總膽固醇測(cè)定試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2022年）

總膽固醇測(cè)定試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2022年）本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。一、適用范圍本指導(dǎo)原則所指的總膽固醇測(cè)定試劑是指利用CHOD-PAP法對(duì)人血清、血漿等樣本中總膽固醇含量進(jìn)行體外定量測(cè)定的試劑。目前，總膽固醇測(cè)定已有完整的參考系統(tǒng)：其決定性方法為同位素稀釋質(zhì)譜法，參考方法為正己烷抽提L-B反應(yīng)顯色法（ALBK法）或色譜法，常規(guī)測(cè)定方法為酶法。酶法主要包括膽固醇氧化酶法和膽固醇脫氫酶法，其中膽固醇氧化酶-PAP法是目前應(yīng)用最為廣泛的常規(guī)測(cè)定方法。依據(jù)YY/T1227-2022《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）命名》的要求，將膽固醇氧化酶-PAP法規(guī)范表述為CHOD-PAP法。本指導(dǎo)原則適用于采用CHOD-PAP法測(cè)定的試劑，不適用于脫氫酶法和干化學(xué)法測(cè)定的試劑，但適用處可參照?qǐng)?zhí)行。依據(jù)《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類(lèi)子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2022〕242號(hào)），總膽固醇測(cè)定試劑屬于酯類(lèi)檢測(cè)試劑，管理類(lèi)別為Ⅱ類(lèi)，分類(lèi)編碼為6840。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊(cè)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。1.產(chǎn)品預(yù)期用途總膽固醇是指血液中各脂蛋白所含膽固醇之總和，分為酯化型膽固醇（又稱(chēng)膽固醇酯，CE）和游離型膽固醇（FC），其中CE占60%~70%，F(xiàn)C占30%~40%，健康個(gè)體之間兩種類(lèi)型的比例保持穩(wěn)定。膽固醇是合成腎上腺皮質(zhì)激素、性激素、膽汁酸以及維生素D等生理活性物質(zhì)的重要原料，也是構(gòu)成細(xì)胞膜的主要成分，其濃度可作為脂代謝的指標(biāo)。定量測(cè)定人體樣本中總膽固醇含量，臨床主要用于心血管疾病的危險(xiǎn)分析，高TC血癥是冠心病的主要危險(xiǎn)因素之一。病理狀態(tài)下，高TC有原發(fā)與繼發(fā)兩類(lèi)，原發(fā)的如家族性高膽固醇血癥（低密度脂蛋白受體缺陷）、家族性apoB缺陷癥、多源性高TC、混合性高脂蛋白血癥。繼發(fā)的多見(jiàn)于腎病綜合征、甲狀腺功能減退、糖尿病、妊娠等。低TC血癥也有原發(fā)性的與繼發(fā)的，前者如家族性的無(wú)或低β脂蛋白血癥，后者如甲亢、營(yíng)養(yǎng)不良、慢性消耗性疾病等。3.有關(guān)生物安全性方面的說(shuō)明如試劑中主要原材料由各種動(dòng)物、病原體、人源組織和體液等生物材料經(jīng)處理或添加某些物質(zhì)制備而成，為保證產(chǎn)品在運(yùn)輸、使用過(guò)程中對(duì)使用者和環(huán)境的安全，研究者應(yīng)提供上述原材料有關(guān)生物安全性的說(shuō)明或證明文件。