基于益生菌裂解物的納米顆粒遞送siRNA治療結(jié)直腸癌-現(xiàn)代生物技術(shù)研究

前仍然需要一個(gè)理想的平臺(tái)來(lái)實(shí)現(xiàn)免疫激活和高效的基因傳遞。羅伊氏乳桿菌因其獨(dú)特的抗原性具有潛在苗用于肝癌免疫基因治療實(shí)驗(yàn)研究”NanoparticledeliveryofsiRNAbasedonprobioticlyhasbecomeanewstrategyfortreatmentofcancergenedeliveryisstillneeded.Lactobacillusantigenicityandpotentialassociationwithcancerprogression.Inthisstudy,anoLacwasdesignedbyactivationofimmunecells,andhasbeenpr【Keywords】STAT3;siRNAdeli雖然結(jié)直腸癌已經(jīng)被研究了很多年，它仍然是常出現(xiàn)顯性癌基因過(guò)度激活或抑癌基因的失活，在癌癥治療中，引入抑癌基因或敲低致癌基因具有天然的優(yōu)勢(shì)[2]基因治療可以通過(guò)改腫瘤細(xì)胞的特征，直接誘靠免疫功能清除腫瘤的手段。免疫治療可以激活免*將免疫治療引入基因治療中產(chǎn)生的協(xié)同作用對(duì)于腫免疫基因治療仍然需要尋找理想的免疫刺激物質(zhì)，腸道菌群在許多疾病中起著重要作用，其中的羅伊氏乳桿菌可以改善宿主微生態(tài)平衡，抑制致病員曾嘗試將其作為免疫治療策略，并證明了其通過(guò)由于裂解物的復(fù)雜組成，因此有必要開(kāi)發(fā)合適的策現(xiàn)有的研究主要集中在提高遞送效率和靶點(diǎn)的活性子納米顆粒由于其特殊理化性質(zhì)對(duì)免疫系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生活物與基因遞送載體骨架結(jié)合，賦予載體自身免疫在之前的研究中，我們?cè)O(shè)計(jì)了由DOTAP和獲得。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均在四川大學(xué)衛(wèi)生研究總局動(dòng)物倫理委員會(huì)和《四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物指南及標(biāo)準(zhǔn)操新鮮培養(yǎng)的羅伊氏乳桿菌及其裂解物可以通過(guò)革蘭氏染色進(jìn)行區(qū)分。將活菌或裂解物固定在顯微利用高壓均質(zhì)機(jī)對(duì)羅伊氏乳桿菌進(jìn)行裂解。將BMDC重新接種到6孔板中。然后，從小鼠淋巴結(jié)Lac或DMP-Lac。48小時(shí)后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)48h后處死小鼠，收集腹股溝淋巴結(jié)和脾臟。加入使用核糖核酸酶（0.25mg/mL,Solarbio，北京）行拍照，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)效率。24h后，采用MTT法測(cè)定細(xì)胞活力。通過(guò)病理組織切片掃描系統(tǒng)進(jìn)行分析。為了分析腫瘤細(xì)胞的凋亡，我們用DeadEndFluorometric桿菌的細(xì)胞壁已經(jīng)破裂。我們使用透射電鏡觀察了和DMP-Lac的平均ζ-電位分別為48.1mV和13.6mV納米粒的細(xì)胞毒性。DMP和DMP-Lac的IC50我們進(jìn)一步研究了DMP-Lac/siRNA復(fù)合物的巨胞吞作用、脂筏介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)示，經(jīng)甲基β-環(huán)糊精和氯丙嗪處理后，DMP-圖2體外轉(zhuǎn)染研究。（A）CT26細(xì)胞轉(zhuǎn)染PEI25K、DMP和DMP-Lac后的熒光圖像分析（比尺：100μm）。（BLac/siRNA攝取的熒光圖像分析。