混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中的免疫耐受機(jī)制

19/22混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中的免疫耐受機(jī)制第一部分免疫耐受的定義 2第二部分混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的原理 4第三部分供體-受體細(xì)胞相互作用 7第四部分細(xì)胞因子和調(diào)節(jié)性分子 9第五部分調(diào)節(jié)性淋巴細(xì)胞的生成 11第六部分細(xì)胞死亡機(jī)制 14第七部分共刺激分子的參與 17第八部分耐受誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)技術(shù) 19

第一部分免疫耐受的定義關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)免疫耐受的定義

1.免疫耐受是免疫系統(tǒng)識(shí)別并對自我抗原或非有害外來抗原產(chǎn)生反應(yīng)減弱或喪失的過程。

2.免疫耐受通過免疫系統(tǒng)細(xì)胞和分子機(jī)制維持，防止針對自身或無害物質(zhì)的自身免疫反應(yīng)。

3.免疫耐受對于維持免疫平衡和防止組織損傷至關(guān)重要，因?yàn)樗兄趨^(qū)分自我和非自我抗原。

中樞耐受

1.中樞耐受發(fā)生在胸腺中，是清除或功能抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞的過程。

2.它包括陽性選擇，允許識(shí)別MHC分子限制性肽抗原的T細(xì)胞成熟，和負(fù)性選擇，清除與自身抗原高親和力結(jié)合的T細(xì)胞。

3.中樞耐受缺陷會(huì)導(dǎo)致自身免疫疾病的發(fā)展，突顯其在自身免疫調(diào)節(jié)中的重要性。

外周耐受

1.外周耐受發(fā)生在胸腺外組織中，是抑制或消除自反應(yīng)免疫細(xì)胞的過程。

2.機(jī)制包括抗原特異性T細(xì)胞的無反應(yīng)性、耐受、細(xì)胞耗竭和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的活性。

3.外周耐受缺陷可以導(dǎo)致自身免疫疾病或移植排斥，表明其對免疫調(diào)節(jié)的至關(guān)重要性。

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞

1.調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）是一類專門抑制免疫反應(yīng)的T淋巴細(xì)胞。

2.它們通過釋放細(xì)胞因子、參與細(xì)胞間接觸和調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞功能來介導(dǎo)免疫抑制。

3.Treg缺陷與自身免疫疾病的發(fā)展有關(guān)，突顯了它們在免疫耐受中的關(guān)鍵作用。

免疫檢查點(diǎn)分子

1.免疫檢查點(diǎn)分子是在免疫細(xì)胞表面表達(dá)的受體，它們在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中起著至關(guān)重要的作用。

2.它們可以抑制免疫細(xì)胞的激活和功能，幫助維持免疫穩(wěn)態(tài)。

3.免疫檢查點(diǎn)阻斷作為癌癥免疫治療的靶點(diǎn)，通過釋放免疫系統(tǒng)針對腫瘤細(xì)胞的作用。

免疫耐受的突破

1.免疫耐受可以通過各種因素被打破，包括組織損傷、炎癥和調(diào)節(jié)性途徑的缺陷。

2.耐受突破會(huì)導(dǎo)致自身免疫疾病或移植排斥，突出其在維持免疫平衡中的脆弱性。

3.了解耐受突破機(jī)制可以為預(yù)防和治療這些疾病提供見解。免疫耐受的定義

免疫耐受是一種生理過程，通過該過程，免疫系統(tǒng)被調(diào)控以識(shí)別并對自身抗原耐受，從而防止對自身組織的致病性免疫反應(yīng)。這種容忍度至關(guān)重要，因?yàn)樗兄诰S持組織完整性和整體健康。

免疫耐受機(jī)制

免疫耐受可通過多種機(jī)制建立，包括：

*克隆刪除：在胸腺內(nèi)，對自身抗原有親和力的T細(xì)胞經(jīng)過負(fù)選擇過程，被清除或功能失調(diào)。

*克隆無能：T細(xì)胞對自身抗原有親和力，但缺乏激活所需的共刺激信號(hào)。

*調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)：Treg是專門的免疫細(xì)胞，可抑制其他免疫細(xì)胞的活性，從而調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。

