D-二聚體的檢測(cè)及臨床意義之歐陽(yáng)治創(chuàng)編

歐陽(yáng)治創(chuàng)編2021.03.10歐陽(yáng)治創(chuàng)編2021.03.10歐陽(yáng)治創(chuàng)編2021.03.10歐陽(yáng)治創(chuàng)編2021.03.10D-二聚體的檢測(cè)及臨床意義時(shí)間2021.03.10創(chuàng)作：歐陽(yáng)治近年由于血栓性疾病的增多，檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)即時(shí)檢驗(yàn)(POCT)在免疫測(cè)定技術(shù)方面，特別是在出凝血和血栓性疾病的研究上取得了重大的進(jìn)展。D-二聚體的檢測(cè)方法，從傳統(tǒng)的定性試驗(yàn)，變?yōu)楹?jiǎn)單快速準(zhǔn)確定量的即時(shí)檢驗(yàn)。金標(biāo)全定量快速檢測(cè)對(duì)于血栓性疾病的及時(shí)準(zhǔn)確診斷、以及對(duì)溶栓治療的療效監(jiān)測(cè)，是必不可少的重要指標(biāo)。一、D-二聚體的形成正常人纖溶酶和抑制酶之間保持了動(dòng)態(tài)平衡，使血液循環(huán)能正常進(jìn)行。人體內(nèi)的纖溶系統(tǒng)，對(duì)保持血管壁的正常通透性；維持血液的流動(dòng)狀態(tài)和組織修復(fù)，起著重要作用。為維護(hù)正常生理狀態(tài)，在外傷或血管受損的情況下，血栓的形成可防止血液從損傷的血管中流失。病理狀態(tài)下，機(jī)體發(fā)生凝血時(shí)，凝血酶作用于纖維蛋白，轉(zhuǎn)變?yōu)榻宦?lián)纖維蛋白，同時(shí)纖溶系統(tǒng)被激活，降解纖維蛋白形成各種碎片。γ鏈能把二個(gè)含D片斷的碎片連接起來(lái)，形成D-二聚體。D-二聚體水平的上升，代表血塊在血管循環(huán)系統(tǒng)中形成，急性血栓形成的一個(gè)敏感的標(biāo)記物。但不具特異性;下列因素如外科手術(shù)、創(chuàng)傷、感染、發(fā)炎、懷孕、產(chǎn)后等，也會(huì)導(dǎo)致凝血酶的產(chǎn)生使D-D水平的上升。D-二聚體的升高反映了體內(nèi)存在著凝血及纖溶活性增強(qiáng)的重要分子標(biāo)志物。因此它既可反映體內(nèi)存在著血栓或繼續(xù)形成的狀況，又可反映體內(nèi)纖溶活性增強(qiáng)的指標(biāo)，因?yàn)槔w維蛋白降解產(chǎn)物中，唯有D-二聚體可反映血栓形成后的溶栓活性，對(duì)于臨床血栓性疾病的診斷和溶栓治療有著極其重要的價(jià)值。二、D-二聚體檢測(cè)的方法學(xué)的進(jìn)展1、三P試驗(yàn)：FDP碎片X和可溶性纖維蛋白單體FM復(fù)合物的定性試驗(yàn)。缺點(diǎn)：敏感性差，DIC陽(yáng)性率30-60%，試驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)，干擾因素多，采血不順，溶血均可影響結(jié)果，只能定性不能定量。2、膠乳凝集法：簡(jiǎn)單快速缺點(diǎn)：敏感性低，定性或定量倍比稀釋，費(fèi)試劑，重復(fù)性差。3、ELISA法：敏感性高，能定量缺點(diǎn)：操作煩，時(shí)間長(zhǎng)，無(wú)法滿足急診需求。4、免疫滲濾膠體金顯色反應(yīng)法：采用同種單克隆抗體夾心，即以包被的抗體捕獲血漿中抗原（D-二聚體）加入偶聯(lián)有膠體金的同種抗體顯色?？贵w特異性高，可與含D-二聚體的多種片斷結(jié)合可提高試驗(yàn)的敏感度。特點(diǎn)：定量報(bào)告，快速簡(jiǎn)便，敏感性高。測(cè)試范圍：0.1—5mg/L正常參考值：<0.3mg/L，接近或>0.3mg/L應(yīng)考慮疾病狀態(tài)。使用說(shuō)明：(1)血漿未經(jīng)徹底離心，血漿中含有白細(xì)胞、血小板、高血脂或高粘度血漿，這些物質(zhì)停留在檢測(cè)板的膜表面，導(dǎo)致滲濾減慢時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可能出現(xiàn)假性高值，應(yīng)徹底離心(4000轉(zhuǎn)20分鐘為宜)，并小心吸取血漿。(2)各個(gè)不同廠家的D-二聚體試劑盒的正常參考范圍值也不一樣，有的以＜0.3mg/L為正常，而有的試劑盒以＜0.6mg/L為正常。此外有的以PEU單位模式報(bào)告，有的以mg/L的模式報(bào)告，其值正好相差一半。