病毒學參考答案

植物病毒學復習題參考答案你是怎么認識病毒的害與益的？請舉例說明。害：病毒危害多種多樣：侵害人體，影響人類安康，造成畜、禽等動物的傳染疾?。晃：r作物使其致病，影響產量和質量。病毒確實有害，特別是經濟全球化，人口城市化，加上氣候變暖，環(huán)境惡化，更加劇了新興病毒的發(fā)生和原有病毒的傳播、危害。舉例：據報道，馬鈴薯卷葉病毒和馬鈴薯Y病毒的一些株系，常使塊莖的產量減少50-80%。益：：利用病毒及其制劑開展有害生物的控制，可使環(huán)境免受污染；6.花卉增色：郁金香欣賞；7.病毒基因元件：啟動子、35s。目前國內外植物病毒研究的熱點和前沿是什么？；4.病毒作為載體及載體元件的研究。前沿：由于分子生物學的開展和電子顯微鏡的進步，對植物病毒的形態(tài)、構造、生物學特性及理化特性都有深入的研究，近年來對植物病毒的研究已進入分子水平。病毒的發(fā)現能給我們什么樣的啟示？在科學實踐中，僅僅有了新的發(fā)現還是不夠的，重要的是敢不敢或能不能面對自己發(fā)現的事實，做出客觀的分析，提出恰當的新概念、新理論，才對科學開展更為有益。舉例說明植物病毒在農業(yè)中的地位及其應用前景植物病毒在農業(yè)中有著非常重要的地位，因病毒是農業(yè)生產的大敵，提醒病毒的致病本質及其發(fā)病的規(guī)律，從而得以有效的控制。例如：煙草蝕紋病毒可抑制天仙子花葉病毒和馬鈴薯Y病毒對煙草的侵染。它具有廣闊的應用前景。隨著對自然界的病毒種類及其分布的深入了解，我們就可以更好的興利除害，為現代農業(yè)和科技進步做出更大的奉獻。以TMV為例來論述植物病毒胞間轉移和長距離移動分別在病毒系統侵染過程的作用方式。①植物細胞間的通道是胞間連絲，它在細胞之間起著信息傳遞，水分及有機物的運輸和分配等作用：TMV在細胞內編碼運轉蛋白30ku蛋白，運轉蛋白一方面能夠與胞間連絲相互作用，從而使胞間連絲孔徑擴大，另一方面能夠與病毒作用。綜合作用結果得以使病毒順利通過胞間連絲進展運轉。②病毒在植物體內的遠距離運轉，主要靠植物輸導組織中得營養(yǎng)主流方向移動，但是病毒也可以隨營養(yǎng)等上、下雙向移動。將TMV接種在番茄中部復葉尖端的小葉上，經過1-3天病毒可達整個小葉，經過3-5天病毒已從葉脈、葉柄及莖等維管束轉移到番茄植株頂部的生長點和根部組織；經過25天病毒已達全株的所有生長器官。植物病毒的提取過程中，為了濃縮病毒，采取的是聚乙二醇沉淀法，其試述其大致的濃縮原理。在一定的鹽〔NaCl〕濃度下，Na+中和帶負電的病毒核酸分子，減少核酸分子的同性電荷相斥力，易于互相聚合而形成沉淀。所以聚乙二醇〔PEG〕可以使病毒沉淀，以分子質量為6000u的PEG效果最好。植物病毒的基因組核酸類型有哪些，并分別列舉出其代表性的病毒？同時簡述馬鈴薯Y病毒基因組翻譯的多聚蛋白〔polyprotein〕如何形成10個功能蛋白體？1.〔+〕ssRNA煙草花葉病毒〔-〕ssRNA馬鈴薯黃矮病毒dsRNA水稻赤矮病毒DsDNA花椰菜花葉病毒ssDNA香蕉束頂病毒2.多聚蛋白需經過P1.NIa-類似胰蛋白酶氨酸蛋白酶，HC-類似木瓜蛋白酶的半胱氨基酸蛋白酶的切割而成為十個功能蛋白。植物病毒分類的根本依據是什么？病毒的粒體特性:基因組構與復制:包括基因組構造,核酸復制策略\轉錄特點\翻譯和翻譯后的修飾特點,裝配位點等抗原性質:包括病毒血清學性質及其與抗原的關系。病毒生物學特性：包括病毒寄主范圍,致病性及其與病變的關系,組織嗜性\病理學\自然傳播方式\傳播介體和地理分布ICTV第8次分類報告的主要特點有哪些？與以往分類報告比擬，新增了哪些科哪些屬？ICTV第8次分類報告的主要特點：進一步明確了“種〞作為病毒分類系統中的最小分類階元。