*抗原遞呈細(xì)胞耐受：抗原遞呈細(xì)胞(APC)不表達(dá)自身抗原，或表達(dá)低水平的抗原，從而限制針對這些抗原的免疫反應(yīng)。

*免疫球蛋白耐受：免疫球蛋白，尤其是IgG，可與自身抗原結(jié)合并阻斷其與免疫細(xì)胞的相互作用。

*旁觀者抑制：當(dāng)一種免疫反應(yīng)對目標(biāo)抗原同時(shí)激活多個(gè)T細(xì)胞克隆時(shí)，一些克隆會(huì)被抑制，防止過度的免疫反應(yīng)。

免疫耐受的重要性

免疫耐受對于防止自身免疫疾病至關(guān)重要。當(dāng)耐受機(jī)制失敗時(shí)，可能會(huì)發(fā)生對自身組織的攻擊，導(dǎo)致多種自身免疫疾病，例如：

*系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)

*類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)

*多發(fā)性硬化癥(MS)

治療中的免疫耐受

理解免疫耐受機(jī)制對于開發(fā)治療自身免疫疾病的新療法至關(guān)重要。免疫耐受療法的目標(biāo)是恢復(fù)對自身抗原的耐受性，從而減輕炎癥和組織損傷。免疫耐受療法可以使用多種方法，包括：

*免疫抑制劑：免疫抑制劑可抑制免疫細(xì)胞活性，從而減少對自身抗原的反應(yīng)。

*抗體療法：抗體可阻斷自身抗原與免疫細(xì)胞的相互作用，或抑制免疫細(xì)胞活性。

*細(xì)胞療法：細(xì)胞療法涉及使用調(diào)節(jié)性T細(xì)胞或其他耐受誘導(dǎo)細(xì)胞來抑制免疫反應(yīng)。

研究免疫耐受機(jī)制和開發(fā)新的免疫耐受療法是治療自身免疫疾病和維持整體健康的關(guān)鍵一步。第二部分混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的原理關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)【混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的原理】

1.混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的概念：

-將供體淋巴細(xì)胞（刺激細(xì)胞）和受體淋巴細(xì)胞（應(yīng)答細(xì)胞）混合培養(yǎng)，觀察應(yīng)答細(xì)胞對刺激細(xì)胞的免疫反應(yīng)。

-反應(yīng)強(qiáng)度反映供體和受體淋巴細(xì)胞之間的組織相容性差異程度。

2.混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的機(jī)制：

-刺激細(xì)胞上的主要組織相容性復(fù)合物（MHC）分子與應(yīng)答細(xì)胞上的T細(xì)胞受體（TCR）相互結(jié)合。

-如果MHC分子與TCR匹配，則激活應(yīng)答細(xì)胞。

-活化的應(yīng)答細(xì)胞增殖分化，產(chǎn)生淋巴因子，引發(fā)細(xì)胞毒效應(yīng)或抗體產(chǎn)生。

3.混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用：

-評估組織移植的相容性：相容性越差，混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)越強(qiáng)。

-研究免疫耐受機(jī)制：通過添加抑制劑或共刺激信號(hào)，可以調(diào)節(jié)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)。

-鑒定免疫細(xì)胞表面的分子標(biāo)記：混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)可以幫助識(shí)別參與免疫識(shí)別的受體和分子。

混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的原理

混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（MLC）是一種體外免疫學(xué)技術(shù)，用于研究T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。其原理基于同種異體兩個(gè)不同個(gè)體的免疫細(xì)胞之間的相互作用。

步驟

MLC過程涉及以下步驟：

1.隔離淋巴細(xì)胞：從兩個(gè)不同個(gè)體（供體和刺激者）中采集靜脈血或脾臟，并分離出淋巴細(xì)胞。

2.刺激：供體淋巴細(xì)胞與刺激者淋巴細(xì)胞混合，通常以1:1的比例混合。

3.培養(yǎng)：混合的淋巴細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)5-7天，在此期間它們會(huì)相互識(shí)別和相互作用。

原理

MLC的基本原理在于，來自供體個(gè)體的T細(xì)胞能夠識(shí)別刺激者個(gè)體的主要組織相容性復(fù)合物(MHC)分子。MHC分子在細(xì)胞表面表達(dá)，呈現(xiàn)屬于該個(gè)體的獨(dú)特肽段。

