藥物分析抗生素類藥物的分析

藥物分析抗生素類藥物的分析抗生素質(zhì)量得復(fù)雜性產(chǎn)品穩(wěn)定性差分子結(jié)構(gòu)大多不穩(wěn)定,降解后療效下降、失效或增加毒副作用發(fā)酵過程不易控制易受污染生產(chǎn)工藝復(fù)雜發(fā)酵液中雜質(zhì)無機(jī)鹽、脂肪、各種蛋白質(zhì)、各種降解產(chǎn)物、色素、熱原、毒性物質(zhì)增加異常毒性、細(xì)菌內(nèi)毒素、熱原、降壓物質(zhì)、無菌[檢查]含量測定方法(一)生物學(xué)方法測定抗生素抑菌或殺菌得能力優(yōu)點(diǎn)1、與臨床效果一致2、靈敏度高3、干擾物質(zhì)少缺點(diǎn)1、操作繁瑣2、培養(yǎng)時(shí)間長2、測定誤差大(二)化學(xué)及物理化學(xué)方法以理化方法測定主藥含量優(yōu)點(diǎn)1.準(zhǔn)確度高2.簡單、快速1.不一定代表生物效價(jià)缺點(diǎn)2.易受雜質(zhì)干擾分類(按結(jié)構(gòu)與性質(zhì)):β–內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類、林可霉素類、其她抗生素類第二節(jié)β–內(nèi)酰胺類抗生素

青霉素類頭孢菌素類青霉素(青霉素G、芐青霉素)氨芐西林(氨芐青霉素)阿莫西林(羥氨芐青霉素)普魯卡因青霉素頭孢氨芐頭孢拉定頭孢羥氨芐頭孢噻吩鈉結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、Na與堿金屬(Na+、K+)成鹽,易溶于水(一)羧基酸性12大家應(yīng)該也有點(diǎn)累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流與有機(jī)堿(普魯卡因)成鹽,難溶于水普魯卡因青霉素(二)手性C旋光性(5%頭孢唑啉鈉溶液–18～–24°)頭孢菌素類C6C7青霉素類C3C5C6

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(三)共軛體系UV頭孢菌素類母核有共軛體系青霉素類母核無明顯UV多數(shù)有苯環(huán)取代基青霉素鈉UV7-20(四)β–內(nèi)酰胺環(huán)水溶液不穩(wěn)定干燥純凈穩(wěn)定不穩(wěn)定性因素四元環(huán)張力大酰胺鍵易水解（某些金屬離子）（溫度）某些氧化劑例青霉素得降解反應(yīng)青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸H2OpH2100℃α–青霉噻唑?；u胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl2二、K+、Na+反應(yīng)（一）鑒別焰色→鮮黃色+醋酸氧鈾鋅→↓黃