所以在評(píng)價(jià)D-二聚體結(jié)果時(shí)應(yīng)注意上述問(wèn)題。三、D-二聚體檢測(cè)的臨床應(yīng)用D-二聚體增高提示了與體內(nèi)各種原因引起的血栓性疾病相關(guān)。同時(shí)也說(shuō)明了纖溶活性的增強(qiáng)；臨床上常見(jiàn)于彌慢性血管內(nèi)凝血（DIC）、深靜脈血栓（DVT）、肺栓塞（PE）、急性心肌梗塞、腦梗塞、惡性腫瘤、卵巢癌、肺癌、敗血癥、肝病、妊高征孕婦、先兆子癇、燒傷、外科手術(shù)、創(chuàng)傷和膿毒血癥等均可使D-二聚體升高，但是D-二聚體檢測(cè)的升高并不能說(shuō)明血栓形成的原因及位置，必須結(jié)合臨床和其他檢測(cè)分析結(jié)果。1、DIC（休克、系統(tǒng)感染、外傷、先兆子癇、惡性疾病和燒傷等）的并發(fā)癥：血液在全身微小血管內(nèi)廣泛性凝固，形成以血小板和纖維蛋白為主要成分的微血栓。此過(guò)程消耗了大量的血小板和凝血因子，并通過(guò)激活途徑激活了纖溶系統(tǒng)。微血栓中交聯(lián)纖維蛋白被纖溶酶降解而產(chǎn)生大量高于正常百倍的D-二聚體。與其他診斷DIC的指標(biāo)相比較，D-二聚體是唯一直接反映凝血酶和纖溶酶生成的理想指標(biāo)；診斷DIC的特異性也早于其他指標(biāo)。2、深靜脈血栓（DVT）的篩查：血漿D-二聚體陰性可排除DVT的可能性。造影證實(shí)DVT者D-二聚體100%陽(yáng)性，可做溶栓治療和肝素抗凝的用藥指導(dǎo)及療效觀察。靜脈栓塞是臨床上最常見(jiàn)的靜脈疾病，臨床醫(yī)生無(wú)法僅僅根據(jù)其臨床癥狀作出診斷。靜脈造影是診斷靜脈栓塞的黃金標(biāo)準(zhǔn)，它是創(chuàng)傷性檢查，費(fèi)用高，而靜脈造影本身具有引發(fā)深靜脈栓塞或其它并發(fā)癥的危險(xiǎn)性。靜脈血栓栓塞癥(VTE)的危險(xiǎn)因素較低的危險(xiǎn)因素中度危險(xiǎn)因素高危險(xiǎn)因素臥床>3日膝關(guān)節(jié)手術(shù)骨折（髖或腿）長(zhǎng)時(shí)間的處于靜止?fàn)顟B(tài)（如乘車或乘長(zhǎng)途飛機(jī)）中央靜脈狹窄髖或膝復(fù)位年齡增大惡性腫瘤、化療大手術(shù)腹腔鏡外科充血性心衰、呼衰大創(chuàng)傷減肥荷爾蒙代替物口服避孕藥脊髓損傷懷孕/產(chǎn)后偏癱性中風(fēng)靜脈曲張懷孕/產(chǎn)后曾患VTE血栓形成傾向D-二聚體測(cè)試，配合臨床評(píng)估，可以快速、安全的排除30-50%懷疑DVT/PE的病例，可節(jié)省醫(yī)院的成本，減少不必要的影象診斷及抗凝血治療，減少病人留院的時(shí)間，改善病人的情況，減少入侵性診斷的危險(xiǎn)，減少因不必要抗凝血治療而引起的出血。D-二聚體可反映血栓大小的變化。含量再升高，預(yù)示血栓再發(fā)生。治療期間持續(xù)較高，提示血栓大小無(wú)變化，說(shuō)明治療無(wú)效。陳舊性血栓D-D不增高。3、肺栓塞病人（PE）：PE是一種較常見(jiàn)的潛在致命的疾病，尤其多見(jiàn)于血液病、心臟病和外科手術(shù)病人。PE臨床表現(xiàn)差異極大且缺乏特異性（從無(wú)任何表現(xiàn)到猝死）、常規(guī)檢查無(wú)法獲得直接證據(jù)，加上對(duì)該病的認(rèn)識(shí)不足，常造成漏診或誤診。及時(shí)治療依賴早期診斷。對(duì)于呼吸困難、胸悶、咳嗽、咯血，昏厥的患者，尤其是近期有外傷，手術(shù)及長(zhǎng)途旅行史；既往患有深靜脈血栓，應(yīng)考慮是否存在PE。D-二聚體測(cè)定是PE必備的篩查方法；<0.5mg/L可除外PE。D-二聚體測(cè)定在急性肺栓塞的篩選中具有重要作用，且操作方法簡(jiǎn)便、設(shè)備要求不高，縣市級(jí)醫(yī)院均可開(kāi)展此項(xiàng)檢測(cè)。我國(guó)目前應(yīng)用D-二聚體篩選急性肺栓塞尚處于起步階段，對(duì)其在急性肺栓塞的診斷價(jià)值中積累的經(jīng)驗(yàn)仍然較少，特別是急診D-二聚體的檢測(cè)更是剛剛起步，有待于進(jìn)一步積累臨床資料，更好地發(fā)揮其在急性肺栓塞中的診斷作用。4、婦科病人及先兆子癇：Trafatter報(bào)告204例先兆子癇婦女中79例D-二聚體增高，而88例正常孕婦全正常。該指標(biāo)對(duì)妊高征患者高凝狀態(tài)的診斷、療效觀察及預(yù)后判斷有重要意義。D-D檢測(cè)排除妊娠VTE:隨著妊娠期的發(fā)展，孕婦的D-D值隨之逐漸升高，可高至基礎(chǔ)值的3-4倍。