在每一個確定種下面列出了至少一個、至多幾十個不同的別離物以及它們在GenBank上的登錄號。增加了許多反映病毒基因序列同源性關系的系統樹圖。將原子分辨率的粒子三維構造插入到相應的科或屬中，使研究者對病毒粒子空間構造有更詳細的了解。國際病毒分類委員會第八次報告中的最新植物病毒分類系統18個科、81個屬,以及亞病毒感染因子的類病毒和病毒衛(wèi)星。與第七次報告相比新增的3個科、9個屬分別是:矮縮病毒科、蕪菁黃花葉病毒科、線形病毒科、番茄偽曲頂病毒屬、香蕉束頂病毒屬、塞爾病毒屬、內源RNA病毒屬、葡萄斑點病毒屬、柑橘病毒屬、葡萄卷葉病毒屬、溫州蜜柑矮縮病毒屬、櫻桃銼葉病毒屬。

類病毒的定義。試述類病毒與植物病毒的異同點?！蔡崾荆夯蚪M構造和病毒粒子的構造特點，以及它們所引起病癥等方面論述〕。類病毒的定義是：存在于植物中，分子量為1×105左右的、由246-574個核苷酸組成的單鏈環(huán)狀RNA的寄生物?！?〕類病毒不同于病毒的主要特性a．耐熱性。要使類病毒失活需要高于100℃b．高度侵染活性。50～100分子的類病毒可以引起成功的侵染，而病毒需要106個粒體以上。c．局限的存在部位。類病毒至今僅僅發(fā)現于細胞核中，其核酸在體外翻譯體系和寄主體內都沒有翻譯產物的存在，因為其核酸分子上沒有翻譯起始密碼子。d．核酸組成的相近性。G／C比相近，55％～58％；有人比照了3種類病毒的核苷酸序列，發(fā)現其在很大程度上的同源性，個別核苷酸或者局部片段發(fā)生了變化，成為不同的病原，或者不同的株系。研究說明幾個甚至一個核苷酸的不同，就會導致致病力的明顯變化。e．不顯性感染。植物帶有類病毒但不表現病癥的現象極為普遍。經測試36個科的232種植物對馬鈴薯紡錘塊莖類病毒的感病性，發(fā)現有11個科的138種植物是感染的，但只有茄科和菊科的12種植物表現病癥，即90％以上的寄主都是不顯癥感染，而且潛育期很長，有的幾個月，有的甚至幾年。f．傳播方式簡單。類病毒主要通過農具、嫁接刀具等傳播，大局部可以通過種子傳播(有的可在種子中存活20年)；僅僅有危害馬鈴薯和番茄的二種類病毒被證明有節(jié)肢動物介體傳播?！?〕一樣點：都含有核酸，都是專性寄生物，不能單獨進展復制、增殖。略述植物病毒病癥學在病毒診斷上的意義意義：根據典型病癥，排除常規(guī)病毒病害。對一些具有特征性病癥的病毒病，只要掌握其特有病癥，便可以準確做出診斷。對一些不具有特征性病癥的病害，可以將病毒的致病反響和非侵染性致病因子加以比擬，做出初步的判斷。在田間一旦被確認為病毒病，便可以按照病害的主要病癥特征結合傳染方式加以識別。病毒病雖然沒有真菌、細菌病害那樣的特征，但往往具有自己的特有的病癥，便于直接判別，如明脈、斑駁、花葉、脈腫、耳突、蝕紋、環(huán)斑、脈帶、條紋、線條和條點等，我們可以進一步根據其形狀、大小、色澤加以判斷。病毒病的病癥具有相對的穩(wěn)定性，不同病毒有不同的病癥類型，學會區(qū)別并準確描述它們，對病害診斷很有用處。植物病毒病的外部病癥主要有哪些類型，其對應寄主植物的組織病變分別是？花葉類型：明脈，斑駁，花葉，沿脈變色，塊斑，條紋，褪綠斑環(huán)斑類型：環(huán)斑，環(huán)紋，線紋畸形生長：線葉，蕨葉，帶花，卷葉，皰斑，皺縮，耳突，畸葉，小葉，叢枝，叢簇，扁枝，腫枝，莖溝，腫脹，花變葉，拐節(jié)，矮化，矮縮，畸果，小果變色：主要是葉片的局部或者全部顏色改變。壞死與變質：環(huán)死斑，壞死環(huán)，壞死紋，壞死條紋，沿脈壞死，葉脈壞死，頂尖壞死，星裂。植物病毒病的復雜性表達在哪些方面？