚剽未見(jiàn)報(bào)道。

本研究應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(Polymerasechainreactionrestrictionfragmen窀tlengthpolymorphis┆m,PCRRFLP)分析方法，探討嚴(yán)XPA基因多態(tài)性與河北省食管癌、賁門(mén)⑼癌高發(fā)區(qū)磁縣和涉縣人群食管鱗狀細(xì)胞贈(zèng)癌(ESCC)和賁門(mén)腺癌(GCA)遺吊傳易感性的關(guān)系。

1資料與方法磴研究對(duì)象327名食管鱗狀細(xì)胞癌(E邢sophagealsquamousc唣ellcarcinoma，ESCC)套患者、253名賁門(mén)腺癌(Gastriccardiacadenocarcinoma，GCA)患者均來(lái)自河北省食翕管癌、賁門(mén)癌高發(fā)區(qū)磁縣和涉縣，612什名健康對(duì)照為在相同地區(qū)相同時(shí)間體檢為悠正常人群，并經(jīng)本人知情同意，由專(zhuān)門(mén)的穌登記員調(diào)查所有研究對(duì)象的性別、年齡、償吸煙史及上消化道腫瘤家族史。

現(xiàn)吸煙或賊曾吸煙每天5支以上并持續(xù)兩年或兩年以膏上者定義為吸煙個(gè)體。

家族中有1名以上殊一級(jí)親屬和(或)2名以上二級(jí)親屬患有浪食管癌/賁門(mén)癌/胃癌者定義為上消化道緇腫瘤家族史陽(yáng)性。

標(biāo)本采集及外周血綾白細(xì)胞DNA的提取所有研究個(gè)體均采顛集靜脈血5ml，經(jīng)枸櫞酸鈉抗凝，4℃瓢冰箱保存。

采血后一周內(nèi)，以蛋白酶K消蘺化飽和氯化鈉鹽析法，提取外周血淋巴⑿細(xì)胞染色體DNA。

XPASNP基正因分型XPAA23G基因型檢測(cè)應(yīng)用PCRRFLP方法進(jìn)行。

XPA基因火A23G的PCR反應(yīng)體系為20l，鏊其中模板DNA100ng，10PC朱R緩沖液2l，MgCl2，TaqDNA聚合酶，dNTPs200M，碼上游引物5TTAACTGCGCA醬GGCGCTCTCACTC3和下鷚游引物5AAAGCCCCGTCGˉGCCGCCGCCAT3各200嘈nM。

PCR反應(yīng)條件為：

94℃預(yù)變性陰5min后，94℃變性30s、58℃妙退火20s、72℃延伸20s，35個(gè)漭循環(huán)后，72℃繼續(xù)延伸7min。

PC昝R產(chǎn)物經(jīng)限制性?xún)?nèi)切酶MspI于37℃酶切16h后，進(jìn)行4%瓊脂糖凝膠電泳繳。

A/A基因型由于缺乏MspI的識(shí)別柚位點(diǎn)保持原有PCR后的158bp的片┚段，而G/G基因型存在MspI的識(shí)別賽位點(diǎn)產(chǎn)生130和28bp兩條DNA片③段，A/G基因型則表現(xiàn)為158bp、２130bp和28bp三條片段，見(jiàn)圖1茨。

1:G/Ggenotype;2、砌5:A/Agenotype;3、4、迮6、7:A/Ggenotype;8:100bpDNAmarker圖1佑X(jué)PAA23G基因型分型XPAG罔709A基因型檢測(cè)應(yīng)用PCRRFL茵P方法進(jìn)行。

XPA基因G709A的P鷚CR反應(yīng)體系為20l，其中模板DN埡A100ng，10PCR緩沖液2鐲l，MgCl2，TaqDNA聚合酶，酴dNTPs200M，上游引物5酬TTCATATGTCAGTTCATG入3和下游引物5TTTTTCA噢GAATTGCGT3各200nM胸。

PCR反應(yīng)條件為：

94℃預(yù)變性5m堡in后，94℃變性45s、50℃退火飭45s、72℃延伸45s，35個(gè)循環(huán)烏后，72℃繼續(xù)延伸7min。

PCR產(chǎn)縞物經(jīng)限制性?xún)?nèi)切酶Taqa1于65℃酶坩切16h后，進(jìn)行4%瓊脂糖凝膠電泳。

祠G/G基因型存在Taqa1的識(shí)別位點(diǎn)蕊產(chǎn)生130bp和18bp兩條片段，而郴A/A基因型由于缺乏Taqa1的識(shí)別擢位點(diǎn)保持原有PCR后的148bp的片砭段，G/A基因型則表現(xiàn)為148bp、囅130bp和18bp三條片段。

為進(jìn)鱭行基因型檢測(cè)的質(zhì)量控制，每一批PCR竦反應(yīng)均以滅菌蒸餾水替代模板DNA作為陰性對(duì)照，XPAA23G隨機(jī)挑取10瘃%進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法經(jīng)卡屋方檢驗(yàn)比較基因型頻率的觀(guān)察值與預(yù)期值蠱，進(jìn)行HardyWEinberg平陛衡分析。