若妊娠期發(fā)生VTE，干擾D-D排除VTE的有效性。若D-D結(jié)果陰性，仍有排除VTE的價(jià)值。5、肝臟疾?。篋-二聚體含量明顯增高并與肝病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。惡性腫瘤伴有D-二聚體增高，提示血栓形成及栓塞，對(duì)于病情判斷及治療有重要意義。6、血管疾?。翰环€(wěn)定型心絞痛病人比急性心絞痛高、急性心肌梗死（AMI）、腦梗塞溶栓治療時(shí)，D-二聚體增高對(duì)指導(dǎo)溶栓治療很有意義。7、溶血栓治療的監(jiān)測(cè)：D-二聚體是溶栓藥物治療監(jiān)控和療效觀察的指標(biāo)。應(yīng)用溶栓藥物后D-二聚體明顯升高。若達(dá)到療效，該指標(biāo)在升高后很快下降；如果二聚體升高后持續(xù)維持在一定程度高水平則提示溶栓藥物劑量不足。纖維蛋白降解產(chǎn)物中，唯有D-二聚體可反映血栓形成后的溶栓活性。因此定量檢測(cè)D-二聚體可以反映藥物溶栓的效果。應(yīng)用溶血栓藥物（SK、UK、rt-PA等）溶解新鮮血栓，其出血的發(fā)生率高達(dá)5％～30％，建議Fg維持在1.2～1.5g/L、TT維持在正常對(duì)照的1.5～2.5倍，F(xiàn)DPs維持在300～400ug/L。8、交聯(lián)衍生物D-二聚體水平的影響◆血栓的原始大小（需增加部分解釋，就影響狀況進(jìn)行闡述）◆纖溶速率（需增加部分解釋，就影響狀況進(jìn)行闡述）◆血栓形成時(shí)間，腎功正常時(shí)，循環(huán)中的D-二聚體半衰期約6h；有活躍的纖維蛋白降解和纖溶酶活化；血栓的位置是否被包裹。（需增加部分解釋，就影響狀況進(jìn)行闡述）四，D-二聚體臨床應(yīng)用時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題1、D-二聚體是一項(xiàng)陰性排除試驗(yàn)。作為一種無(wú)創(chuàng)性檢查手段，在急性肺栓塞(PE)、深靜脈栓塞(DVT)、血管內(nèi)彌漫性凝血（DIC）排除診斷中有十分重要的價(jià)值，它是一項(xiàng)陰性排除試驗(yàn)。在任何情況下D-二聚體測(cè)定值大于試劑盒推薦的CutOff值，都不能簡(jiǎn)單的作為急性肺栓塞、深靜脈栓塞、血管內(nèi)彌漫性凝血的唯一確診依據(jù)，必須結(jié)合臨床情況綜合分析。在腦梗死、肺栓塞、彌漫性血管內(nèi)凝血、急性靜脈血栓形成時(shí)升高，從D-二聚體的檢測(cè)目標(biāo)而言，這些歸屬陽(yáng)性升高。但是只要機(jī)體血管內(nèi)有活化的血栓形成及纖維溶解活動(dòng)，D-二聚體就會(huì)升高，比如手術(shù)、腫瘤、感染及組織壞死等均可導(dǎo)致D-二聚體升高。特別對(duì)８０歲以上人群及住院患者，因患感染性等疾病易引起凝血異常而導(dǎo)致D-二聚體升高的病人應(yīng)注意結(jié)合臨床情況綜合分析，國(guó)際上D-二聚體檢測(cè)的特異性一般為50％左右。2、國(guó)內(nèi)外無(wú)D-二聚體統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)品。D-二聚體是血液中纖維蛋白降解產(chǎn)物，其大小和抗原決定簇不可能完全相同，因此D-二聚體既沒(méi)有國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)內(nèi)外均無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)品，也無(wú)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品。不同公司的企業(yè)D-二聚體標(biāo)準(zhǔn)品也不能相互通用。因此該試驗(yàn)不同廠家試劑所測(cè)的D-D具體數(shù)據(jù),不可能互相獲得一致的結(jié)果也就可以理解了。但是基本的要求是陰性的排除值和陽(yáng)性的確定值應(yīng)總體符合。有關(guān)的權(quán)威論述如下：FACT（FibrinAssayComparisonTrial有關(guān)纖維蛋白化驗(yàn)的國(guó)際專職評(píng)估和研究機(jī)構(gòu)）以下由權(quán)威的(FACT)研究組發(fā)表的原文摘錄：“AlthoughD-dimerhasgainedwidespreadclinicaluseasaparameterfordetectionofinvivofibrinformation,thestandardizationissuehasnotbeenresolvedandreferencepreparationsand/orguidelineshavenotbeendistributed.”