病毒引起的外部病癥類型：花葉，環(huán)斑，畸形，變色，壞死，外部病癥的復雜性：植物受病毒侵染后，所呈現的病癥往往有個開展過程，一種病毒病可能觀察到幾種病癥或無病癥過程，幾種病毒病在同一植物上也可能出現相似的病癥。無癥帶毒：有些病毒侵染寄主后不產生可見的病癥。隱癥：有些病毒形成病癥后在特定的環(huán)境條件下可暫時隱去病癥。復合病癥：寄主植物被兩種以上病毒侵染時，特別是同時侵染時出現復合病癥大局部是加重。某地稻田發(fā)生大面積黃化，有人說病毒引起，有人說是生理現象，你應根據哪些原那么加以判斷？〔病毒病與生理病的區(qū)別〕可以根據“五性〞原那么加以判斷a.分散性b.系統性c.傳染性d．鮮明性e．特征性在診斷植物病毒病的過程中，應如何靈活應用柯赫法那么？柯赫法那么：病原必須總是和某種病害聯系在一起；這種必須從寄主上別離到并進展體外培養(yǎng)；將這種病原純培養(yǎng)物接種到安康植物上時，能表現出和原來一樣的病癥；從試驗植物上別離到同樣的病原?？潞辗敲闯Ｓ糜谇秩拘圆『Φ脑\斷和鑒定，特別是新病害的鑒定。非專性寄生物，如絕大多數植物病原菌物和細菌所引致的病害，可以很方便地應用柯赫法那么來進展診斷和鑒定。在診斷植物病毒病的過程中，在進展人工接種時，直接從病株組織上取，或采用帶病毒或菌原體的汁液、枝條、昆蟲等進展接種。但病毒和菌原體的接種需要搞清傳播途徑。當接種株發(fā)病后，再從該病株上取線，或采用帶病毒或菌原體的汁液、枝條、昆蟲等，用同樣方法再進展接種，當得到同樣結果后才可證實該病的病原為這種菌物、或這種病毒。因此，所有侵染性病害的診斷與病原物的鑒定都必須按照柯赫法那么來驗證。在田間應如何區(qū)分植物病毒病與其他侵染性病害？怎樣判斷植物病毒病和非侵染性病害？植物病毒病與其它侵染性病害的主要區(qū)別是：〔1〕病毒病害在植物外表絕對沒有病征，而區(qū)別于線蟲蟲體、細菌菌膿、真菌的子實體等病癥的出現；〔2〕系統侵染病毒病的病癥在新展幼葉上更重，而其他病害那么大多在老葉上病癥更明顯。植物病毒病與非侵染性病害的區(qū)別是：〔1〕病毒病有發(fā)病中心或中心病株，病情有輕有重，早期病株點片分布，而非侵染性病害大多同時大面積發(fā)生，病情較一致；〔2〕發(fā)生病毒病的植株多為系統感染，病癥分布不均一，新葉新梢上病癥最明顯，而生理性病害大多比擬均一，老葉、老枝更為明顯；〔3〕病毒病有傳染性，非傳染性病害沒有傳染擴散的過程；〔4〕病毒病害病癥往往表現為花葉、黃化、矮縮、叢生等，少數有脈帶、環(huán)斑、耳突、斑駁、蝕紋等特征性病癥。此外，隨著氣溫的變化，特別是在高溫條件下，植物病毒病時常發(fā)生隱癥現象?！?〕生理性病害不具全株性、再現性，環(huán)境改善，可以康復；病毒病害分枝發(fā)病，全株一樣，新芽、新葉再現病癥，環(huán)境改善不可再恢復。如何利用常用的生物學方法區(qū)分TMV/CMV、PVX/PVY？1).TMV/CMV的區(qū)別：病毒普通煙心葉煙黃瓜TMV系統花葉局部枯斑不感染CMV系統花葉系統心葉系統花葉TMV和CMV在普通煙上都產生系統花葉，但TMV在心葉煙上產生枯斑，CMV在心葉煙上那么還是系統花葉，這樣我們就可以用心葉煙來別離TMV。CMV在黃瓜上產生系統花葉病癥，而黃瓜對TMV免疫，這樣，我們可以利用黃瓜將CMV從上述兩種混合病毒混合侵染的病株中別離出來。TMV蚜蟲不傳，CMV蚜蟲能傳，通過蚜蟲接種，別離獲得TMV。2).PVX/PVY的區(qū)別：〔1〕pvx能侵染曼陀羅，pvy不能侵染曼陀羅?！?〕pvx蚜蟲不傳，pvy蚜蟲能傳?！?〕pvx在千日紅上呈現紅色邊緣的壞死斑，普通煙感染pvy后呈現沿脈及葉脈壞死癥?？莅呒闹?