（比例尺：5DC在調(diào)節(jié)先天和適應(yīng)性免疫反應(yīng)中起著至關(guān)重要的作用，熒光顯微鏡結(jié)果顯示羅丹明標(biāo)記的明DMP-Lac會(huì)激活DC高水平表達(dá)共激活分子活化。同時(shí)，DMP-Lac在體外也可以有效增加脾淋活作用，我們研究了腹股溝肌內(nèi)注射后淋巴結(jié)和脾臟免疫細(xì)胞的活性。如圖4C所示，在淋巴結(jié)中，著下降。我們進(jìn)一步通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)研究了DMP-Lac/siSTAT3的抗腫瘤作用。DMP-Lac組、DMP-協(xié)同作用。免疫組化結(jié)果如圖6D所示，DMP-），Lac/siSTAT3復(fù)合物在體內(nèi)可以安全性地抑制腫瘤和誘導(dǎo)凋亡有效抑制腫瘤進(jìn)展，且具有較高的安全圖4DMP-Lac在體外和體內(nèi)激）；（n=3）。（B）CD69+在T細(xì)胞中的表達(dá)；脾式細(xì)胞術(shù)分析。（E）細(xì)胞凋亡率直方圖分析（*Lac/siSTAT3代表性小鼠腹腔圖像。（B）本研究證明了利用免疫原性基因載體遞送細(xì)胞毒性基因是一種高效的腫瘤治療策略，并開(kāi)發(fā)了一的細(xì)胞凋亡發(fā)揮協(xié)同作用，具有顯著的腫瘤治療作羅伊氏乳桿菌是益生菌的一員，其各種成分具 菌在腫瘤治療中的具體機(jī)制正在研究中，迄今為止于羅伊氏乳桿菌的研究大多集中在口服活菌上致使不能充分利用其能力。為了制備具有更高生物活性常用的熱失活可能會(huì)導(dǎo)致一些免疫活性物質(zhì)的損失，而化學(xué)失活則有引入化學(xué)試劑殘留物的風(fēng)險(xiǎn)。如何是一個(gè)問(wèn)題，基于羅伊氏乳桿菌的有效腫瘤免疫治免疫治療旨在激活免疫系統(tǒng)清除腫瘤，將免疫治療與基因治療相結(jié)合可以達(dá)到最佳的治療效果。如何找到一種簡(jiǎn)單有效的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)成為CSF細(xì)胞因子作為佐劑，提高自殺基因?qū)谏亓鍪蟮纳嫫赱10]。這些研究都成功激活了免疫系統(tǒng)，佐劑，單純地添加免疫佐劑成分不可避免地使藥物基因載體本身，利用羅伊氏乳桿菌的裂解物修飾能顯著激活DC，激活細(xì)胞免疫。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，DMP-Lac在腹腔轉(zhuǎn)移模型中對(duì)腫瘤進(jìn)展的抑制作用后續(xù)的免疫反應(yīng)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的免疫治療。轉(zhuǎn)移[12]治療效果，但很少有研究能夠產(chǎn)生具有抗癌能力的重塑腫瘤微環(huán)境。我們使用具有免疫治療作用的使用確實(shí)具有更高的抗腫瘤功效。在腹腔轉(zhuǎn)移瘤模送納米粒表現(xiàn)出顯著的協(xié)同治療優(yōu)勢(shì)。一方面，默會(huì)誘導(dǎo)腫瘤產(chǎn)生促炎因子，這些因子可被DMP-[2]XuJ,HaigisKM,FirestoneAJ,etaloncogenedosageandabsenceoftumorsuppressoractivityinNras-drivenhematopoietictransformation[J].Immunotherapy[J].AdvMater,2020,3therapeuticultrasou[5]MuQ,TavellaVJ,LuoXM.RoleoLactobacillusreuteriMarson,ATintaru,NDuse.AnidendrimernanosystemforefCancerSuicideGeneTherapy[J].IntJNan[9]FinocchiaroLM,GlikinGC.Cyandsuicidegenetherapyassurgeryatumorcelllysate-pulseddendriticcellsaugmentstheeofIFN-betagenetherapyformalignantgl