供體T細(xì)胞具有針對刺激者個(gè)體MHC分子特異性的T細(xì)胞受體(TCR)。當(dāng)TCR與MHC-肽復(fù)合物結(jié)合時(shí)，會(huì)觸發(fā)T細(xì)胞激活：

*釋放細(xì)胞因子（例如白細(xì)胞介素-2），刺激T細(xì)胞增殖和分化。

*誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）的生成，可殺傷表達(dá)刺激者M(jìn)HC分子的細(xì)胞。

反應(yīng)的種類

MLC反應(yīng)可以分類為：

*單向MLC：僅使用一種個(gè)體的供體淋巴細(xì)胞和另一種個(gè)體的刺激者淋巴細(xì)胞。

*雙向MLC：使用來自兩個(gè)個(gè)體的供體和刺激者淋巴細(xì)胞。

應(yīng)用

MLC廣泛用于研究免疫學(xué)中的各種方面，包括：

*器官移植：評估移植后免疫排斥的風(fēng)險(xiǎn)。

*自體免疫?。捍_定針對自身抗原的T細(xì)胞反應(yīng)。

*免疫耐受：研究抗原特異性T細(xì)胞耐受的誘導(dǎo)和維持。

*免疫療法：開發(fā)針對癌癥和其他疾病的細(xì)胞療法。

了解MLC的原理對于理解T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)至關(guān)重要，并且在免疫學(xué)研究和臨床應(yīng)用中具有重大意義。第三部分供體-受體細(xì)胞相互作用關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)【供體-受體細(xì)胞相互作用】

1.供體細(xì)胞與受體細(xì)胞的直接相互作用：

-抗原呈遞細(xì)胞（APC）將供體細(xì)胞來源的抗原呈遞給受體細(xì)胞，激活受體細(xì)胞并誘導(dǎo)免疫反應(yīng)。

-供體細(xì)胞與受體細(xì)胞之間的直接細(xì)胞-細(xì)胞接觸，促進(jìn)細(xì)胞因子和共刺激分子的交換，調(diào)控免疫反應(yīng)。

2.間接介導(dǎo)的相互作用：

-供體細(xì)胞釋放可溶性介質(zhì)，如細(xì)胞因子和趨化因子，影響受體細(xì)胞的激活、分化和功能。

-受體細(xì)胞釋放的調(diào)節(jié)因子，如抑制性細(xì)胞因子和共抑制劑，抑制供體細(xì)胞的免疫應(yīng)答。

【受體細(xì)胞的激活與耐受】

供體-受體細(xì)胞相互作用

概論

在混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（MLC）中，供體和受體淋巴細(xì)胞相互作用是免疫耐受發(fā)展的重要機(jī)制。該相互作用涉及多種細(xì)胞類型和分子信號(hào)，協(xié)調(diào)地調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，防止移植排斥反應(yīng)和自身免疫。

參與的細(xì)胞類型

*供體淋巴細(xì)胞：來自供體組織或器官的淋巴細(xì)胞，包含對受體組織的抗原反應(yīng)的T細(xì)胞。

*受體淋巴細(xì)胞：來自受體組織或器官的淋巴細(xì)胞，包含針對供體抗原的T細(xì)胞。

*抗原呈遞細(xì)胞（APC）：來自受體組織的細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞或樹突狀細(xì)胞，它們可以攝取、加工和呈遞供體抗原給T細(xì)胞。

分子信號(hào)

供體-受體細(xì)胞相互作用受多種分子信號(hào)的調(diào)節(jié)，包括：

*主要組織相容性復(fù)合物（MHC）分子：MHC分子呈遞抗原，供T細(xì)胞識(shí)別。供體和受體的MHC分子不同導(dǎo)致免疫應(yīng)答。

*共刺激分子：如CD28和B7，它們在T細(xì)胞活化中起作用。

*凋亡配體：如FasL和TNFα，它們誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡。

*細(xì)胞因子：如IL-2、IFN-γ和IL-10，它們調(diào)節(jié)T細(xì)胞的增殖、分化和凋亡。

供體-受體細(xì)胞相互作用的階段

MLC中的供體-受體細(xì)胞相互作用可分為以下階段：

1.活化階段：供體T細(xì)胞識(shí)別受體APC呈遞的供體抗原，并被共刺激分子激活。

2.增殖階段：活化的T細(xì)胞增殖，形成效應(yīng)T細(xì)胞。

3.分化階段：效應(yīng)T細(xì)胞分化為輔助性T細(xì)胞（Th）或細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Tc），并分泌細(xì)胞因子。