4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)。5.其他包括同類(lèi)產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況，相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用情況，申請(qǐng)注冊(cè)產(chǎn)品與國(guó)內(nèi)外同類(lèi)產(chǎn)品的異同等。對(duì)于總膽固醇測(cè)定試劑，分析性能應(yīng)包括試劑空白吸光度、線性范圍、準(zhǔn)確度、分析靈敏度、精密度、分析特異性、其他影響檢測(cè)的因素等。1.試劑空白吸光度用指定空白樣品（如純化水、生理鹽水等）加入工作試劑作為樣品，在試劑規(guī)定主波長(zhǎng)下測(cè)試吸光度值，重復(fù)兩次，均值即為空白吸光度。雙試劑型試劑應(yīng)不大于0.080，單試劑型試劑應(yīng)不大于0.100。2.線性范圍2.1線性范圍的建立申請(qǐng)人建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實(shí)際檢測(cè)的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度達(dá)到預(yù)期測(cè)定上限的混合人源樣本，制備低濃度樣本時(shí)應(yīng)充分考慮稀釋對(duì)樣本基質(zhì)的影響。建立線性范圍時(shí)，需在預(yù)期測(cè)定范圍內(nèi)選擇7～11個(gè)濃度水平。例如，將預(yù)期測(cè)定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點(diǎn)（最終不得少于7個(gè)水平）直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。2.2線性范圍的驗(yàn)證2.2.1用接近線性范圍上限的高濃度樣本和接近線性范圍下限的低濃度樣本，混合成至少5個(gè)稀釋濃度（xi）。分別測(cè)試樣本，每個(gè)稀釋濃度測(cè)試3次，求出每個(gè)稀釋濃度測(cè)定結(jié)果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測(cè)定結(jié)果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程。計(jì)算線性回歸的相關(guān)系數(shù)（r），r≥0.9900。2.2.2用2.2.1方法中稀釋濃度（xi）代入求出線性回歸方程，計(jì)算yi的估計(jì)值及yi與估計(jì)值的絕對(duì)偏差或相對(duì)偏差，應(yīng)符合申請(qǐng)人給定值。3.準(zhǔn)確度測(cè)試可用于評(píng)價(jià)常規(guī)方法的國(guó)家/國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)3次，測(cè)試結(jié)果記為（xi），按公式（1）分別計(jì)算相對(duì)偏差（B%），如果3次結(jié)果都在±10%范圍內(nèi)，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不符合，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合，則應(yīng)重新連續(xù)測(cè)試20次，并分別按照公式（1）計(jì)算相對(duì)偏差（B%），如果大于等于19次測(cè)試的結(jié)果都在±10%范圍內(nèi)，即判為合格。B%＝|xi－T|／T×100%………………（1）

