DB61T1521.3-2021奶山羊養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范 第3部分：雙基因良種選育

ICS65.020.30

CCSB43

DB61

陜西省地方標準

DB61/T1521.3—2021

奶山羊養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范

第3部分：雙基因良種選育

TechnicalSpecificationsforDairyGoatFarming—

Part3:Double-genebreeding

2021-12-17發(fā)布2022-01-17實施

陜西省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB61/T1521.3—2021

目??次

前??言.............................................................................................................................................................II

1范圍.................................................................................................................................................................1

2規(guī)范性引用文件.............................................................................................................................................1

3術(shù)語和定義.....................................................................................................................................................1

4選育方法.........................................................................................................................................................1

5選擇程序.........................................................................................................................................................2

附錄A（資料性）擴充特異引物...................................................................................................................3

I

DB61/T1521.3—2021

前??言

DB61/T1521《奶山羊養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范》分為如下部分：

——第1部分：關(guān)中奶山羊良種鑒定；

——第2部分：引進奶山羊良種鑒定；

——第3部分：雙基因良種選育；

——第4部分：種公羊飼養(yǎng)管理；

——第5部分：后備羊培育；

——第6部分：泌乳奶山羊健康養(yǎng)殖；

——第7部分：人工授精；

——第8部分：胚胎移植；

——第9部分：苜蓿半干青貯；

——第10部分：疫病防控；

——第11部分：機器擠奶。

本部分為DB61/T1521的第3部分。

本文件根據(jù)GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)則

起草。

本部分由西北農(nóng)林科技大學(xué)提出。

本部分由陜西省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。

本部分起草單位：西北農(nóng)林科技大學(xué)、楊凌職業(yè)技術(shù)學(xué)院、陜西省動物研究所、陜西省畜牧技術(shù)推

廣總站、陜西關(guān)中奶山羊產(chǎn)業(yè)研究院、陜西省奶山羊養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心、陜西省羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新與

產(chǎn)業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略聯(lián)盟、隴縣畜產(chǎn)局。

本部分主要起草人：安小鵬、侯金星、曹芳君、楊少華、李廣、宋宇軒、田秀娥、付明哲、張磊。

本部分由西北農(nóng)林科技大學(xué)負責(zé)解釋。

本部分首次發(fā)布。

聯(lián)系信息如下：

單位：西北農(nóng)林科技大學(xué)