免疫耐受機(jī)制

供體-受體細(xì)胞相互作用可以通過多種機(jī)制促進(jìn)免疫耐受：

*凋亡：供體抗原識(shí)別導(dǎo)致效應(yīng)T細(xì)胞凋亡，從而限制其增殖和活性。

*抑制性細(xì)胞因子：免疫耐受性細(xì)胞，如調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）和M2型巨噬細(xì)胞，分泌IL-10等抑制性細(xì)胞因子，抑制T細(xì)胞應(yīng)答。

*反調(diào)節(jié)：持續(xù)的抗原暴露會(huì)誘導(dǎo)耐受性T細(xì)胞的生成，它們抑制其他效應(yīng)T細(xì)胞的活化。

*克隆耗竭：供體抗原識(shí)別會(huì)耗盡對特定抗原反應(yīng)的效應(yīng)T細(xì)胞，導(dǎo)致耐受。

意義

供體-受體細(xì)胞相互作用在器官移植和自身免疫等免疫耐受過程中至關(guān)重要。這些相互作用的調(diào)節(jié)失衡會(huì)導(dǎo)致免疫排斥或自身免疫疾病。因此，理解供體-受體細(xì)胞相互作用對于開發(fā)預(yù)防移植排斥反應(yīng)和治療自身免疫性疾病的策略至關(guān)重要。第四部分細(xì)胞因子和調(diào)節(jié)性分子關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)細(xì)胞因子

1.促炎細(xì)胞因子（如IL-2、IFN-γ）：激活T細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化，引發(fā)免疫反應(yīng)。

2.抗炎細(xì)胞因子（如IL-10、TGF-β）：抑制T細(xì)胞活化，促進(jìn)免疫耐受。

調(diào)節(jié)性分子

1.免疫檢查點(diǎn)分子（如PD-1、CTLA-4）：在T細(xì)胞表面表達(dá)，與抗原呈遞細(xì)胞上的配體結(jié)合，抑制T細(xì)胞激活。

2.抑制性受體（如LAG-3、TIM-3）：在T細(xì)胞或自然殺傷細(xì)胞表面表達(dá)，與配體結(jié)合，抑制細(xì)胞活性。

3.調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）：一類抑制性T細(xì)胞，通過釋放抑制性細(xì)胞因子和直接細(xì)胞接觸抑制免疫反應(yīng)。細(xì)胞因子和調(diào)節(jié)性分子

細(xì)胞因子和調(diào)節(jié)性分子在混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLC)中的免疫耐受中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。這些分子負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的反應(yīng)，并有助于建立和維持免疫耐受。

細(xì)胞因子

細(xì)胞因子是免疫系統(tǒng)釋放的小分子蛋白質(zhì)，在細(xì)胞間傳遞信號(hào)。在MLC中，幾種細(xì)胞因子參與調(diào)節(jié)免疫耐受，包括：

*IL-2：IL-2是T細(xì)胞生長因子，對T細(xì)胞的活化和增殖至關(guān)重要。在MLC中，IL-2的缺乏或阻斷可導(dǎo)致免疫耐受。

*IL-10：IL-10是抗炎細(xì)胞因子，抑制T細(xì)胞活化和增殖。在MLC中，IL-10的產(chǎn)生有助于建立免疫耐受。

*轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)：TGF-β是免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，抑制T細(xì)胞活化和分化。在MLC中，TGF-β的產(chǎn)生有助于促進(jìn)免疫耐受。

*干擾素-γ(IFN-γ)：IFN-γ是促炎細(xì)胞因子，激活T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在MLC中，IFN-γ過量會(huì)導(dǎo)致免疫耐受受損。

調(diào)節(jié)性分子

調(diào)節(jié)性分子是一組異質(zhì)細(xì)胞和分子，負(fù)責(zé)抑制免疫反應(yīng)。在MLC中，幾種調(diào)節(jié)性分子參與免疫耐受，包括：

*調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)：Treg是專門抑制免疫反應(yīng)的T細(xì)胞亞群。在MLC中，Treg的存在有助于建立免疫耐受。

*髓系來源抑制細(xì)胞(MDSC)：MDSC是骨髓衍生的細(xì)胞，具有抑制免疫反應(yīng)的能力。在MLC中，MDSC的積累有助于促進(jìn)免疫耐受。