、指示寄主、鑒別寄主的主要區(qū)別？枯斑寄主：有些病毒侵染寄主植物后，會誘導寄主產生過敏反響，出現局部枯斑而不擴展成系統侵染。指示寄主：指的是對那些潛育期特長，病癥出現很慢的病毒〔如果樹中的病毒〕，為了及時做出診斷，將其轉移〔接種〕到病癥出現很快的寄主上，這種寄主就成指示植物，故其性質與鑒別寄主不同，主要是用來檢測病原生物的存在。鑒別寄主：指用來鑒定對某一病毒或株系具有特定反響的植物。但凡病毒侵染后能產生快而穩(wěn)定、并具有特征性病癥等的植物都可以作為鑒別寄主。鑒別寄主包括單一鑒別寄主和鑒別寄主譜。鑒別寄主和枯斑寄主的區(qū)別：〔1〕病癥類型：枯斑只是特征性反響的一種病癥類型，鑒別寄主的特征性反響除了枯斑，還有其他類型的病癥反響，比方：紅葉癥?！?〕范圍不同：鑒別寄主包括單一的鑒別寄主和鑒別寄主譜，枯斑寄主一般是單一的植物寄主。鑒別寄主和指示植物的區(qū)別：〔1〕用途不同：鑒別寄主主要用于鑒別、別離病毒和病毒的定量，指示植物主要用于檢測病原物的存在?！?〕范圍不同：鑒別寄主包括單一的鑒別寄主和鑒別寄主譜。如何鑒定病毒與類病毒？簡述其依據的原理和方法?！步Y合第10題〕類病毒與真病毒的區(qū)別：病原以無衣殼包被的RNA形式存在于植物體內；不能從病組織中檢測出類似病毒的粒體；侵染性RNA的分子含量特低，且在病細胞中照樣能自主復制；侵染性RNA僅由一種分子所組成。病毒鑒定采用生物學實驗，病株汁液體外性狀測定，血清學實驗，電子顯微鏡技術，分子生物學技術。類病毒無法用血清學和電鏡診斷，一般采用生物鑒定、凝膠電泳、互補脫氧核糖核酸雜交。植物病毒病常見的實驗診斷方法有哪些，任選其中一種簡述其原理及步驟。1、〔1〕枯斑寄主：枯斑寄主受到某種病毒感染后只產生局部枯斑，一個局部枯斑就是一個侵染點，單個枯斑中的病毒比擬純一。別離后接回自然發(fā)病寄主的健苗上，產生和原來完全一樣的病癥，而不混有其他的病癥，屢次反復別離，即可獲得純一的致病病毒?！?〕過濾寄主：利用寄主對不同病毒的抗性差異將病毒別離開來。凡某種寄主對一種病毒是免疫的，而對另一種病毒是感染的，或對一種病毒是感染的，而對其他幾種病毒是免疫的?！?〕?；轶w：專化介體是利用介體種間對病毒親和力和傳毒特性的差異來別離病毒。一定的介體只能傳染一定的病毒。2、ELISA原理：〔1〕抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體外表，是蛋白質和聚苯乙烯外表間的疏水性局部相互吸附，并保持其免疫學活性；〔2〕抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性；〔3〕酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據參加底物的顏色反響來判定是否有免疫反響的存在，而且顏色反響的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。步驟：3、核酸分子雜交：核酸分子雜交技術那么是通過檢測病毒核酸來證實病毒的存在，原理：DNA—RNA堿基互補關系步驟：制備探針、同位素標記探針、點雜交檢測病毒。PCR的中文全稱，并試述PCR的原理及其在植物正單鏈RNA病毒〔如：馬鈴薯Y病毒〕檢測中應用。聚合酶鏈式反響。原理：在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點，通過變性、退火、延伸等步驟哦，體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。步驟：變性、退火、延伸先從純化病毒中提取RNA，在反轉錄酶的作用下，合成cRNA，在dna聚合酶的作用下形成平整末端的ds-cDNA,接下來就可以進展常規(guī)的PCR反響，具體操作如下：

