醋酸奧曲肽質量檢驗標準

醋酸奧曲肽標準CusuanAoqutaiOctreotideAcetateC49H66N10O10S2.xC2H4O21019.26.x60.02本品系由八個氨基酸組成的合成多肽，為D-苯丙氨酰-L-半胱氨酰-L-苯丙氨酰-D-色氨酰-L-賴氨酰-L-蘇氨酰-N-［（1R,2R）-2-羥基-1-（羥甲基）丙基］-L-半胱氨酰胺環(huán)（2→7）-二硫鍵醋酸鹽。按無水與無醋酸物計算，含奧曲肽（C49H66N10O10S2）應為97.0%～102.0%?！拘誀睢勘酒窞榘咨蝾惏咨珒龈煞勰┗蚴杷蓧K狀物。本品在水和冰醋酸中易溶，在乙醚中不溶。比旋度取本品，精密稱定，用冰醋酸定量稀釋制成每1ml中約含5mg的溶液，依法測定(中國藥典2010年版二部附錄ⅥE)，按無水與無醋酸物計算，比旋度應為-66.0°至-76.0°。【鑒別】（1）取本品約1mg，加水1ml溶解，加雙縮脲試劑（取硫酸銅0.15g，加酒石酸鉀鈉0.6g，加水50ml使溶解，在攪拌下加入10%氫氧化鈉溶液30ml，加水至100ml，即得），即顯藍紫色。（2）在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應與對照品溶液主峰的保留時間一致。（3）本品的分子離子峰應為1019.26±1。【檢查】氨基酸比值取本品1mg，置一玻璃管中，加30%過氧化氫溶液-甲酸（1:9）100μl，置冰水浴中4小時，真空干燥，加6mol/L鹽酸溶液100μl，充氮后熔封，置110℃水解24小時，冷卻，啟封，真空干燥，加0.1mol/L鹽酸溶液溶解并制成每1ml中約0.5mg的溶液，作為供試品溶液；另取磺基丙氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸及蘇氨醇對照品，制成與供試品中各氨基酸相當?shù)臐舛?，作為對照品溶液。照適宜的氨基酸分析方法測定。以苯丙氨酸、賴氨酸的總摩爾數(shù)的三分之一作為1，計算各氨基酸的相對比值，應符合以下規(guī)定：半胱氨酸1.7～2.3，蘇氨酸0.8～1.2，苯丙氨酸1.8～2.2，賴氨酸0.9～1.1酸度取本品，加水溶解并制成每1ml中含0.125mg的溶液，依法測定(中國藥典2010年版二部附錄ⅥH)，pH值應為5.0～7.0。溶液的澄清度與顏色取本品，加水溶解并制成每1ml中含0.125mg的溶液，溶液應澄清無色，如顯渾濁，與1號濁度標準液(中國藥典2010年版二部附錄ⅨB)比較，不得更濃；如顯色，與黃色1號標準比色液(中國藥典2010年版二部附錄ⅨA第一法)比較，不得更深。醋酸取本品適量，精密稱定，加稀釋液[流動相A-甲醇（95：5）]溶解并定量稀釋制成每1ml中含1.25mg的溶液，作為供試品溶液。照合成多肽中的醋酸測定法（中國藥典2010年版二部附錄ⅦN）測定，含醋酸應為5.0%～12.0%。有關物質取本品適量，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含0.125mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。照含量測定項下的色譜條件，取對照溶液100μl注入液相色譜儀，調節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%，再精密量取供試品溶液和對照溶液各100μl分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰，脫蘇氨醇8奧曲肽峰面積不得大于對照溶液的主峰面積的0.25倍（0.5%），其他單一雜質峰面積不得大于對照溶液的主峰面積的0.25倍（0.5%），各雜質峰面積總和不得大于對照溶液主峰面積的0.75倍（1.5%）。殘留溶劑乙腈、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、乙醚、哌啶取本品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含100mg的溶液，作為供試品溶液。另精密稱取乙腈、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、乙醚和哌啶各適量，加水定量稀釋制成每1ml含乙腈0.041mg、二甲基甲酰胺0.088mg、二氯甲烷0.06mg、乙醚0.5mg和哌啶0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液。照殘留溶劑測定法（中國藥典2010年版附錄ⅧP第三法）測定，以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（或極性相近）為固定液的毛細管柱為色譜柱；初始溫度為30℃，維持8分鐘，再以每分鐘7℃速率升至200℃，維持5分鐘；進樣口溫度為200℃；檢測器溫度為250℃。取對照品溶液1μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，各色譜峰之間的分離度均應符合要求。精密量取供試品溶液與對照溶液各1μl分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，含乙腈不得過0.041%，二甲基甲酰胺不得過0.088%，二氯甲烷不得過0.06%，乙醚不得過0.5%，哌啶不得過0.5%。三氟醋酸取本品適量，精密稱定，加稀釋液[流動相A-甲醇（95:5）]溶解并定量稀釋制成每1ml中含5.0mg的溶液，作為供試品溶液。另取三氟醋酸適量，用稀釋液[流動相A-甲醇（95:5）]定量稀釋制成每1ml中含三氟醋酸0.15mg的溶液，作為對照品溶液。照合成多肽中的醋酸測定法（中國藥典2010年版二部附錄ⅦN）測定，含三氟醋酸應不得過0.3%。水分取本品，照水分測定法(中國藥典2010年版二部附錄ⅧM第一法B)測定，含水分不得過5.0%。細菌內(nèi)毒素取本品，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄ⅪE），每1mg醋酸奧曲肽中含細菌內(nèi)毒素的量應小于5EU?！竞繙y定】照高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄ⅤD)測定。色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以四甲基氫氧化銨溶液（取10%四甲基氫氧化銨溶液20ml，加水880ml，用10%磷酸溶液調pH值至5.4）-乙腈（900:100)作為流動相A；以四甲基氫氧化銨溶液（取10%四甲基氫氧化銨溶液20ml，加水380ml，用10%磷酸溶液調pH值至5.4）-乙腈（400:600)作為流動相B；檢測波長為210nm，按下表進行梯度洗脫。取脫蘇氨醇8奧曲肽和醋酸奧曲肽對照品適量，加水溶解并制成每1ml中各約含脫蘇氨醇8奧曲肽10μg和醋酸奧曲肽0.1mg的混合溶液，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，理論板數(shù)按醋酸奧曲肽峰計算不低于3000；脫蘇氨醇8奧曲肽峰與奧曲肽峰的分離度應符合要求。時間（分鐘）流動相A（%）流動相B（%）07327305545317327377327測定法取本品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