*NK細(xì)胞：NK細(xì)胞是一種天然殺傷細(xì)胞，能夠殺死靶細(xì)胞。在MLC中，NK細(xì)胞的調(diào)節(jié)性功能有助于抑制免疫反應(yīng)。

*PD-1：PD-1是免疫檢查點(diǎn)受體，負(fù)責(zé)抑制T細(xì)胞活化。在MLC中，PD-1的表達(dá)有助于建立免疫耐受。

*CTLA-4：CTLA-4是免疫檢查點(diǎn)受體，抑制T細(xì)胞活化。在MLC中，CTLA-4的表達(dá)有助于促進(jìn)免疫耐受。

細(xì)胞因子和調(diào)節(jié)性分子的作用機(jī)制

細(xì)胞因子和調(diào)節(jié)性分子通過各種機(jī)制發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，包括：

*抑制免疫細(xì)胞活化：細(xì)胞因子如IL-10和TGF-β可抑制T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的活化。

*促進(jìn)細(xì)胞凋亡：細(xì)胞因子如FasL和TNF-α可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞凋亡。

*調(diào)節(jié)細(xì)胞分化：細(xì)胞因子如IFN-γ可促進(jìn)Th1分化，而IL-4可促進(jìn)Th2分化。

*抑制免疫效應(yīng)功能：調(diào)節(jié)性分子如Treg和MDSC可抑制免疫細(xì)胞釋放細(xì)胞因子和執(zhí)行細(xì)胞毒性功能。

*誘導(dǎo)免疫抑制環(huán)境：調(diào)節(jié)性分子如PD-1和CTLA-4可誘導(dǎo)免疫抑制環(huán)境，抑制免疫反應(yīng)。

總之，細(xì)胞因子和調(diào)節(jié)性分子在MLC中的免疫耐受中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。它們通過各種機(jī)制協(xié)調(diào)作用，抑制免疫反應(yīng)并建立和維持免疫耐受。第五部分調(diào)節(jié)性淋巴細(xì)胞的生成關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)【調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表型和功能】

1.調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）是一類具有抑制免疫反應(yīng)功能的特殊T細(xì)胞亞群，在維持免疫穩(wěn)態(tài)和預(yù)防自身免疫疾病中發(fā)揮重要作用。

2.Treg細(xì)胞表面表達(dá)獨(dú)特的分子標(biāo)記，如CD4、CD25、Foxp3等，并分泌抑制性細(xì)胞因子如白介素-10（IL-10）和轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等。

3.Treg細(xì)胞通過細(xì)胞接觸和分泌細(xì)胞因子等機(jī)制抑制免疫反應(yīng)，包括抑制T細(xì)胞活化、誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡、抑制抗體產(chǎn)生和調(diào)控樹突狀細(xì)胞功能等。

【調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的生成】

調(diào)節(jié)性淋巴細(xì)胞的生成

混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLC)中的免疫耐受機(jī)制涉及調(diào)節(jié)性淋巴細(xì)胞的生成，這些細(xì)胞對維持體內(nèi)自穩(wěn)性和防止自身免疫至關(guān)重要。

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的誘導(dǎo)

MLC中Treg的誘導(dǎo)是一個(gè)多步驟過程，涉及以下關(guān)鍵信號(hào)：

抗原特異性刺激：MLC中的混合淋巴細(xì)胞暴露于異基因抗原，觸發(fā)抗原特異性T細(xì)胞的激活和增殖。

共刺激分子：共刺激分子，如CD80和CD86，與T細(xì)胞上的CD28受體結(jié)合，提供額外的信號(hào)，促進(jìn)T細(xì)胞激活。

轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）：TGF-β是MLC中一種重要的調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子，可抑制T細(xì)胞增殖和促進(jìn)Treg分化。

白細(xì)胞介素-2（IL-2）：IL-2是T細(xì)胞增殖和激活所必需的。在MLC中，低濃度的IL-2有利于Treg分化。

?？怂诡^轉(zhuǎn)錄因子（FOXP3）：FOXP3是Treg發(fā)育和功能的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。TGF-β信號(hào)可誘導(dǎo)FOXP3表達(dá)，從而將幼稚T細(xì)胞分化為Treg。