電話/p>

地址：陜西楊凌示范區(qū)西農(nóng)路22號

郵編：712100

II

DB61/T1521.3—2021

奶山羊養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范第3部分：雙基因良種選育

1范圍

本部分規(guī)定了高產(chǎn)良種奶山羊選育方法、選育程序內(nèi)容要求。

本部分適用于以催乳素受體和促黃體素beta亞基基因選育關(guān)中奶山羊、莎能奶山羊等良種奶山羊。

2規(guī)范性引用文件

本部分無規(guī)范性引用文件。

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本部分。

3.1

基因gene

位于細胞染色體上具有遺傳效應(yīng)的DNA片段，是調(diào)控生物性狀的基本遺傳單位。

3.2

催乳素prolactin

為動物垂體分泌的一種蛋白質(zhì)激素，由199個氨基酸殘基組成。

3.3

受體receptor

可與細胞外專一信號分子（配體）結(jié)合引起細胞反應(yīng)的蛋白質(zhì)，分為細胞表面受體和細胞內(nèi)受體。

3.4

催乳素受體prolactinreceptor

催乳素受體位于山羊的16號染色體上，分為長受體(LF)、中受體(IF)及短受體(SF1a及SF1b)。

不同催乳素受體由同一基因編碼，經(jīng)轉(zhuǎn)錄后選擇性剪接而生成。PRLR是調(diào)控山羊產(chǎn)奶性能和產(chǎn)羔性能

的重要候選基因。

4選育方法

4.1篩選高產(chǎn)個體

篩選頭胎產(chǎn)羔數(shù)達到2只以上的奶山羊，以及產(chǎn)奶第3個月日均產(chǎn)奶量達到4kg以上的高產(chǎn)個體作

為功能基因檢測的對象。

1

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4.2檢測高產(chǎn)個體基因型

采用基因測序的方法對高產(chǎn)個體中的催乳素受體基因（PRLR）和促黃體素beta亞基（LHβ）基因

進行基因分型。

5選擇程序

5.1血液采集

從山羊的頸靜脈采取1mL的血樣或從耳部采取0.5g的耳組織。

5.2DNA提取

利用DNA提取試劑盒從血液或耳組織中提取基因組DNA。

5.3擴增目的片段

根據(jù)催乳素受體基因（PRLR）和促黃體素beta亞基（LHβ）基因的DNA序列分別設(shè)計擴增PRLR

基因外顯子9和LHβ基因5′非翻譯區(qū)的特異引物（附錄A）。

5.4檢測目的片段

利用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增的目的片段。

5.5DNA測序

利用DNA測序技術(shù)檢測基因的分型和統(tǒng)計不同個體的基因型。

5.6基因型選配

從5.5中檢測的個體中篩選具有催乳素受體基因（PRLR）的GG基因型以及促黃體素beta亞基

（LHβ）基因的CC基因型的優(yōu)秀個體進行雜交或者選同交配。

5.7基因型的橫交固定

在不同基因型雜交后代中篩選同時具有GG和CC基因型的個體進行橫交固定。

5.8純合基因型個體組群

在橫交固定的個體中檢測和篩選基因型聚合純化在一起的個體組群。

5.9穩(wěn)定基因型

采用基因型選同交配的方法穩(wěn)定基因型，從而形成產(chǎn)羔率和產(chǎn)奶量高的奶山羊核心群。

5.10選育高產(chǎn)奶山羊新品種（系）

對含有以上2個基因型的個體進行遺傳穩(wěn)定性和生產(chǎn)性能穩(wěn)定性的檢測，結(jié)合常規(guī)育種方法，選育

出高產(chǎn)奶山羊新品系或新品種。

A

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附錄A

（資料性）

擴充特異引物

A.1雙基因型聚合育種技術(shù)用的分子生物學(xué)技術(shù)

聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR），DNA測序，基因克隆，瓊脂糖凝膠電泳。

A.2雙基因型聚合育種技術(shù)用統(tǒng)計方法

多因素方差分析和線性回歸模型。

A.3雙基因型聚合育種技術(shù)所需儀器設(shè)備

PCR擴增儀（可設(shè)定溫度梯度）；

電子天平（精度為0.0001g）；

常溫高速離心機（最大轉(zhuǎn)速為15300rpm）；

低溫冷凍離心機（能設(shè)定為4℃）；

移液器（通用標準吸頭有6個規(guī)格:10ul、20ul、100ul、200ul、1000ul、5000ul）；

高壓滅菌鍋（工作蒸氣壓力0.5MPa）；

凝膠成像儀（提供白光和紫外光以及藍光光源進行拍攝凝膠）；

水浴鍋（可設(shè)定恒定溫度）；

垂直電泳槽（用于蛋白樣品的電泳）；

穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀（用于DNA樣品的電泳）；

超低溫冰箱（能設(shè)定-80℃）；

脫色搖床（能設(shè)定恒定速率搖動）；

恒溫培養(yǎng)箱（設(shè)置為37℃）；

超凈工作臺；

純水儀。

A.4特異引物

PCR擴增引物見表A.1

表A.1PCR擴增引物

基因位點引物序列退火溫度（oC）片段大?。╞p）

F:5′-CTTACCACAACATTGCTGAC-3′

PRLR基因外顯子957465

R:5′-CCTTGGCTGGATTCTATGG-3′

F:5′-ACCAGATCTTGGCCCTTG-3′

LHβ基因5′非翻譯區(qū)57291

R:5′-CAAAGCCTGAGTCCAAC-3′

3

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A.5PCR體系

A.5.115μL的PCR反應(yīng)體系包括DNA模板50ng，7.5μl2×TaqMasterMix，上下游引物(10μM)各0.3

μl，加滅菌水至15μl。

A.5.2PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5min，94℃30s。退火溫度57℃，退火30s，72℃延伸35s，35

個循環(huán)，最后72℃延伸10min。10μl酶切反應(yīng)體系：10×Buffer1μl，內(nèi)切酶0.3μl，滅菌水3.7μl，PCR產(chǎn)

物5μl。

A.6目的片段測序

PCR產(chǎn)物測序，根據(jù)測序結(jié)果對奶山羊個體進行基因分型，其中催乳素受體基因的GG基因型為高

產(chǎn)基因型，促黃體素beta亞基基因的CC基因型為高產(chǎn)基因型。

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目??次

前??言.............................................................................................................................................................II

1范圍.................................................................................................................................................................1

2規(guī)范性引用文件.............................................................................................................................................1

3術(shù)語和定義.....................................................................................................................................................1

4選育方法.........................................................................................................................................................1

5選擇程序.........................................................................................................................................................2

附錄A（資料性）擴充特異引物...................................................................................................................3