Na+焰色→紫色+0、1%四苯硼鈉+Ac→↓白

K+(二)呈色反應(yīng)1、羥肟酸鐵反應(yīng)β-內(nèi)酰胺類NaOH呈色Fe3+/3H+H+Fe3+/3(紅、棕、褐)2、與H2SO4-HNO3反應(yīng)頭孢菌素類3、茚三酮反應(yīng)△α-氨基α-氨基、伯胺某些羥基胺類酮式烯醇式茚三酮茚三酮縮合藍(lán)紫色4、雙縮脲反應(yīng)β-內(nèi)酰胺類（開環(huán)分解）似肽鍵藍(lán)紫色(三)沉淀反應(yīng)1、遇酸→↓在過量HCl或有機(jī)溶劑中溶解2、有機(jī)胺鹽反應(yīng)重氮化-偶合反應(yīng)重氮化-偶合反應(yīng)芳伯氨基普魯卡因普魯卡因青霉素光譜法（四）1、UV法樣品、分解產(chǎn)物Cu2+頭孢氨芐λmax=262nm青霉素V鈉A280nm/A264nm=1、30～1、50Cu2+pH3.8△氯唑青霉素3410.682雙氯青霉素3420.653苯唑青霉素3391.328(nm)2、IR法β-內(nèi)酰胺環(huán)酰胺色譜法（五）1、TLC法對(duì)照品對(duì)照法2、HPLC法三、含量測定(水解)碘量法（一）1.原理水解產(chǎn)物定量過量剩余β-內(nèi)酰胺類ChP反應(yīng)分兩步進(jìn)行:1、水解反應(yīng)(按化學(xué)計(jì)算量進(jìn)行)2、氧化-還原反應(yīng)(無固定得量關(guān)系,受溫度、PH值和時(shí)間等因素影響,應(yīng)嚴(yán)格控制反應(yīng)條件并采用標(biāo)準(zhǔn)品平行對(duì)照測定)第一步第二步V樣空V樣對(duì)照液+緩沖液+碘液+回滴+堿+酸+緩沖液+碘液+回滴V對(duì)空V對(duì)2.方法供試液+緩沖液+碘液+回滴+堿+酸+緩沖液+碘液+回滴空白試驗(yàn)A、消除樣品已降解產(chǎn)物得干擾B、消除樣品中其她消耗碘得雜質(zhì)得干擾C、消除碘揮發(fā)造成得誤差以未經(jīng)水解得樣品作空白測定空白樣品I2Na2S2O3I-I2采用標(biāo)準(zhǔn)品平行對(duì)照測定A、可消除溫度、pH、操作、環(huán)境等條件得影響B(tài)、使本法測定結(jié)果與微生物檢定法一致3.條件(1)弱酸性pH4、5堿↑I2→IO3-+I-酸↑普魯卡因與碘在酸性條件下會(huì)產(chǎn)生復(fù)鹽沉淀(2)溫度24～26℃溫度＞38℃未水解得供試品亦消耗碘(3)水解時(shí)間以水解20分鐘后得耗碘量最大(4)反應(yīng)時(shí)間反應(yīng)20分鐘后,耗碘量隨時(shí)間得變化較小,可減小含量測定得誤差。4.特點(diǎn)(1)靈敏度高樣品:碘=1:8(2)反應(yīng)條件、實(shí)驗(yàn)操作要求高V對(duì)、V對(duì)空V樣、V樣空1份含量加試劑次序、反應(yīng)時(shí)間、滴定速度相同4I2→8I-5.計(jì)算原料汞量法（二）1.原理（水解）青霉素族ChP2.方法醋酸鹽緩沖液pH4.6滴定水解pH4.6滴定樣品以未經(jīng)水解得樣品作空白測定3、討論(1)以第二次滴定突躍為終點(diǎn)電位法指示終點(diǎn)(2)反應(yīng)摩爾比1:1(3)空白試驗(yàn)消除已降解產(chǎn)物干擾(4)優(yōu)點(diǎn)不需標(biāo)準(zhǔn)品4、計(jì)算精密稱取含水量為0、5%得青霉素鈉0、0502g,按藥典方法測定總青霉素含量時(shí),用去硝酸汞滴定液(0、02009mol/L)6、97ml。另精密稱取上述樣品0、5013g,按藥典方法測定降解物含量時(shí),用去硝酸汞滴定液(0、02009mol/L)1、33ml。以干燥品計(jì)算,求樣品中青霉素得含量。(去硝酸汞滴定液得理論濃度為0、02mol/L)homework酸堿滴定法（三）1、原理△(鈉鹽)β-內(nèi)酰胺類ChP△2、方法3、討論(1)水解前先中和溶劑和樣品(2)加熱時(shí)避免吸收CO2△不能使酚酞變紅(3)空白試驗(yàn)校正(消除Na2CO3干擾)(4)特點(diǎn)簡便快速,不適用于有殘留酯得產(chǎn)品（水解）可見-紫外分光光度法(四)1、酸水解法（銅鹽法）(1)原理穩(wěn)定劑JP青霉素族(2)計(jì)算2、硫醇汞鹽法(1)原理（咪唑）青霉素族ChP咪唑(2)方法對(duì)照品法計(jì)算pH9(3)討論a、咪唑催化得水解產(chǎn)率高,硫醇汞鹽穩(wěn)定(≥3h)b、側(cè)鏈有-NH2時(shí),需加醋酐先將其乙?；蟛拍馨l(fā)生上述反應(yīng)pH9(4)特點(diǎn)A、簡便快速B、用標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照,重現(xiàn)性良好,RSD≤1%HPLC法（五）特點(diǎn)快速、高效、靈敏專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好一法多用(鑒別、檢查、含測)第三節(jié)氨基糖苷類抗生素鏈霉素雙氫鏈霉素新霉素卡那霉素慶大霉素巴龍霉素鏈霉素鏈霉胍+鏈霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺

苷元糖鏈霉雙糖胺鏈霉胍鏈霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺鏈霉胍鏈霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺慶大霉素糖苷元絳紅糖胺+脫氧鏈霉胺+加洛糖胺糖絳紅糖胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺絳紅糖胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺慶大霉素C復(fù)合物慶大霉素C1R=HR1、R2=CH3慶大霉素C2R=R2=H

R1=CH3慶大霉素C1aR、R1、R2=H慶大霉素C2aR=CH3R1=R2=H慶大霉素C2bR=R1=HR2=CH3一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)多與硫酸成鹽鏈霉素3個(gè)慶大霉素5個(gè)堿性中心堿性(一)水溶性溶解性（二）鏈霉素pH5～7、5慶大霉素pH2～12穩(wěn)定UV（三）穩(wěn)定性（四）鏈霉素水解產(chǎn)物反應(yīng)（五）坂口反應(yīng)N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)二、鑒別茚三酮反應(yīng)（一）△羥基胺結(jié)構(gòu)N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)（二）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物對(duì)二甲氨基苯甲醛H+紅色(Elson-Morgan反應(yīng))(縮合)紅色對(duì)二甲氨基苯甲醛H+麥芽酚反應(yīng)（三）

鏈霉糖特有反應(yīng)H+分子重排紫紅麥芽酚鏈霉胍特有反應(yīng)（或α-萘酚）8-羥基喹啉坂口反應(yīng)（四）α-萘酚（四）反應(yīng)H+UV法（五）IR法（六）慶大霉素?zé)oUV吸收TLC法（七）三、檢查鏈霉素雜質(zhì)（一）鏈霉素B(甘露糖鏈霉素)方法TLC中得對(duì)照品法(BP)1、來源反應(yīng)中間體對(duì)微生物的活性無明顯差異毒副作用和耐藥性不同發(fā)酵菌種不同工藝差別C組分比例不一致規(guī)定控制各組分得相對(duì)百分含量ChPUSPBPJP慶大霉素C組分的測定（二）λmax=330nm衍生化原理1、1-烷基硫代-2-烷基異吲哚衍生物第四節(jié)四環(huán)素類抗生素ABCD123456789101112四環(huán)素(TC)tetracycline金霉素(CTC)chlortetracycline氯四環(huán)素土霉素(OTC)oxytetracycline氧四環(huán)素多西環(huán)素(DOTC)doxycycline脫氧土霉素美她環(huán)素(METC)metacycline一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)兩性（一）1.與酸、堿均能成鹽2.強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中溶解度↑

酚羥基、烯醇型羥基弱酸性二甲胺基弱堿性吸濕性（二）多含結(jié)晶水與金屬離子生成有色配位化合物Ca2+Mg2+Fe3+Al3+UV（三）與金屬離子絡(luò)合