式中：

xi為測(cè)試結(jié)果；

T為國(guó)家/國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)示值。4.分析靈敏度測(cè)試給定濃度的被測(cè)物時(shí)，在規(guī)定參數(shù)下所得的吸光度差值（ΔA）應(yīng)符合申請(qǐng)人給定的范圍。5.精密度5.1批內(nèi)精密度重復(fù)測(cè)試不同濃度（如高、中、低）的質(zhì)控品或樣本10次，所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于4.0%。5.2批間差選取3個(gè)不同批次的試劑，測(cè)試不同濃度（如高、中、低）的質(zhì)控品或樣本，每個(gè)批號(hào)測(cè)定3次，批間相對(duì)極差（R）應(yīng)不大于6.0%。6.分析特異性應(yīng)明確已知干擾因素對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響：對(duì)膽紅素、甘油三酯、血紅蛋白、抗壞血酸等干擾物質(zhì)分別進(jìn)行驗(yàn)證。說(shuō)明樣本的制備方法及實(shí)驗(yàn)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，確定干擾物質(zhì)的接受標(biāo)準(zhǔn)。注冊(cè)申請(qǐng)中包含不同的包裝規(guī)格，需要對(duì)不同包裝規(guī)格之間的差異進(jìn)行分析或驗(yàn)證，如不同包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個(gè)包裝規(guī)格產(chǎn)品的分析性能評(píng)估。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細(xì)說(shuō)明，具體說(shuō)明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)【參考區(qū)間】的相應(yīng)描述應(yīng)與研究結(jié)論保持一致。試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)分別在說(shuō)明書(shū)【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。1.1研究方法總膽固醇測(cè)定試劑盒目前已有相應(yīng)的參考方法（ALBK法、色譜法等）和境內(nèi)已上市同類(lèi)產(chǎn)品，申請(qǐng)人可以選擇其中一種方法開(kāi)展比較研究試驗(yàn)。與參考方法進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，考察待評(píng)價(jià)試劑與參考方法的一致性。一致性評(píng)價(jià)應(yīng)選擇在參考實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展研究，參考實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具有中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)認(rèn)可關(guān)于該項(xiàng)目的檢測(cè)資質(zhì)。與境內(nèi)已上市同類(lèi)產(chǎn)品進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，證明兩者具有等效性。應(yīng)選擇目前臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，同時(shí)應(yīng)充分了解對(duì)比試劑的信息，包括方法學(xué)、預(yù)期用途、主要性能指標(biāo)、校準(zhǔn)品的溯源情況以及參考區(qū)間等，并提供已上市產(chǎn)品的境內(nèi)注冊(cè)信息及說(shuō)明書(shū)。1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)申請(qǐng)注冊(cè)產(chǎn)品的特性建立具體的試驗(yàn)方案，并詳細(xì)說(shuō)明對(duì)比試劑/方法的選擇、入排標(biāo)準(zhǔn)、樣本量要求以及具體試驗(yàn)操作過(guò)程、試驗(yàn)周期、設(shè)盲要求、統(tǒng)計(jì)分析方法等內(nèi)容。樣本數(shù)量應(yīng)采用合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法（如目標(biāo)值法等）進(jìn)行計(jì)算，并符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求?？蛇x擇總樣本量不少于40例并分別采用待評(píng)價(jià)試劑和對(duì)比試劑/參考方法進(jìn)行雙份測(cè)定的方式，亦可選擇總樣本量不少于100例并分別采用待評(píng)價(jià)試劑和對(duì)比試劑/參考方法進(jìn)行單次測(cè)定的方式。其中參考區(qū)間以外樣本應(yīng)不少于50%，同時(shí)應(yīng)注重醫(yī)學(xué)決定水平（6.2mmol/L）附近樣本的選擇，并盡量涵蓋檢測(cè)范圍。試驗(yàn)前應(yīng)設(shè)定臨床評(píng)價(jià)性能指標(biāo)的可接受標(biāo)準(zhǔn),如果比較研究試驗(yàn)結(jié)果無(wú)法達(dá)到預(yù)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)適當(dāng)擴(kuò)大樣本量進(jìn)行評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)用的樣本類(lèi)型應(yīng)與注冊(cè)申請(qǐng)保持一致。對(duì)于具有可比性的不同樣本類(lèi)型，如血清和血漿樣本，可在分析性能評(píng)估中對(duì)樣本適用性進(jìn)行研究，或在臨床評(píng)價(jià)中對(duì)每種樣本類(lèi)型分別進(jìn)行符合統(tǒng)計(jì)學(xué)意義數(shù)量的評(píng)估。1.2.2試驗(yàn)操作及周期申請(qǐng)人可以通過(guò)對(duì)總樣本量不少于40例，用待評(píng)價(jià)試劑和對(duì)比試劑/參考方法進(jìn)行平行試驗(yàn)，對(duì)每份臨床樣本作雙份測(cè)定。在試驗(yàn)操作過(guò)程中應(yīng)對(duì)樣本進(jìn)行編盲，試驗(yàn)檢測(cè)周期至少為5天。申請(qǐng)人也可以通過(guò)對(duì)總樣本量不少于100例，用待評(píng)價(jià)試劑和對(duì)比試劑/參考方法進(jìn)行平行試驗(yàn)，作單次測(cè)定。在試驗(yàn)操作過(guò)程中應(yīng)對(duì)樣本進(jìn)行編盲，試驗(yàn)檢測(cè)周期至少為5天。1.2.3數(shù)據(jù)收集和處理應(yīng)首先進(jìn)行離群值觀察，離群值的個(gè)數(shù)不得超過(guò)限值。若未超限，可刪除離群值后進(jìn)行分析；