中文翻譯：雖然D-二聚體作為纖維蛋白形成的一項(xiàng)指標(biāo)，在臨床巳廣泛使用，但其標(biāo)準(zhǔn)化問(wèn)題至今未解決，也無(wú)標(biāo)準(zhǔn)品，甚至有關(guān)參照品制備的指導(dǎo)性文件也沒(méi)有公布過(guò)?！訲hrombHaemost2001;85:671-83、目前D-二聚體試劑溯源標(biāo)準(zhǔn)是如何建立的？D-DDOT試劑標(biāo)準(zhǔn)的建立，D-二聚體試劑盒只能向同類公認(rèn)可靠的D-二聚體測(cè)定方法或試劑盒靠攏。D-DDOT研發(fā)時(shí)用挪威NycoCard二聚體試劑盒測(cè)定患者樣品，從中選取高值D-Dimer陽(yáng)性樣品混合，用此NycoCard二聚體試劑盒將這高值Dimer混合血漿系列稀釋后定標(biāo)，作溯源標(biāo)準(zhǔn)，建立D-DDOT試劑盒的二聚體標(biāo)準(zhǔn)曲線、企業(yè)D-二聚體標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品。本項(xiàng)目方法轉(zhuǎn)移靠混合高值血漿的做法符合國(guó)際的通常規(guī)定。有關(guān)的權(quán)威論述如下：FACT文獻(xiàn)摘錄：原文：“ThebestconformityisachievedbytheuseofpooledplasmasamplesfrompatientswithhighlevelsofD-dimerantigeninplasma.”“Asanalternativetopooledplasmasamples,D-dimerantigenassaysmaybecalibratedwithinvitropreparationscontainingpredominantlyH.MW-fibrinoligomers.”中文翻譯：使用病人高值D-dimer混合血漿可取得最好的一致性，作為混合血漿樣品的代用品，D-二聚體檢測(cè)可以使用體外制備的標(biāo)準(zhǔn)品校正，體外制備的標(biāo)準(zhǔn)品主要含高分子量纖維蛋白的低聚物?！裕篢hrombHaemost2001;85671－84、常見(jiàn)品牌D-二聚體試劑盒的檢測(cè)量程：一些品牌D-二聚體試劑盒,為了保證陰性排除判斷的敏感性和陽(yáng)性確定結(jié)果的準(zhǔn)確性，往往把檢測(cè)量程定在0.1—5mg/L,這一設(shè)計(jì)除了滿足和保證區(qū)分陰陽(yáng)性區(qū)域的敏感性外,更重要的是這種檢測(cè)量程設(shè)計(jì)已能滿足大部分血栓病人的輔助診斷和溶栓指導(dǎo)的參考。羅氏金標(biāo)層析數(shù)碼定量系統(tǒng)，CARDIACD-Dimer，測(cè)量范圍：0.1--4.0μg/mL(0.1-4.0mg/L)法國(guó)Stago0.22—4μg/ml(FEU)，0.22mg—4.0mg/L生物梅里埃D-二聚體測(cè)量范圍：45-10,000ng/ml(FEU)（注：FEU→mg/L＝mg/L÷2，＝0.025-5.0mg/L。）5、幾個(gè)常見(jiàn)品牌D-二聚體試劑主要檢測(cè)數(shù)據(jù)見(jiàn)下表幾個(gè)品牌D-D二聚體試劑比較試劑名稱方法學(xué)報(bào)告單位正常值檢測(cè)范圍檢測(cè)時(shí)間奧普D-DDOT金標(biāo)免疫法mg/L<0.3mg/L0.1-5mg/L3minRoche(羅氏）液體試劑717生化儀FEU<0.5ug/ml(<0.5mg/L)0.15-9ug/ml(FEU)4.5mg/L10minStago法國(guó)專用測(cè)定儀FEU<0.4ug/ml(0.4mg/L)0.22-4ug/ml0.22-4mg/L(FEU)7minOrganonTeknika液體試劑FEU<0.6ug/ml(<0.4mg/L)0.2-4ug/ml0.2-4mg/L(FEU)12minBiomerieux法國(guó)梅里埃酶免法FEU<500ng/ml(0.5mg/L)45-10000ng/ml(FEU)0.045-10mg/L35min6、FEU單位和mg/L單位的報(bào)告模式及換算方法：纖維蛋白等值單位(FibrinogenEquivalentUnitsFEU)這是目前一些測(cè)定D-二聚體儀器和試劑盒所用的報(bào)告模式。