病例組和對(duì)照組的XPA基因型幢及等位基因型分布比較采用行列表的卡方檢驗(yàn)進(jìn)行。

應(yīng)用非條件Logisti煲c回歸模型計(jì)算相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度的比值比及其搐95%可信區(qū)間，以P2結(jié)果一般特征ESCC患者組、GCA患者組與悼對(duì)照組之間的性別、年齡構(gòu)成相似。

ES槽CC患者組、GCA患者組中吸煙個(gè)體比鎰例與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(2=和騅,P=和)。

ESCC患者組、GCA患弘者組中UGIC家族史陽(yáng)性個(gè)體比例分別蝙為%、%，顯著高于對(duì)照組%，表明有U媼GIC家族史陽(yáng)性可能是增加ESCC和銨GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的原因，見(jiàn)表1。

表1閡食管癌、賁門(mén)癌和對(duì)照組人口學(xué)分布及銓XPAA23G等位基因型頻率XPAG犀709A的SNP分析未成功分型。

XP硤AA23GSNP分析成功進(jìn)行了基因分∥型，重復(fù)分型結(jié)果均與原結(jié)果相符。

經(jīng)卡方檢驗(yàn)，XPAA23GSNP基因型分更布符合HardyWEInberg平攤衡(P)。

XPA基因A23GS癖NP與ESCC、GCA的關(guān)系XP俐A基因A23GSNP與ESCC的關(guān)系蚜XPA基因A23G的等位基因頻率在鄰ESCC和健康對(duì)照之間,總體分布有顯退著性差異，見(jiàn)表1。

XPA基因A23G的A/A、A/G、G/G基因型頻率在慍健康對(duì)照組中分別為%、%和%,在ESCC患者組中分別為%、%和%,在ES垴CC和健康對(duì)照之間,其總體分布有顯著閆性差異。

與A/A基因型相比,攜帶G等遽位基因(A/G+G/G基因型)，見(jiàn)表閎2。

可顯著降低ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

分梧層分析顯示，在非吸煙組中，ESCC患者組與健康對(duì)照之間,基因型頻率分布無(wú)墉顯著性差異。

但與A/A基因型相比,含倒G等位基因的基因型可降低非吸煙組ES徭CC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

在吸煙組中，ESCC南患者組與健康對(duì)照之間,基因型頻率分布⑺有顯著性差異，與A/A相比，含有G等縣位基因(A/G+G/G基因型)可明顯懷降低吸煙組ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

在無(wú)U罄GIC家族史的ESCC患者與健康對(duì)照讎之間基因型頻率總體分布有顯著性差異,瑰此保護(hù)作用也很明顯。

而有UGIC家族椎史的ESCC患者組和健康對(duì)照之間，基濠因型頻率分布無(wú)顯著性差異。

表2XP揣AA23G基因型頻率與ESCC、GCA發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系XPA基因A23嚀GSNP與GCA的關(guān)系XPA基因A硐23G的等位基因頻率在GCA和健康對(duì)巧照之間,總體分布無(wú)顯著性差異。

在GC帔A患者組中XPA基因A23G的A/A滸、A/G、G/G基因型頻率分別為%、酩%和%,在GCA和健康對(duì)照之間,其總灸體分布無(wú)顯著性差異。

然而，與A/A基劐因型相比,含有G等位基因的(A/G+驢G/G基因型)可降低ESCC的發(fā)病風(fēng)瀑險(xiǎn)。

分層分析顯示,在非吸煙組中,GC啤A患者組中XPA基因A23G的A/A補(bǔ)、A/G和G/G基因型頻率分別為%、%和%,健康對(duì)照組分別為%、%和%,樟基因型分布在兩組之間有顯著性差異。

與霰A/A相比，攜帶有G等位基因(A/G舴+G/G基因型)可明顯降低非吸煙組中⒒GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

在無(wú)UGIC家族史┨和有UGIC家族史的GCA患者組和健盼康對(duì)照之間，基因型頻率總體分布無(wú)顯著琶性差異。

表3XPAA23GSNP與峨ESCC、GCA發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性分析橇3討論DNA的損傷和基因結(jié)構(gòu)異幾常、以及由此所造成的癌基因和抑癌基因表達(dá)或功能上的改變可能是細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的前提。

由于細(xì)胞內(nèi)DNA修復(fù)系統(tǒng)的存嚅在，所以并非所有的損傷都會(huì)導(dǎo)致突變。

如果DNA修復(fù)系統(tǒng)出現(xiàn)問(wèn)題，細(xì)胞惡性侈轉(zhuǎn)化的機(jī)率也會(huì)增加[7]。

核苷酸切除銖修復(fù)途徑是各種DNA損傷，如紫外線(xiàn)損傷和各種化學(xué)致癌物的加合物形成的損傷坪的主要修復(fù)通路[5]。

XPA作為一種DNA損傷識(shí)別蛋白，在NER路徑中起瞪著至關(guān)重要的作用，它與受損的DNA結(jié)丁合，引發(fā)修復(fù)過(guò)程。