①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反響作準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；③引物的延伸：DNA模板--引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反響原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保存復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保存復制鏈。試述酶聯免疫吸附反響〔ELISA〕間接法的主要實驗流程。間接法的主要實驗流程：先用待測病毒標樣包被酶聯板，使病毒抗原吸附在微皿孔壁上；洗去多余抗原及雜質，參加特異性兔抗血清IgG；培育后洗去除未和抗原結合的多余抗體，再加上酶標記羊抗兔IgG；最后參加底物。如有顏色反響，證明抗原—特異抗體—酶標抗抗體復合物的存在，從而確定病毒的存在。試述植物病毒在循回增殖型的傳毒蚜蟲中的大致循回增殖過程。通過電鏡觀察，發(fā)現蚜蟲的食道、唾腺、脂肪體、腦和含菌體的細胞中均有病毒存在。人們設想的循環(huán)增殖的大致過程為：病毒從口針吸入進中腸，穿透腸壁達血淋巴，然后轉入脂肪體細胞內增殖，再將病毒轉運到唾腺的唾液中，最后病毒隨唾液返回口針，蚜蟲為害取食是就傳染到植物細胞內了?？乖?、半抗原、抗原決定簇及抗體的各自定義。抗原〔antigen,Ag〕，是指能夠刺激機體產生〔特異性〕免疫應答，并能與免疫應答產物抗體和致敏淋巴細胞在體外結合，發(fā)生免疫效應〔特異性反響〕的物質。不完全抗原，即半抗原〔hapten〕是只具有免疫反響性，而無免疫原性的物質，故又稱不完全抗原。半抗原與蛋白質載體結合后，就獲得了免疫原性，如：絕大多數多糖和所有的類脂等?？乖砦弧瞖pitope〕，又稱抗原決定簇〔antigenicdeterminant，AD〕，指抗原分子中決定抗原特異性的特殊化學基團。抗體〔antibody〕：機體在抗原物質刺激下，由B細胞分化成的漿細胞所產生的、可與相應抗原發(fā)生特異性結合反響的免疫球蛋白。如何根據植物病毒的傳播方式和傳毒特點制定病毒病害控制方案？植物病毒的傳播方式：機械傳染，嫁接傳染，菟絲子傳染，種子傳染，介體傳染

傳毒特點：非循回型〔非持久性病毒〕多為口針傳毒

循回型：增值型〔持久性傳毒〕和非增值型〔持久性和非持久性傳毒〕

方案：以CMV感染的普通煙為例

1〕.檢疫措施：綜合治理，防治為主，對煙草種子種苗的檢疫，防治病毒的傳入。2〕.無病種子及無性繁殖材料：建立無病留種田，去除田間的雜草，去除越冬的蚜蟲；種苗消毒與熱處理，煙草種子中的CMV通過360℃熱處理3-4周可到達防治的目的；莖尖和原生質體的脫病毒培養(yǎng)。3〕.農業(yè)防治：合理布局，不要在煙區(qū)四周種植蔬菜，桃樹等，減少蚜蟲的危害；選用抗病品種和耐病品種，選擇蚜蟲不易生長的品種如云煙87，云煙85等；注意田間管理，及時清理田間雜草，翻耕滅茬；利用地上覆蓋物避蚜防病，使用黃板誘蚜測報，如銀灰色塑?；蛘咄该魉芰系啬た梢杂行У谋苎练啦?；加強水肥的管理，適期適量灌水和排水，合理施肥；適期播種和合理密植，低溫不適合蚜蟲的生長，早播，早移栽可以減少蚜蟲的危害；合理使用化學藥劑防治蚜蟲。

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