FEU和mg/L之間的換算，F(xiàn)EU1ng/mlD-dimer=2ng/FEU/ml，即FEU;1ng/mlD-dimer=2ng/ml的非FEU單位。例如如果以D-二聚體正常值＜0.3mg/L，換算成FEU結(jié)果需乘2即為0.6mg/LFEU。7、奧普D-二聚體試劑的特點(diǎn)：△保存期長(zhǎng)，穩(wěn)定性好。12個(gè)月的失效期，較常見(jiàn)同類試劑的6個(gè)月失效期長(zhǎng)了一半。更方便客戶應(yīng)用?！麝幮越Y(jié)果排除試驗(yàn)的準(zhǔn)確性和鑒別排除假陽(yáng)性結(jié)果的臨床符合性滿意。本試劑盒在臨床評(píng)估時(shí)發(fā)現(xiàn)6例D-D結(jié)果全正常范圍(5例0.1，1例0.2mg/L),而用進(jìn)口試劑測(cè)數(shù)在值在0.3-1.1mg/L之間(0.3、0.3、0.4、0.4、0.9、1.1mg/L)，臨床追蹤證實(shí)該6例陽(yáng)性結(jié)果的病人為非血栓病人?！鱑2愛(ài)國(guó)者POCT即時(shí)檢驗(yàn)儀器，可快速測(cè)定CRP、HCG、ALB、D-dimer四個(gè)項(xiàng)目，一機(jī)多用,有很好的配套效應(yīng)。D-DDOT國(guó)產(chǎn)試劑的價(jià)格優(yōu)勢(shì)，與進(jìn)口試劑等效的產(chǎn)品質(zhì)量。8、對(duì)D-D檢測(cè)中可能出現(xiàn)的假陰性和假陽(yáng)性的評(píng)價(jià)：D-D檢測(cè)的陰性患者中(假陰性)，仍有極少數(shù)患者(<2%)伴靜脈血栓，其原因：（1）血栓體積很小/遠(yuǎn)端小血栓；（2）放射線/超聲檢查出現(xiàn)假陽(yáng)性；（3）臨床表現(xiàn)與標(biāo)本采集時(shí)間相隔太長(zhǎng)；（4）纖溶活性降低因?yàn)镈-D增高所謂的假陽(yáng)性，常見(jiàn)于老年人、孕婦、癌癥、DIC、肝病、炎癥、創(chuàng)傷、手術(shù)、冠心病等均會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性。9、不同型號(hào)D-二聚體試劑比對(duì)檢測(cè)評(píng)估應(yīng)掌握的基本原則：D-二聚體試劑不同于其它試劑,既沒(méi)有國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)內(nèi)外均無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)品，也無(wú)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、不同公司的企業(yè)D-二聚體標(biāo)準(zhǔn)品也不能相互通用。生物梅里埃在宣傳資料中是這樣表達(dá)的：“D-dimer由于沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，不同試劑的測(cè)試可有不同的結(jié)果。不同商品D-二聚體試劑盒定量值各不相同,這是因?yàn)樵噭﹩慰寺】贵w的來(lái)源/免疫反應(yīng)性，基質(zhì)效應(yīng)，干憂因素、定標(biāo)物的種類不同等多因素，測(cè)試X試劑的結(jié)果不一定能與Y測(cè)試的試劑比較”，每種D-D試劑通過(guò)充份的臨床驗(yàn)證,通過(guò)觀察陰性結(jié)果排除試驗(yàn)的準(zhǔn)確性和真陽(yáng)性,以及鑒別排除假陽(yáng)性結(jié)果的臨床符合性來(lái)評(píng)估試劑優(yōu)劣。這對(duì)于傳統(tǒng)用二種數(shù)據(jù)的比對(duì)試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)試劑的方法不同,我們必須接受國(guó)際上通行的做法，來(lái)更新我們的觀念。D-二聚體檢測(cè)倍受關(guān)注的原因分析中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)學(xué)會(huì)主任、解放軍301醫(yī)院主任、叢玉隆教授認(rèn)為：隨著生化、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)飛速發(fā)展；止血、凝血和血栓疾病的研究取得了巨大進(jìn)步，積極開(kāi)展血栓與止血試驗(yàn)檢測(cè)，推廣臨床應(yīng)用，無(wú)疑具有重要意義。