若超出限值，則需合理分析原因并考慮糾正措施，必要時(shí)重新收集樣本進(jìn)行分析。離群值分析和處理方法應(yīng)有依據(jù)。1.2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如相關(guān)分析、線性回歸、偏倚/偏差分析等。對(duì)于對(duì)比試驗(yàn)的等效性研究，最常用是對(duì)待評(píng)試劑和對(duì)比試劑/參考方法兩組檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點(diǎn)觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標(biāo)。1.3.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)，詳細(xì)說(shuō)明對(duì)比試劑/方法選擇、樣本入組和排除標(biāo)準(zhǔn)、樣本量要求、設(shè)盲要求、統(tǒng)計(jì)分析方法的選擇等內(nèi)容。評(píng)價(jià)報(bào)告應(yīng)由申請(qǐng)人/代理人簽章。2.臨床試驗(yàn)途徑臨床試驗(yàn)的開(kāi)展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫(xiě)等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求。（九）產(chǎn)品技術(shù)要求申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品前期研究的結(jié)果，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則的通告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2022年第9號(hào)）的有關(guān)要求，擬定產(chǎn)品技術(shù)要求，內(nèi)容主要包含產(chǎn)品性能指標(biāo)和檢驗(yàn)方法。下面就產(chǎn)品技術(shù)要求中涉及的產(chǎn)品適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和主要性能指標(biāo)等相關(guān)內(nèi)容作簡(jiǎn)要敘述。1.產(chǎn)品適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)：

表1相關(guān)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)GB/T21415-2022《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測(cè)量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》

GB/T26124-2022《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）》

YY/T1206-2022《總膽固醇測(cè)定試劑盒（氧化酶法）》

WS/T362-2022《血清膽固醇參考測(cè)量程序分光光度法》

WS/T120-1999《血清總膽固醇的酶法測(cè)定》

2.主要性能指標(biāo)：

2.1外觀符合申請(qǐng)人規(guī)定的外觀要求。2.2裝量液體試劑的裝量應(yīng)不少于標(biāo)示量。2.3試劑空白吸光度用指定空白樣品（如純化水、生理鹽水等）加入工作試劑作為樣品，在試劑盒規(guī)定主波長(zhǎng)下測(cè)試吸光度值，重復(fù)兩次，均值即為空白吸光度。雙試劑型試劑盒應(yīng)不大于0.080，單試劑型試劑盒應(yīng)不大于0.100。2.4線性范圍線性范圍應(yīng)至少包含2～10mmol/L。2.4.1相關(guān)系數(shù)（r）

線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.9900。2.4.2線性偏差線性偏差應(yīng)不超過(guò)申請(qǐng)人給定值。線性偏差可分段描述或連續(xù)描述，若分段描述，應(yīng)注意分段點(diǎn)的確定。2.5準(zhǔn)確度試劑盒測(cè)試可用于評(píng)價(jià)常規(guī)方法的國(guó)家/國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)3次，測(cè)試結(jié)果記為（xi），按公式（1）分別計(jì)算相對(duì)偏差（B%），如果3次結(jié)果都在±10%范圍內(nèi)，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不符合，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合，則應(yīng)重新連續(xù)測(cè)試20次，并分別按照公式（1）計(jì)算相對(duì)偏差（B%），如果大于等于19次測(cè)試的結(jié)果都在±10%范圍內(nèi)，即判為合格。B%＝|xi－T|／T×100%………………（1）