適應(yīng)性Treg的鑒別

MLC中誘導(dǎo)的Treg可分為以下亞群：

*自然Treg（nTreg）：nTreg在胸腺中產(chǎn)生，表達(dá)高水平的CD25和FOXP3。

*適應(yīng)性Treg（iTreg）：iTreg在外周誘導(dǎo)產(chǎn)生，主要表達(dá)FOXP3，而CD25表達(dá)水平較低。

iTreg在MLC中的生成至關(guān)重要，因?yàn)樗试S誘導(dǎo)特異性抗原反應(yīng)的Treg，從而介導(dǎo)免疫耐受。

iTreg誘導(dǎo)機(jī)制

iTreg誘導(dǎo)的機(jī)制包括：

*轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）介導(dǎo)的轉(zhuǎn)換：TGF-β信號(hào)可將幼稚T細(xì)胞分化為iTreg。

*白細(xì)胞介素-2（IL-2）介導(dǎo)的轉(zhuǎn)換：低濃度的IL-2促進(jìn)幼稚T細(xì)胞向iTreg分化。

*樹突狀細(xì)胞（DC）介導(dǎo)的轉(zhuǎn)換：某些DC亞群可以產(chǎn)生TGF-β和IL-2，從而誘導(dǎo)iTreg分化。

iTreg的表征

iTreg的表型特征包括：

*FOXP3表達(dá)：iTreg表達(dá)高水平的FOXP3。

*CD25表達(dá)：iTreg表達(dá)CD25，但水平低于nTreg。

*抑制作用：iTreg具有抑制效應(yīng)T細(xì)胞和B細(xì)胞的功能。

iTreg在免疫耐受中的作用

MLC中誘導(dǎo)的iTreg在維持免疫耐受中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。它們通過以下機(jī)制抑制免疫反應(yīng)：

*細(xì)胞接觸抑制：iTreg通過細(xì)胞接觸抑制效應(yīng)T細(xì)胞和B細(xì)胞的活化和增殖。

*細(xì)胞因子分泌：iTreg分泌免疫抑制細(xì)胞因子，如IL-10和TGF-β，從而抑制免疫反應(yīng)。

*代謝破壞：iTreg消耗必需的營養(yǎng)物質(zhì)，如色氨酸和谷氨酰胺，從而限制效應(yīng)T細(xì)胞的增殖。

總之，MLC中調(diào)節(jié)性淋巴細(xì)胞的生成，特別是iTreg的誘導(dǎo)，對于維持免疫耐受和防止自身免疫至關(guān)重要。這些細(xì)胞通過多種機(jī)制抑制免疫反應(yīng)，確保體內(nèi)自穩(wěn)性和免疫平衡。第六部分細(xì)胞死亡機(jī)制關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)【Fas/FasL途徑】

1.Fas（又稱CD95）是一種細(xì)胞表面死亡受體蛋白，在激活后可傳導(dǎo)凋亡信號(hào)。

2.FasL是一種Fas的配體，與Fas結(jié)合后可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

3.混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中，供者淋巴細(xì)胞表達(dá)Fas，而受者淋巴細(xì)胞表達(dá)FasL，導(dǎo)致供者淋巴細(xì)胞的凋亡和免疫耐受。

【穿孔素/顆粒酶途徑】

混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞死亡機(jī)制

在混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLC)中，供體和受體淋巴細(xì)胞之間的相互作用會(huì)導(dǎo)致多種細(xì)胞死亡機(jī)制，包括：

1.凋亡

*定義：一種受程序控制的細(xì)胞死亡形式，涉及激活細(xì)胞中的caspase家族蛋白水解酶級聯(lián)反應(yīng)。

*MLC中的機(jī)制：供體淋巴細(xì)胞與受體抗原呈遞細(xì)胞(APC)相互作用后，可觸發(fā)激活誘導(dǎo)細(xì)胞死亡(AICD)通路。Fas配體(FasL)和TNF相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)等促凋亡配體表達(dá)上調(diào)，與Fas和TRAIL受體結(jié)合，從而啟動(dòng)caspases級聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。