缺失XPA基因的N禳ER途徑受損最重。

研究報(bào)道，XPA麻基因位于9號(hào)染色體，它的cDNA長(zhǎng)1致377bp,可能包含有6個(gè)外顯子，所撂編碼的蛋白XPA由273個(gè)氨基酸構(gòu)成衡，相對(duì)分子量31000kDa。

XPA聿蛋白為一疏水性蛋白，存在于細(xì)胞核中。

讀XPA包括三個(gè)功能區(qū)，N端主要與復(fù)制卜蛋白A結(jié)合，C端主要與轉(zhuǎn)錄因子IIH(Transcriptionfato鈾rIIH,TFIIH)結(jié)合并將其帶到磁損傷位點(diǎn);中心區(qū)198至219位氨基笠酸包含鋅指結(jié)構(gòu)，是與損傷DNA結(jié)合的蔬功能區(qū)。

Li等證實(shí)XPA蛋白可以與E戴RCC1以一種特定方式結(jié)合，他們認(rèn)為或XPA具有為切除修復(fù)復(fù)合體的ERCC祜1和其他因子到達(dá)DNA受損部位指示方向的功能。

XPA的多態(tài)性可能影響m塹RNA三級(jí)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性或者影響轉(zhuǎn)錄因藕子與mRNA結(jié)合。

在XPA基因的5詈端非編碼區(qū)，ATG起始密碼子上游4個(gè)揞核苷酸處，存在A(yíng)G的多態(tài)[8,9]，XPA基因的5非編碼區(qū)可能是通過(guò)瘦轉(zhuǎn)錄和后轉(zhuǎn)錄機(jī)制調(diào)節(jié)基因表達(dá)[10]，研究顯示A到G的改變可以降低肺癌的慕發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

Park等[5]在對(duì)韓國(guó)一ㄖ個(gè)小樣本研究后得出，G/G基因型或G驚等位基因與肺癌有負(fù)性關(guān)聯(lián)，特別在年輕、男性、吸煙人群中這種傾向更明顯。

在毳對(duì)高加索人、墨西哥人和美籍非洲人研究裁中，Wu等[6]得出含有G等位基因的┇基因型比A/A純合型更能降低肺癌的發(fā)莨病風(fēng)險(xiǎn)，目前暴露于煙草致癌物的人群中脧這種傾向更明顯。

攜帶XPA23G等位橐基因的個(gè)體，DNA修復(fù)能力高于攜帶A寇/A基因型者。

我們?cè)趯?duì)食管鱗狀細(xì)胞癌和賁門(mén)腺癌的研究中，也得出了類(lèi)似的結(jié)妒論，攜帶有G等位基因(A/G+G/G恣基因型)可顯著降低ESCC和GCA的ч發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

并且可顯著降低非吸煙人群患訕GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

由于本研究是基于人莪群的病例對(duì)照研究，對(duì)照組和病例組的基艫因型分布均未偏離HardywEInberg平衡，試驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性較好，皇因此可基本排除系統(tǒng)誤差導(dǎo)致的基因型分估布偏性。

但此類(lèi)研究多為回顧性研究，林且研究人群存在地域，人種和樣本量的差杉異，因此有待于擴(kuò)大樣本量并在同種族，同地域人群中進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪(fǎng)研究，并進(jìn)一篼步觀(guān)察XPA基因多態(tài)性與環(huán)境因素及其奴他遺傳因素的相互作用，對(duì)揭示XPA基翮因多態(tài)性與腫瘤的確切關(guān)系有重要意義。

昨【參考文獻(xiàn)】［1］尹嬌楊，李繼牿承.DNA修復(fù)基因；核苷酸切除修復(fù)基痣因單核苷酸多態(tài)與癌癥發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的研究進(jìn)マ展\[J\].國(guó)外醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)分冊(cè)，XX，27:2326.\[2\]G刻oodeEL,UlrichCM,Po巔tterinDNARepairGen隋e(cuò)andAssociationwit溶hCancerRisk\[J\].C扔ancerEpidemiologyB盟iomarkersPrev,200男2,11:15131530.\[象3\]WakasugiMandSan頑cerofassemblyofhumanDNArepairexcisionnuclease\[J\].JBi畫(huà)ol,274,1875918768.\[4\]GarryW,Buch馳ko,Nancymutagenici燙tyandhumannucleotideexcisionrepairpr茅oteinXPA:CD,EXAFSand1H/15NNMRspectr癌oscopicstudiesonth扛ezinc(II)andcadmium(II)associatedmｘinimalDNAbindingd￣omain(M98F219).,2糕1(5):10511057.\[蚰5\]ParkJY,ParkSH,C脫hoiJE,etal.PolymorphismsoftheDNArepairgenexerodermapig迸mentosumgroupAandr殆iskofprimarylungca軾ncer\[J\].CancerEpнidemiologyBiomarke限r(nóng)sPrev,2002,11,99咆3997.\[6\]WuX,ZhНaoH,WeiQ,etal.XPAp簾o(wú)lymorphismsassoci蹩atedwithreducedlunビgcancerriskandamodulatingeffectonnucleotideexcisionrep鎮(zhèn)aircapacity\[J\].C綬arcinogenesis,XX,24(3):505509.\[7\]EllenLGoode,Co