血栓性疾病的增多，診斷、治療、監(jiān)測(cè)的臨床需要。檢測(cè)方法學(xué)的進(jìn)步、從定性到定量，正確快速。D-二聚體檢測(cè)試劑盒臨床研究總結(jié)報(bào)告（摘要）臨床研究評(píng)估單位：上海中醫(yī)藥大學(xué)岳陽(yáng)醫(yī)院上海閔行區(qū)中心醫(yī)院一、材料和方法儀器和試劑：比對(duì)評(píng)估系統(tǒng)所用的儀器試劑，均為挪威原裝進(jìn)口的NycoCardD-二聚體測(cè)定儀和試劑，與上海奧普生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的U2金標(biāo)斑點(diǎn)法定量讀數(shù)儀及試劑按各自操作說(shuō)明作比對(duì)測(cè)定。標(biāo)本采集：疑似病例組均為臨床送檢D-二聚體血漿，共135份（閔行醫(yī)院85例，岳陽(yáng)醫(yī)院50例）。對(duì)照組均為健康體檢人群共100例（閔行醫(yī)院40例，岳陽(yáng)醫(yī)院60例）。該組為隨機(jī)體檢人群，未進(jìn)行挑選，年齡分布在16-85歲，平均年齡為45.4歲。二、結(jié)果1、疑似病例組以比對(duì)法結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，共有88例陽(yáng)性，46例陰性，1例乳糜血有干擾不作統(tǒng)計(jì)。在陽(yáng)性組（88例）中，D-DDOT檢測(cè)出82例陽(yáng)性，6例陰性，陽(yáng)性符合率為93.2％（82/88），病例追蹤不符合的6例，結(jié)果支持D-DDOT的陰性結(jié)果。疑似病例組比對(duì)法陰性的46例中，D-DDOT檢測(cè)均陰性，陰性符合率100％。陰陽(yáng)不符的6例均為比對(duì)試劑（+），而D-DDOT(-)，見(jiàn)表1。對(duì)該陰陽(yáng)不符的6例進(jìn)行臨床病例追蹤，結(jié)果顯示該6例病例均無(wú)深靜脈血栓、肺栓塞和血管內(nèi)彌漫性凝血的相關(guān)癥狀和診斷，病例追蹤結(jié)果支持D-DDOT的可靠性，在兩家醫(yī)院臨床研究中D-DDOT特異性應(yīng)優(yōu)于進(jìn)口同類比對(duì)試劑。對(duì)照組以比對(duì)法結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，共有1例陽(yáng)性（閔行119號(hào)，0.3mg/L），99例陰性。該陽(yáng)性樣本D-DDOT檢測(cè)亦為0.3mg/L，其它99例D-DDOT檢測(cè)均為陰性，符合率100％。在列入統(tǒng)計(jì)的全部234例樣本中，以比對(duì)法(NycoCard)為標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果：陽(yáng)性符合率=93.3%陰性符合率=100%總符合率=97.4%配對(duì)卡方檢測(cè)結(jié)果顯示兩者結(jié)果在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著差別；Kappa值0.945（＞0.8），具有非常好的一致性。以比對(duì)法陽(yáng)性為標(biāo)準(zhǔn)，D-DDOT的陽(yáng)性符合率雖為93.3%，但2個(gè)醫(yī)院對(duì)陽(yáng)性不符病例（共6例）追蹤結(jié)果均支持D-DDOT的可靠性。D-DDOT與比對(duì)法(NycoCard)6例陽(yáng)性不符結(jié)果序號(hào)D-DDOT(mg/L)比對(duì)法(mg/L)追蹤診斷閔行0.10.9肺炎，高血壓，非血栓病閔行0.10.3糖尿病，肺炎，非血栓病閔行0.20.3胰頭癌，非血栓病閔行0.10.4上消化道出血，肝硬化，非血栓病岳陽(yáng)＜0.10.4氣管炎急性發(fā)作，非血栓病岳陽(yáng)0.11.1高血壓，心臟病，非血栓病2、對(duì)照組均為健康體檢人群共100例（閔行醫(yī)院40例，岳陽(yáng)醫(yī)院60例）。該組為隨機(jī)體檢人群，未進(jìn)行挑選，年齡分布在16-85歲，平均年齡為45.4歲。以比對(duì)法結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，共有1例陽(yáng)性（閔行119號(hào)，0.3mg/L），99例陰性。