*特征：細(xì)胞體積縮小、細(xì)胞質(zhì)濃縮、染色質(zhì)濃縮和核碎裂成稱為凋亡小體的特征性圓形碎片。

2.細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)介導(dǎo)的細(xì)胞毒性

*定義：由CTL執(zhí)行的一種免疫介導(dǎo)的細(xì)胞死亡形式，涉及通過穿孔素和顆粒酶的釋放來誘導(dǎo)細(xì)胞溶解。

*MLC中的機(jī)制：受體抗原呈遞細(xì)胞上MHC-I分子與供體T細(xì)胞受體的結(jié)合，導(dǎo)致CTL活化和穿孔素和顆粒酶的釋放。這些分子穿透受體細(xì)胞的細(xì)胞膜，導(dǎo)致細(xì)胞溶解和死亡。

*特征：細(xì)胞體積增加、膜完整性喪失、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)溶解和細(xì)胞核裂解。

3.抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)

*定義：一種由抗體介導(dǎo)的細(xì)胞死亡形式，涉及抗體結(jié)合靶細(xì)胞抗原，從而使細(xì)胞毒性效應(yīng)細(xì)胞（通常為自然殺傷(NK)細(xì)胞）可以識(shí)別和殺傷靶細(xì)胞。

*MLC中的機(jī)制：受體淋巴細(xì)胞釋放的抗體與供體淋巴細(xì)胞上的抗原結(jié)合。NK細(xì)胞與具有結(jié)合抗體的Fc受體結(jié)合，從而觸發(fā)細(xì)胞溶解和死亡。

*特征：類似于CTL介導(dǎo)的細(xì)胞毒性，但細(xì)胞膜破裂更慢。

4.自然殺傷(NK)細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性

*定義：一種由NK細(xì)胞執(zhí)行的細(xì)胞死亡形式，涉及非特異性識(shí)別和殺傷受損或感染的細(xì)胞。

*MLC中的機(jī)制：NK細(xì)胞通過識(shí)別供體淋巴細(xì)胞上的缺失自我MHC-I分子來激活。激活的NK細(xì)胞釋放穿孔素和顆粒酶，誘導(dǎo)細(xì)胞溶解和死亡。

*特征：類似于CTL介導(dǎo)的細(xì)胞毒性，但受體細(xì)胞可能不表達(dá)MHC-I分子。

5.NETosis

*定義：一種由中性粒細(xì)胞執(zhí)行的細(xì)胞死亡形式，涉及胞質(zhì)網(wǎng)(NET)的釋放，NET是DNA纖維和抗菌肽的復(fù)雜結(jié)構(gòu)。

*MLC中的機(jī)制：尚不完全清楚，但可能涉及促炎細(xì)胞因子（如IL-1β和TNF-α）的釋放以及ROS的產(chǎn)生。

*特征：中性粒細(xì)胞死亡并釋放網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)富含DNA和抗菌肽。

凋亡的分子調(diào)控

凋亡的分子調(diào)控涉及多種信號(hào)通路和調(diào)節(jié)蛋白，包括：

*促凋亡蛋白：例如FasL、TRAIL、胱天蛋白酶3(caspase-3)和caspase-9。

*抗凋亡蛋白：例如Bcl-2家族成員（例如Bcl-2和Bcl-xL），它們通過阻斷caspases級聯(lián)反應(yīng)來抑制凋亡。

*凋亡信號(hào)通路：例如本征通路（涉及線粒體損傷和細(xì)胞色素c釋放）和外在通路（涉及促凋亡配體和受體的相互作用）。

了解細(xì)胞死亡機(jī)制在MLC中的調(diào)節(jié)對于闡明器官移植、自身免疫性疾病和癌癥免疫等免疫相關(guān)疾病的免疫耐受機(jī)制至關(guān)重要。第七部分共刺激分子的參與關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)【共刺激分子的參與】

1.共刺激分子在混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLC)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，它們提供額外信號(hào)，決定T細(xì)胞活化或耐受的命運(yùn)。

2.B7分子和CD28分子家族是MLC中最重要的共刺激分子，它們之間的相互作用提供正向信號(hào)，促進(jìn)T細(xì)胞活化。

3.CTLA-4和PD-1等抑制性共刺激分子向T細(xì)胞傳遞負(fù)向信號(hào)，抑制T細(xì)胞活化并促進(jìn)耐受。

【免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞的參與】

共刺激分子的參與

共刺激分子是免疫細(xì)胞表面表達(dá)的蛋白質(zhì)，在T細(xì)胞激活和耐受中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。在混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLC)中，共刺激分子的相互作用對于建立免疫耐受至關(guān)重要。