式中：

xi為測(cè)試結(jié)果；

T為國(guó)家/國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)示值。2.6分析靈敏度試劑盒測(cè)試給定濃度的被測(cè)物時(shí)，在試劑盒規(guī)定參數(shù)下所得的吸光度差值（ΔA）應(yīng)符合申請(qǐng)人給定的范圍。2.7精密度2.7.1批內(nèi)精密度重復(fù)測(cè)試不同濃度（如高、中、低）的質(zhì)控品或樣本10次，所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于4.0%。2.7.2批間差選取3個(gè)不同批次的試劑盒，測(cè)試不同濃度（如高、中、低）的質(zhì)控品或樣本，每個(gè)批號(hào)測(cè)定3次，試劑盒批間相對(duì)極差（R）應(yīng)不大于6.0%。2.8穩(wěn)定性2.8.1效期末穩(wěn)定性試劑盒在規(guī)定的保存條件下保存至有效期末進(jìn)行檢驗(yàn)，產(chǎn)品性能應(yīng)符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7.1的要求。2.8.2加速穩(wěn)定性根據(jù)試劑盒的有效期，將試劑盒放置于37℃條件下，一定時(shí)間（通常是3d～7d）后進(jìn)行檢驗(yàn)，產(chǎn)品性能應(yīng)符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7.1的要求。注1：熱穩(wěn)定性不能用于推導(dǎo)產(chǎn)品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導(dǎo)公式。注2：根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇以上方法之一進(jìn)行驗(yàn)證，但所選用方法宜能驗(yàn)證產(chǎn)品的穩(wěn)定性，以保證在效期內(nèi)產(chǎn)品性能符合產(chǎn)品技術(shù)要求的規(guī)定。2.9校準(zhǔn)品和質(zhì)控品（如適用）

應(yīng)包含外觀、裝量（如適用）、準(zhǔn)確度、均一性、穩(wěn)定性。2.9.1外觀符合申請(qǐng)人規(guī)定的外觀要求。2.9.2裝量液體校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的裝量應(yīng)不少于標(biāo)示量。2.9.3準(zhǔn)確度2.9.3.1校準(zhǔn)品準(zhǔn)確度申請(qǐng)人可采用國(guó)家/國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/具有溯源性的工作校準(zhǔn)品作校準(zhǔn)曲線后測(cè)定校準(zhǔn)品的方法，計(jì)算測(cè)試結(jié)果與標(biāo)示值的相對(duì)偏差，其結(jié)果應(yīng)在±10.0%范圍內(nèi)。2.9.3.2質(zhì)控品準(zhǔn)確度測(cè)定定值質(zhì)控品，測(cè)試結(jié)果應(yīng)在申請(qǐng)人給定的范圍內(nèi)。2.9.4均一性取相同批號(hào)的校準(zhǔn)品或質(zhì)控品10瓶，每瓶測(cè)試1次，按公式（2）和公式（3）計(jì)算測(cè)試結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差S1；

另用上述校準(zhǔn)品或質(zhì)控品中的1瓶連續(xù)測(cè)10次，計(jì)算測(cè)試結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差S2；

再按公式(4)和公式(5)計(jì)算S瓶間和CV瓶間，其結(jié)果應(yīng)符合申請(qǐng)人的規(guī)定。……（2）

………（3）

……………（4）

………（5）

當(dāng)S1<S2時(shí)，令CV瓶間=0式中：----平均值；

S----標(biāo)準(zhǔn)差；

n----測(cè)量次數(shù)；

xi----指定參數(shù)第i次測(cè)量值。2.10穩(wěn)定性校準(zhǔn)品、質(zhì)控品在規(guī)定的保存條件下保存至有效期末進(jìn)行檢驗(yàn)，性能應(yīng)符合準(zhǔn)確度和均一性的要求。（十）產(chǎn)品注冊(cè)檢驗(yàn)報(bào)告具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的注冊(cè)檢驗(yàn)報(bào)告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評(píng)價(jià)意見(jiàn)?？偰懝檀柬?xiàng)目目前有國(guó)家/國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，建議使用國(guó)家/國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行注冊(cè)檢驗(yàn)。（十一）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)說(shuō)明書(shū)承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。結(jié)合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則的通告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2022年第17號(hào)）的要求，下面對(duì)總膽固醇測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。1.【產(chǎn)品名稱(chēng)】試劑盒名稱(chēng)由三部分組成：被測(cè)物質(zhì)的名稱(chēng)、用途、方法或原理。如：總膽固醇測(cè)定試劑盒（CHOD-PAP法）。2.【包裝規(guī)格】2.1包裝規(guī)格應(yīng)明確單、雙或其他多試劑類(lèi)型。2.2包裝規(guī)格應(yīng)注明可測(cè)試的樣本數(shù)或裝量，如xx測(cè)試/盒、xxmL。2.3如有貨號(hào)，可增加貨號(hào)信息。3.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

