亞麻籽-木酚素含量的測(cè)定

2亞麻籽木酚素含量的測(cè)定本文件規(guī)定了亞麻籽木酚素含量的液相色譜測(cè)定方法。本文件適用于亞麻籽木酚素含量的測(cè)定。本方法檢出限：0.01g/100g。本方法定量限：0.03g/100g。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB5009.5—2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。3原理試樣經(jīng)無(wú)水乙醚脫脂，超聲波加熱提取木酚素，堿解，調(diào)酸，制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜法分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。5試劑和材料除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為優(yōu)級(jí)純、色譜純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。5.1試劑5.1.1無(wú)水乙醚（CH3CH2OCH2CH3）。5.1.2無(wú)水乙醇(CH3CH2OH)。5.1.3氫氧化鈉（NaOH）。5.1.4鹽酸（HCl）。5.1.5甲醇（CH3OH）。5.2試劑配制35.2.160%乙醇溶液：取600mL乙醇，用水定容至1000mL。5.2.21.8mol/L氫氧化鈉溶液：準(zhǔn)確稱取72.00g氫氧化鈉，用水定容至1000mL。5.2.3甲醇水溶液（40+60）：取400mL甲醇，加到600mL水中，混勻。5.3標(biāo)準(zhǔn)品5.3.1木酚素品（C21H14O7純度≧98.0%。5.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制5.4.1木酚素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取木酚素標(biāo)準(zhǔn)品15.0mg，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得濃度為1500.00μg/mL的木酚素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-20℃條件下貯存，備用，有效期5.4.2木酚素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取0.50mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、8.00mL木酚素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇水溶液（5.2.3）定容至100mL，工作曲線濃度為7.5μg/mL、15μg/mL、30μg/mL、75μg/mL、120μg/mL，上機(jī)備用。5.5材料5.5.1有機(jī)系微孔濾膜：0.45μm。5.5.2塑料離心管：50mL。6儀器和設(shè)備6.1液相色譜儀：配紫外檢測(cè)器。6.2電子天平：感量0.1mg和0.01g。6.3高速離心機(jī)，10000r/min轉(zhuǎn)速，配50mL離心管。6.4旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，配250mL茄形瓶。6.5樣品研磨機(jī)。6.6超聲波清洗機(jī)。6.7恒溫水浴振蕩器。6.8自然對(duì)流烘箱。6.9備有變色硅膠的干燥器。6.10索氏提取器。7分析步驟7.1試樣制備4將亞麻籽用樣品研磨機(jī)磨碎，過(guò)60目篩，密封備用。7.2試樣提取7.2.1提取準(zhǔn)確稱取樣品1.00g于濾紙筒（直徑2cm，高約7.5cm）內(nèi)，置于索氏提取器中，用無(wú)水乙醚浸泡12小時(shí)后，再用索氏提取器加熱回流提取8小時(shí)。取出樣品(連同濾紙筒)，在室溫通風(fēng)條件下放置5小時(shí)，在105±5℃下烘2小時(shí)后，取出，放入干燥器中，冷卻至室溫。打開濾紙筒，將樣品置于50mL試管中，加入15mL60%乙醇溶液，在50℃條件下超聲波提取15分鐘。將提取液和殘?jiān)D(zhuǎn)入離心管中，以6000r/min離心10min，取上清液，向殘?jiān)屑尤?5mL60%乙醇溶液，重復(fù)上述操作一次，合并上清液，待純化處理。7.2.2純化向提取液中加入10mL1.8mol/L氫氧化鈉溶液，在40℃條件下振蕩堿解40min。用鹽酸調(diào)pH至4~6，過(guò)濾，將濾液移入茄形瓶中，45℃真空濃縮至近干。用甲醇水溶液（40+60）溶解并定容至20mL，稀釋10倍，搖勻，過(guò)0.45μm有機(jī)系微孔濾膜，待上機(jī)分析。7.3儀器參考條件7.3.1色譜柱：C18柱，柱長(zhǎng)250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5μm，或等效色譜柱。7.3.2流動(dòng)相：甲醇+水=40+60。7.3.3流速：1.0mL/min。7.3.4檢測(cè)波長(zhǎng)：290nm。7.3.5進(jìn)樣量：20μL。7.3.6柱溫：35℃。7.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液分別注入液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的峰面積，以混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。7.5試樣溶液的測(cè)定將試樣溶液注入液相色譜儀中，得到峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中木酚素的質(zhì)量濃度。8分析結(jié)果的表述試樣中木酚素的含量按式(1)計(jì)算:5C×V×R×C×V×R×10-6m式中：X—樣品中木酚素的含量，單位為克每百克（g/100g）;C—樣液中木酚素的檢出濃度，單位為微克每毫升(μg/mL）；V—定容體積（mLR—稀釋倍數(shù)；m—稱樣量，單位為克（g）。結(jié)果保留3位有效數(shù)字。9精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均