堿性磷酸酶活性測定

血清堿性磷酸酶活性測定授課教師：生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)CQMU2008實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)血清堿性磷酸酶活性測定的原理及方法2.了解血清堿性磷酸酶活性測定的臨床意義基本概念酶活性：即酶催化化學(xué)反應(yīng)的能力。酶的活性通常以活性單位表示。它反映在規(guī)定的條件下，酶促反應(yīng)在單位時(shí)間內(nèi)（秒、分或小時(shí)）生成一定量的產(chǎn)物（mg、μg、μmol）或消耗一定量的底物所需的酶量?；靖拍蠲富钚詥挝皇呛饬棵笖?shù)量的尺度，同一種酶由于實(shí)驗(yàn)方法、測定條件不同，酶活性單位的規(guī)定也不同。在相同測定條件下，酶活性單位越大，表示酶的含量越高，酶促反應(yīng)速度越快。慣用單位：酶活性測定方法的建立者所規(guī)定的單位。國際單位(IU)：1IU指在規(guī)定條件（最適pH，最適底物濃度）下，每分鐘轉(zhuǎn)化1

mol底物的酶量。Katal單位：1Katal指在規(guī)定條件下，每秒鐘轉(zhuǎn)化1mol底物的酶量。1Katal=60×106IU本實(shí)驗(yàn)以血清在37℃，pH為10的條件下，與AKP底物液作用30min，每生成1mg酚所需的酶量為1個(gè)酶活性單位。實(shí)驗(yàn)原理堿性磷酸酶（AKP）在堿性條件下催化磷酸苯二鈉水解，釋放出酚和磷酸，酚在堿性溶液中與4-氨基安替比林作用，經(jīng)鐵氰化鉀氧化形成紅色的醌類化合物。堿性磷酸酶磷酸苯二鈉磷酸+酚+4-氨基氨替比林鐵氰化鉀醌類化合物實(shí)驗(yàn)原理堿性磷酸酶：一組在堿性條件下水解磷酸酯鍵的酶類。廣泛分布在人體的骨、腎、腸、血清、膽汁等部位，以骨骼，牙齒、腎和肝中含量較多。正常人血清中的AKP主要來源于骨骼、肝膽和腸道。方法評價(jià)優(yōu)點(diǎn)：靈敏度較高，顯色穩(wěn)定，不需去蛋白，操作簡單、快速；缺點(diǎn)：準(zhǔn)確度和精密度都較低,受膽紅素和溶血的干擾。實(shí)驗(yàn)材料與儀器器材：新鮮血清、移液器、試管及試管架、吸量管、恒溫水浴箱、分光光度計(jì)

移液器

1.調(diào)刻度

2.取樣

注意：加不同物質(zhì)換

槍頭實(shí)驗(yàn)材料與儀器試劑盒：1.混合液：磷酸苯二鈉、4-氨基安替比林2.標(biāo)準(zhǔn)液：已知濃度的酚溶液3.樣品：血清4.蒸餾水5.顯色劑:高鐵氰化鉀試劑空白標(biāo)準(zhǔn)測定蒸餾水（ul）50——標(biāo)準(zhǔn)液（ul）—50—樣品（ul）——50混合液（ml）111充分混勻，37℃水浴30min顯色劑（ml）222充分混勻，顯色3min，空白調(diào)“0”，510nm比色A0？？實(shí)驗(yàn)步驟注意事項(xiàng)1.酶加量準(zhǔn)確2.水浴時(shí)間準(zhǔn)確結(jié)果計(jì)算C測=A測/A標(biāo)×C標(biāo)參考范圍成人：24-92u/L兒童：35-140u/L臨床意義

血清AKP測定可用于骨骼系統(tǒng)及肝膽系統(tǒng)疾病的輔助診斷。是臨床常做的酶類檢驗(yàn)項(xiàng)目之一。活性升高

——骨病、惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移、佝僂病、骨軟化、骨折愈合期、成骨細(xì)胞瘤