共刺激分子的類型和作用

參與MLC耐受的常見共刺激分子包括：

*CD28：T細(xì)胞上的共刺激受體，與抗原呈遞細(xì)胞(APC)上的B7-1(CD80)和B7-2(CD86)配體結(jié)合。CD28信號(hào)傳導(dǎo)可促進(jìn)T細(xì)胞激活和增殖。

*CTLA-4：T細(xì)胞上的共刺激抑制受體，也與B7-1和B7-2結(jié)合。CTLA-4信號(hào)傳導(dǎo)可抑制T細(xì)胞活化并促進(jìn)耐受。

*ICOS：T細(xì)胞上的共刺激受體，與B7-H2(ICOS-L)配體結(jié)合，參與T細(xì)胞輔助細(xì)胞(Th)分化和記憶T細(xì)胞形成。

*PD-1：T細(xì)胞上的共刺激抑制受體，與PD-L1和PD-L2配體結(jié)合，參與T細(xì)胞耗竭和耐受。

共刺激分子的相互作用在MLC耐受中的作用

在MLC中，共刺激分子的相互作用通過以下機(jī)制建立免疫耐受：

CD28/B7信號(hào)傳導(dǎo)的調(diào)節(jié)：CD28/B7信號(hào)傳導(dǎo)的平衡對于T細(xì)胞激活和耐受至關(guān)重要。在正常條件下，CD28信號(hào)傳導(dǎo)占主導(dǎo)地位，導(dǎo)致T細(xì)胞激活。然而，在耐受誘導(dǎo)條件下，CTLA-4通過與B7配體競爭結(jié)合來抑制CD28信號(hào)傳導(dǎo)，從而抑制T細(xì)胞活化。

誘導(dǎo)T細(xì)胞耗竭：PD-1與PD-L1/PD-L2的結(jié)合可誘導(dǎo)T細(xì)胞耗竭，這是一種功能性衰竭狀態(tài)。在MLC耐受中，PD-1信號(hào)傳導(dǎo)可抑制T細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子產(chǎn)生和細(xì)胞毒性。

促進(jìn)轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)的產(chǎn)生：共刺激分子相互作用可促進(jìn)TGF-β的產(chǎn)生，這是一種免疫抑制性細(xì)胞因子。TGF-β可通過抑制T細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)分化來促進(jìn)免疫耐受。

影響T細(xì)胞分化：共刺激分子的相互作用可以影響T細(xì)胞分化。ICOS信號(hào)傳導(dǎo)可促進(jìn)Th2和Tfh細(xì)胞的分化，而PD-1信號(hào)傳導(dǎo)可抑制Th1和Th17細(xì)胞的分化。這種分化影響可以調(diào)節(jié)MLC中的免疫應(yīng)答并促進(jìn)耐受。

結(jié)論

共刺激分子的相互作用在混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中的免疫耐受中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。CD28和CTLA-4之間的平衡、PD-1信號(hào)傳導(dǎo)的誘導(dǎo)、TGF-β的產(chǎn)生和T細(xì)胞分化的影響共同建立了免疫耐受，防止移植排斥和自身免疫。第八部分耐受誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)耐受誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)

混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（MLC）中誘導(dǎo)免疫耐受的實(shí)驗(yàn)技術(shù)包括以下幾種：

1.抗體阻斷

*使用針對共刺激分子的抗體，例如抗-CD80/CD86或抗-CD28，阻斷共刺激信號(hào)傳導(dǎo)。

*阻斷共刺激信號(hào)可抑制T細(xì)胞活化，防止效應(yīng)T細(xì)胞的分化。

2.單核細(xì)胞/樹突細(xì)胞耗盡

*用抗-CD14或抗-CD11c抗體聯(lián)合免疫磁珠技術(shù)耗盡單核細(xì)胞或樹突細(xì)胞。

*單核細(xì)胞和樹突細(xì)胞是抗原呈遞細(xì)胞，耗盡它們可減少抗原呈遞，從而降低T細(xì)胞活化。

3.Treg細(xì)胞添加

*添加外源性Treg細(xì)胞或促進(jìn)Treg細(xì)胞分化的細(xì)胞因子，例如IL-10或TGF-β。

*Treg細(xì)胞具有