該陽(yáng)性樣本D-DDOT檢測(cè)亦為0.3mg/L，其它99例D-DDOT檢測(cè)均為陰性，符合率100％。100例健康人D-二聚體讀數(shù)分布如下：在兩家醫(yī)院進(jìn)行的共100例健康體檢人群的臨床研究中，二法99％的健康人D-二聚體讀數(shù)均＜0.3mg/ml，表明D-DDOT與比對(duì)法一樣，所選的正常參考范圍＜0.3mg/L設(shè)置恰當(dāng)，滿足臨床需要。D-DDOT陽(yáng)性符合率=a/(a+c)=93.3%D-DDOT陰性符合率=d/(b+d)=100%D-DDOT總符合率＝(a+d)/(a+b+c+d)=97.4%閔行醫(yī)院和岳陽(yáng)醫(yī)院的統(tǒng)計(jì)四格表分別進(jìn)行配對(duì)卡方檢驗(yàn)，兩者P均大于0.05。三、結(jié)論上海市閔行區(qū)中心醫(yī)院和上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院的臨床研究結(jié)果表明上海奧普生物醫(yī)藥有限公司申請(qǐng)臨床研究的D-二聚體檢測(cè)試劑盒(膠體金法)和比對(duì)法NycoCardD-二聚體單一試劑盒在D-二聚體測(cè)定上有良好等效性，引用的正常人參考范圍（＜0.3mg/L）恰當(dāng)，D-DDOT可以與比對(duì)法一樣，在臨床用于排除深靜脈血栓、肺栓塞和血管內(nèi)彌漫性凝血，滿足臨床應(yīng)用需要。以比對(duì)法陽(yáng)性為標(biāo)準(zhǔn)，D-DDOT的陽(yáng)性符合率雖為93.3%，但2個(gè)醫(yī)院對(duì)陽(yáng)性不符病例（共6例）追蹤結(jié)果均支持D-DDOT的可靠性，提示在本研究D-DDOT特異性應(yīng)優(yōu)于同類比對(duì)試劑。檢測(cè)血漿D-二聚體新金標(biāo)斑點(diǎn)滲濾法試劑盒的臨床適用性（摘要）上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院崇明分院檢驗(yàn)科張莉本研究對(duì)國(guó)產(chǎn)新研制的膠體金法D-二聚體試劑盒作了性能評(píng)價(jià)，并將其與挪威進(jìn)口試劑盒的臨床測(cè)試結(jié)果進(jìn)行了比較。一、材料與方法儀器與試劑D-二聚體檢測(cè)試劑盒（膠體金法）及配套UppergoldU2金標(biāo)斑點(diǎn)法定量讀數(shù)儀和D-DDOT試劑，質(zhì)控品均由上海奧普生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)。比對(duì)用挪威NycoCard公司生產(chǎn)D-二聚體試劑盒及配套測(cè)讀儀NycoCardReaderⅡ。234份臨床收集的新鮮血漿標(biāo)本，作了線性、精密度（CV）、回收率并用統(tǒng)計(jì)軟件作了分析。結(jié)果一、試劑盒性能評(píng)價(jià)線性評(píng)價(jià)：回歸方程為：Y=0.9791X+0.0684，γ=0.998。此結(jié)果顯示，該試劑D-D在0.3-3.0mg/范圍內(nèi)線性良好。精密度總批內(nèi)及批間精密度分別為10.77%和12.81%?？偦厥章蕿?01.3%。二、臨床標(biāo)本比對(duì)結(jié)果：234例樣本中，二者陽(yáng)性符合率為95.5％，陰性符合率為100％，總符合率為98.3％。D-DDOT和Nycocard試劑盒結(jié)果具有非常好的一致性。討論目前,D-二聚體的臨床檢測(cè)主要應(yīng)用街排除靜脈血栓栓塞(VTE),其中包括了DVT和PE。目前快速D-二聚體測(cè)定已作為DVT診斷的首選項(xiàng)目。D-二聚體還是早期診斷彌散性血管內(nèi)凝血（DIC）較敏感的指標(biāo)。這對(duì)血栓性疾病的診斷，尤其是對(duì)于低臨床概率的排除性診斷具有重要的意義。目前D-二聚體的檢測(cè)沒(méi)有國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品，各公司的標(biāo)準(zhǔn)品不統(tǒng)一、不通用，通常只適合于與其配套的檢測(cè)系統(tǒng)的自身校正。另外，由于各個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)所使用的免疫抗體差異較大，抗原決定簇各有不同，從而造成不同的檢測(cè)方法之間數(shù)據(jù)差異很大，其陽(yáng)性率、敏感性、特異性均不同，甚至對(duì)于同一個(gè)樣本（枸櫞酸抗凝血漿）的讀數(shù)亦存在較大差異。