3.1說(shuō)明試劑盒用于體外定量測(cè)定人血清、血漿等樣本中總膽固醇的含量。3.2明確與總膽固醇測(cè)定相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況。4.【檢驗(yàn)原理】標(biāo)本中的膽固醇酯被膽固醇酯酶（CHER）水解為游離膽固醇，和標(biāo)本中存在的游離膽固醇一起被膽固醇氧化酶（CHOD）氧化為膽甾烯酮和過(guò)氧化氫，后者再經(jīng)過(guò)氧化物酶（POD）催化，使4-氨基安替比林和酚發(fā)生氧化縮合反應(yīng)，生成紅色醌亞胺(稱(chēng)Trinder反應(yīng)，或稱(chēng)PAP反應(yīng))。標(biāo)本中的膽固醇含量和生成的醌亞胺呈正比，500nm左右波長(zhǎng)檢測(cè)醌亞胺的吸光度，對(duì)照校準(zhǔn)物即可計(jì)算出標(biāo)本中的總膽固醇含量，其反應(yīng)式如下：

5.【主要組成成分】應(yīng)明確以下內(nèi)容：

5.1說(shuō)明試劑盒包含組分的名稱(chēng)、比例或濃度；

對(duì)于多組分試劑盒，應(yīng)明確不同批次試劑中各組分是否可以互換。5.2對(duì)于試劑盒中不包含，但對(duì)該試驗(yàn)必需的試劑組分，說(shuō)明書(shū)中應(yīng)列出此類(lèi)組分的名稱(chēng)、純度，提供稀釋或混合方法及其他相關(guān)信息。6.【儲(chǔ)存條件及有效期】6.1說(shuō)明試劑盒的效期穩(wěn)定性、開(kāi)瓶穩(wěn)定性（如適用）、復(fù)溶穩(wěn)定性（如適用）等，并標(biāo)明儲(chǔ)存條件。注：儲(chǔ)存條件不應(yīng)有模糊表述，如“室溫”、“常溫”。7.【適用儀器】應(yīng)明確可適用儀器的具體品牌、型號(hào)。8.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：樣本類(lèi)型、處理、保存期限及保存條件等，如有血漿樣本，應(yīng)明確抗凝劑的要求。冷藏樣本檢測(cè)前是否須恢復(fù)室溫，冷凍樣本應(yīng)明確凍融次數(shù)。對(duì)已知干擾物進(jìn)行說(shuō)明并明確不產(chǎn)生干擾的最高濃度，如：膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯、抗壞血酸。9.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說(shuō)明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

9.1試劑配制方法、注意事項(xiàng)。9.2試驗(yàn)條件：測(cè)定方法（反應(yīng)類(lèi)型）、反應(yīng)方向、溫度、測(cè)定主/副波長(zhǎng)、樣本用量、試劑用量、空白/測(cè)定讀數(shù)時(shí)間以及試驗(yàn)過(guò)程中的注意事項(xiàng)。9.3校準(zhǔn)：說(shuō)明使用的校準(zhǔn)品，校準(zhǔn)曲線的繪制方法。9.4質(zhì)量控制：說(shuō)明質(zhì)控品的使用、質(zhì)量控制方法、質(zhì)控頻率。9.5檢驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算：應(yīng)明確檢驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算方法。10.【參考區(qū)間】應(yīng)注明樣本類(lèi)型的參考區(qū)間，并簡(jiǎn)要說(shuō)明其確定方法。建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考區(qū)間”。11.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】說(shuō)明可能對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的因素，在何種情況下需要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，如檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析查找原因并重新確認(rèn)等。12.【檢驗(yàn)方法的局限性】如試劑盒可稀釋?zhuān)瑧?yīng)明確當(dāng)測(cè)定值超出線性上限時(shí)的稀釋方法以及最大稀釋倍數(shù)。說(shuō)明該檢驗(yàn)方法的