D-二聚體項(xiàng)目目前公認(rèn)的敏感度在90％以上，而特異性為40％～60％左右[7]，因此診斷疾病時(shí)，其意義主要在于陰性結(jié)果，即它是用于排除性的診斷而非確診性的診斷。其陰性符合率達(dá)到100%，,陰陽(yáng)不符的四例病例均為Nycocard試劑盒陽(yáng)性而D-DDOT陰性，對(duì)于注重陰性排除試驗(yàn)的D-二聚體檢測(cè)項(xiàng)目，這樣的結(jié)果顯示出D-DDOT更具臨床適用性。已上市的23種D-二聚體檢測(cè)試劑盒之間的比對(duì)評(píng)估，它們的Spearman等級(jí)相關(guān)系數(shù)在0.794-0.993之間。而D-DDOT與NycoCard的Spearman系數(shù)為0.87，說(shuō)明其與國(guó)際知名試劑盒等效。以上三項(xiàng)臨床比對(duì)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)指標(biāo)和對(duì)試劑盒基本性能的評(píng)價(jià)結(jié)果均顯示D-DDOT完全能夠滿足臨床的需要。本文摘自：核心醫(yī)學(xué)期刋“檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)”2010年1月第1期D-二聚體檢測(cè)試劑盒(膠體金法)操作規(guī)程（SOP）一、項(xiàng)目名稱檢驗(yàn)方法名稱D-二聚體檢測(cè)試劑盒(膠體金法)D-DDOT英文名：D-DimerassaybyDIGFAmethod二、方法學(xué)原理反應(yīng)原理為固相雙抗體夾心法免疫試驗(yàn)。待測(cè)樣品中所含的D-二聚體，能為固相在膜上的D-二聚體抗體特異性地捕獲，然后由另一個(gè)D-二聚體單抗-膠體金綴合物標(biāo)記，呈紅色斑點(diǎn)，斑點(diǎn)紅色強(qiáng)度與樣品中D-二聚體濃度呈正比，可用U2金標(biāo)斑點(diǎn)法定量讀數(shù)儀測(cè)定。三、試劑品牌、規(guī)格、內(nèi)含物：包裝規(guī)格：20人份/盒D-二聚體定量檢測(cè)試劑盒(膠體金法)組份名稱主要活性成分及濃度數(shù)量1.反應(yīng)板D-二聚體抗體、致敏濃度0.5-1.5mg/ml20塊2.封閉液1%牛血清白蛋白(BSA)，pH7.4PBS緩沖液1×3.0ml3.洗滌液pH7.4PBS緩沖液1×7.0ml4.金標(biāo)液凍干品D-二聚體單抗膠體金綴合物、1%BSA2×1.1ml5.金標(biāo)液凍干品復(fù)溶液雙蒸水，0.66%NaCl1×3.0ml表中溶液分別以0.5-1.5mg/ml疊氮鈉防腐。四、儀器品牌、型號(hào)金標(biāo)斑點(diǎn)法定量讀數(shù)儀UppergoldU2五、操作步驟1.從冷藏處取出試劑盒，室溫至少平衡半小時(shí)，在D-二聚體金標(biāo)液凍干品中，準(zhǔn)確加入D-二聚體金標(biāo)凍干品復(fù)溶液1.1ml搖勻。2.將D-二聚體反應(yīng)板平放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)，在反應(yīng)孔內(nèi)滴加2滴D-二聚體封閉液，待完全滲入。3.使用潔凈吸頭準(zhǔn)確吸取100μl枸櫞酸抗凝血漿，加到反應(yīng)板中，待完全滲入后，加2滴D-二聚體洗滌液。4.待洗滌液完全滲入，使用潔凈吸頭準(zhǔn)確加入D-二聚體膠體金溶液100μl。5.待完全滲入后，加4滴D-二聚體洗滌液。6.立刻在U2金標(biāo)定量?jī)xD-二聚體項(xiàng)目下測(cè)讀，測(cè)讀時(shí)間不宜超過(guò)5分鐘。六、正常參考值本試劑盒推薦正常人的預(yù)期讀數(shù)應(yīng)＜0.3mg/L。七、臨床意義本產(chǎn)品在UppergoldU2金標(biāo)斑點(diǎn)法定量讀數(shù)儀上可快速測(cè)定血漿中的纖維蛋白降解產(chǎn)物D-二聚體，是深靜脈血栓、肺栓塞、彌漫性血管內(nèi)凝血的陰性排除試驗(yàn)，屬即時(shí)檢驗(yàn)(POCT)類體外診斷試劑。檢測(cè)結(jié)果可在3分鐘內(nèi)獲得，讀數(shù)范圍為0.1-5.0mg/L，適用于醫(yī)院門(mén)急診、重癥監(jiān)護(hù)病房等需快速測(cè)定D-二聚體的場(chǎng)所。D-Dimer結(jié)果以D-二聚體濃度mg/L表達(dá)，如要用纖維蛋白原相當(dāng)單位(FEU)表示，則應(yīng)乘以2。